Table 1 shows that in cell-free med

Table 1 shows that in cell-free media ammonia
was :0.53 mM in the DMEM-4 mM Gln. In contrast, ammonia in the DMEM-4 mM L-Ala-LGln was below the detection limit. Following incubation for 48 h at 37°C, the ammonia levels rose in all media. In DMEM-Gln, the ammonia content was 66% higher than that measured in the same medium at day 0. The addition of either undialyzed or dialyzed FCS or Ultroser G accounted for elevation in the ammonia level by100–110%. In the media with L-Ala-L-Gln and serum supplements, the net ammonia values were much lower and represented about one third of the respective values of the media with Gln and serum supplements. Ammonia levels were higher in cell culture media with Gln than in those with L-Ala-LGln. However, the values of metabolic ammonia were very similar for both Gln- and L-Ala-L-Glncontaining media and this was irrespective of the presence of any cell growth supplements. Moreover, metabolic ammonia was 23% higher in DMEM-L-Ala-L-Gln+5% FCS than metabolic ammonia in DMEM-Gln+5% FCS and the respective ratios of metabolic ammonia/DNA reflected the same tendency (i.e. 0.046 vs 0.029). In summary, the most conspicuous finding in the experiments presented in Table 1 was that metabolic ammonia is produced at equal and even higher amounts in 4 mM L-Ala-L-Gln- than in 4 mM Gln-containing media and this was irrespective of cell growth supplements such as undialyzed or dialyzed FCS or Ultroser G. We assumed, therefore, that less dipeptide in the culture medium should account for less metabolic ammonia and eventually, a better cell growth. For this purpose, we cultured cells for periods extending up to 96 h in DMEM containing 0.25–2 mM L-Ala-L-Gln. Effectively, Fig. 1B shows that a better growth takes place but this is restricted to certain low concentrations of the dipeptide (0.25–0.50 mM) and to the culture period between 48 and 96 h. In
contrast, in 48 h cell cultures, the BV-2 cells grew slightly better with 4 mM Gln than with L-Ala-LGln (Fig. 1B), even though the respective levels of metabolic ammonia at 4 mM Gln were higher than those at 0.25–0.50 mM L-Ala-L-Gln (Fig. 1A). In this regard, our data demonstrate that using the dipeptide becomes advantageous in the later phases (i.e. 48–96 h) of the BV-2 cell cultures. Fig. 1C shows that the ratios of metabolic ammonia/DNA exhibit the same profile of dose-response dependence as presented on Fig. 1A. This indicates that the BV-2 cells are relatively poorly sensitive to
ammonia. When taken together with reported varying sensitivity of other cell types and lines to the growth inhibition of ammonia (Mc Limans et al., 1981; Hosoi et al., 1988), our results on BV-2 cells suggest that determining the minimal requirement for L-Ala-L-Gln may be useful for obtaining better cell growth. In addition to cell growth, important cell functions, such as phagocytosis, lysosomal enzyme activity and secretion of acute-phase proteins, are affected by elevated ammonia concentrations. This may occur without any noticeable alteration in the light-microscopic morphology of
the cells (Atanassov et al., 1994). It is therefore important, when establishing cell culture conditions, to try not only to improve the cell growth, but also to keep the level of ammonia as low as possible
In conclusion, the example of the BV-2 cells demonstrates that replacing Gln by L-Ala-L-Gln at relatively low concentrations than the usual 4 mM L-Ala-L-Gln in commercial media (such as GlutamaxI), reduces considerably metabolic ammonia and may have a beneficial effect on cell proliferation. After appropriate determination of the optimal
concentration of this dipeptide in any particular case, our approach could be extended to various types of cells thereby improving already established protocols for cell culture experiments.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตารางที่ 1 แสดงให้เห็นว่าในสื่อฟรีเซลล์แอมโมเนียแก้ไข: DMEM-4 มิลลิเมตร Gln 0.53 มม. ตรงกันข้าม แอมโมเนียในมม. DMEM-4 L-Ala-LGln เป็นขีดจำกัดการตรวจสอบ กกไข่ต่อไปนี้สำหรับ 48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37° C ระดับแอมโมเนียกุหลาบในทุกสื่อ ใน DMEM-Gln เนื้อหาแอมโมเนียเป็น 66% สูงกว่าที่วัดในสื่อเดียวกันวัน 0 การเพิ่มของ FCS undialyzed หรือ dialyzed หรือ Ultroser G คิดการยกระดับสิทธิ์ในแอมโมเนียระดับ by100 – 110% ในสื่อกับผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร L Ala L Gln และเซรั่ม ค่าแอมโมเนียสุทธิต่ำกว่ามาก และแสดงประมาณหนึ่งในสามของค่านั้น ๆ ของสื่อกับ Gln และเซรั่มผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร ระดับแอมโมเนียสูงขึ้นในเซลล์วัฒนธรรมสื่อกับ Gln มากกว่าในผู้ที่มี L-Ala-LGln อย่างไรก็ตาม ค่าของแอมโมเนียที่เผาผลาญได้คล้ายกันมากทั้งสื่อ Gln - และ L-Ala-L-Glncontaining และนี้คือไม่คำนึงถึงสถานะของผลิตภัณฑ์เสริมอาหารใด ๆ เจริญเติบโตของเซลล์ นอกจากนี้ แอมโมเนียเผาผลาญได้มากกว่าใน DMEM-L-Ala-L-Gln + 5% FCS เผาผลาญแอมโมเนียใน DMEM Gln + 5% FCS 23% และอัตราส่วนตามลำดับของแอมโมเนียและดีเอ็นเอที่เผาผลาญสะท้อนแนวโน้มเดียวกัน (เช่น 0.046 vs 0.029) ในสรุป การค้นพบที่ชัดเจนมากที่สุดในการทดลองแสดงในตารางที่ 1 เป็นว่า แอมโมเนียเผาผลาญผลิตในจำนวนเท่ากัน และสูงขึ้นใน 4 มม. L-Ala-L-Gln - กว่าใน 4 มม. Gln ที่ประกอบด้วยสื่อและนี้เป็นโดยไม่คำนึงถึงอาหารเสริมเซลล์เจริญเติบโตเช่น undialyzed หรือ dialyzed FCS หรือ Ultroser G. เราสันนิษฐาน ดังนั้น ว่า dipeptide น้อยในสื่อวัฒนธรรมควรบัญชีสำหรับแอมโมเนียเผาผลาญน้อยลงและในที่สุด การเติบโตของเซลล์ดีขึ้น สำหรับวัตถุประสงค์นี้ เราล้างเซลล์สำหรับรอบระยะเวลาที่ขยายถึง 96 h ใน DMEM ที่ประกอบด้วย 0.25 – 2 มม. L-Ala-L-Gln อย่างมีประสิทธิภาพ รูป 1B แสดงว่า เจริญเติบโตดีขึ้น แต่นี้จำกัดไว้เฉพาะบางความเข้มข้นต่ำของ dipeptide (0.25-0.50 มม.) และ กับวัฒนธรรมระยะเวลา 48 และ 96 h. ในความเปรียบต่าง ในวัฒนธรรม 48 ชั่วโมงเซลล์ เซลล์ BV-2 เติบโตขึ้นเล็กน้อย 4 มม. Gln กว่ากับ L-Ala-LGln (รูปที่ 1B), แม้ว่าแต่ละระดับของแอมโมเนียเผาผลาญ 4 มม. Gln ถูกสูงกว่าที่ 0.25-0.50 มม. L-Ala-L-Gln (รูปที่ 1A) ในเรื่องนี้ ข้อมูลของเราแสดงให้เห็นว่า ใช้การ dipeptide กลายเป็นประโยชน์ในขั้นตอนภายหลัง (เช่น 48-96 ชั่วโมง) ของวัฒนธรรมเซลล์ BV-2 รูปที่ 1C แสดงว่า อัตราส่วนของแอมโมเนียและดีเอ็นเอที่เผาผลาญมีโพรไฟล์เดียวกันของการพึ่งพายาตอบสนองตามที่แสดงในรูป 1A บ่งชี้ว่า เซลล์ BV 2 มีค่อนข้างไม่ดีความไวต่อแอมโมเนีย เมื่อนำมาร่วมกับความไวที่แตกต่างกันรายงานบรรทัดและเซลล์ชนิดอื่น ๆ ในการยับยั้งการเจริญเติบโตของแอมโมเนีย (Mc Limans et al. 1981 Hosoi et al. 1988), ผลของเราบน BV-2 เซลล์แนะนำว่า การกำหนดความต้องการน้อยที่สุดสำหรับ L Ala L Gln อาจจะมีประโยชน์สำหรับการเจริญเติบโตของเซลล์ที่ดีได้รับการ นอกเหนือจากการเติบโตของเซลล์ เซลล์สำคัญฟังก์ชัน เช่น phagocytosis เอนไซม์ lysosomal และหลั่งโปรตีนระยะเฉียบพลัน ได้รับผลจากความเข้มข้นของแอมโมเนียสูง นี้อาจเกิดขึ้นโดยไม่เปลี่ยนแปลงใด ๆ อย่างเห็นได้ชัดในสัณฐานวิทยาด้วยกล้องจุลทรรศน์แสงของเซลล์ (Atanassov et al. 1994) จึง เมื่อสร้างเงื่อนไขวัฒนธรรมเซลล์ พยายามไม่เพียง เพื่อปรับปรุงการเจริญเติบโตของเซลล์ แต่ยัง จะทำให้ระดับของแอมโมเนียต่ำที่สุดสรุป ตัวอย่างของเซลล์ BV-2 อธิบายว่า แทน Gln โดย L--L Ala Gln ที่ความเข้มข้นค่อนข้างต่ำกว่า mM 4 ปกติ L Ala L Gln ในสื่อเชิงพาณิชย์ (เช่น GlutamaxI), ช่วยลดแอมโมเนียเผาผลาญอย่างมาก และอาจมีผลประโยชน์ในเซลล์ หลังจากกำหนดเหมาะสมที่เหมาะสมความเข้มข้นของ dipeptide นี้ในกรณีใด ๆ เราอาจขยายให้ชนิดต่าง ๆ ของเซลล์จึงช่วยเพิ่มโพรโทคออยู่แล้วสำหรับการทดลองวัฒนธรรมเซลล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตารางที่ 1 แสดงให้เห็นว่าในมือถือฟรีแอมโมเนียสื่อ
คือ: 0.53 มม DMEM-4 มิลลิ Gln ในทางตรงกันข้ามแอมโมเนียใน DMEM-4 mm L-Ala-LGln ต่ำกว่าขีด จำกัด ของการตรวจสอบ ต่อไปนี้การบ่มเป็นเวลา 48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสระดับแอมโมเนียเพิ่มขึ้นในทุกสื่อ ใน DMEM-Gln เนื้อหาแอมโมเนียเป็น 66% สูงกว่าที่วัดในสื่อเดียวกันในวัน 0. นอกเหนือจากทั้ง FCS undialyzed หรือ dialyzed หรือ Ultroser G คิดเป็นระดับความสูงในระดับแอมโมเนีย by100-110% ในสื่อที่มี L-Ala-L-Gln และซีรั่มผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร, ค่าแอมโมเนียสุทธิต่ำกว่ามากและเป็นตัวแทนประมาณหนึ่งในสามของค่าที่เกี่ยวข้องของสื่อที่มี Gln และอาหารเสริมเซรั่ม ระดับแอมโมเนียสูงขึ้นในเซลล์เพาะเลี้ยงด้วย Gln กว่าในผู้ที่มี L-Ala-LGln อย่างไรก็ตามค่าการเผาผลาญของแอมโมเนียมีความคล้ายคลึงกันมากสำหรับทั้งสื่อ Gln- และ L-Ala-L-Glncontaining และนี่คือโดยไม่คำนึงถึงการปรากฏตัวของผลิตภัณฑ์เสริมอาหารเจริญเติบโตของเซลล์ใด ๆ นอกจากนี้แอมโมเนียเผาผลาญเป็น 23% สูงขึ้นใน DMEM-L-Ala-L-Gln + 5% FCS กว่าแอมโมเนียเผาผลาญใน DMEM-Gln + 5% FCS และอัตราส่วนที่เกี่ยวข้องของการเผาผลาญแอมโมเนีย / ดีเอ็นเอสะท้อนให้เห็นถึงแนวโน้มที่เดียวกัน (เช่น 0.046 VS 0.029) โดยสรุปการค้นพบที่เห็นได้ชัดเจนที่สุดในการทดลองที่นำเสนอในตารางที่ 1 ก็คือว่าแอมโมเนียเผาผลาญอาหารที่ผลิตในปริมาณที่เท่ากันและแม้กระทั่งที่สูงขึ้นใน 4 mm L-Ala-L-Gln- กว่าใน 4 สื่อมิลลิ Gln ที่มีและนี่คือโดยไม่คำนึงถึง อาหารเสริมเจริญเติบโตของเซลล์เช่น FCS undialyzed หรือ dialyzed หรือ Ultroser กรัมเราสันนิษฐานได้ว่า Dipeptide น้อยลงในอาหารเลี้ยงเชื้อควรบัญชีสำหรับแอมโมเนียเผาผลาญน้อยลงและในที่สุดเจริญเติบโตของเซลล์ที่ดีขึ้น เพื่อจุดประสงค์นี้เราเพาะเลี้ยงเซลล์สำหรับระยะเวลาที่ขยายได้ถึง 96 ชั่วโมงใน DMEM มี 0.25-2 mm L-Ala-L-Gln ได้อย่างมีประสิทธิภาพรูป 1B แสดงให้เห็นว่าการเจริญเติบโตที่ดีกว่าที่จะเกิดขึ้น แต่จะมีการ จำกัด ระดับความเข้มข้นต่ำบางอย่างของ Dipeptide (0.25-0.50 มิลลิเมตร) และระยะเวลาการเลี้ยงระหว่าง 48 และ 96 ชั่วโมง ใน
ทางตรงกันข้ามใน 48 ชั่วโมงเซลล์เพาะเลี้ยงที่ BV-2 เซลล์ขยายตัวดีขึ้นเล็กน้อยมี 4 มิลลิ Gln กว่าด้วย L-Ala-LGln (รูปที่ 1B.) แม้ว่าระดับที่เกี่ยวข้องของแอมโมเนียการเผาผลาญที่ 4 มิ Gln สูงกว่า ที่ 0.25-0.50 mm L-Ala-L-Gln (รูป. 1A) ในเรื่องนี้ข้อมูลของเราแสดงให้เห็นว่าการใช้ Dipeptide จะกลายเป็นข้อได้เปรียบในระยะต่อมา (เช่น 48-96 H) ของ BV-2 เซลล์เพาะเลี้ยง มะเดื่อ. 1C แสดงให้เห็นว่าอัตราส่วนของการเผาผลาญแอมโมเนีย / ดีเอ็นเอแสดงรายละเอียดของการพึ่งพาอาศัยเดียวกันปริมาณการตอบสนองตามที่นำเสนอในรูป 1A นี้บ่งชี้ว่า BV-2 เซลล์ที่ค่อนข้างไม่ดีไวต่อ
แอมโมเนีย เมื่อนำมารวมกันกับรายงานความไวที่แตกต่างของเซลล์ชนิดอื่น ๆ และสายที่จะยับยั้งการเจริญเติบโตของแอมโมเนีย (Mc Limans et al, 1981;.. Hosoi, et al, 1988) ผลของเราใน BV-2 เซลล์ชี้ให้เห็นว่าการกำหนดความต้องการน้อยที่สุดสำหรับ L-Ala-L-Gln อาจจะมีประโยชน์สำหรับการได้รับการเติบโตของเซลล์ที่ดีขึ้น นอกจากนี้ในการเจริญเติบโตของเซลล์, การทำงานของเซลล์ที่สำคัญเช่น phagocytosis, เอนไซม์ lysosomal และการหลั่งของโปรตีนเฉียบพลันเฟสรับผลกระทบจากความเข้มข้นของแอมโมเนียสูง นี้อาจเกิดขึ้นได้โดยไม่ต้องมีการเปลี่ยนแปลงที่เห็นได้ชัดเจนใด ๆ ในลักษณะทางสัณฐานวิทยาแสงกล้องจุลทรรศน์ของ
เซลล์ (Atanassov et al., 1994) ดังนั้นจึงเป็นเรื่องสำคัญเมื่อการสร้างเงื่อนไขการเพาะเลี้ยงเซลล์เพื่อพยายามที่ไม่เพียง แต่จะปรับปรุงการเจริญเติบโตของเซลล์ แต่ยังเพื่อให้ระดับของแอมโมเนียที่ต่ำที่สุดเท่าที่เป็นไปได้
ในการสรุปตัวอย่างของ BV-2 เซลล์แสดงให้เห็นว่าการเปลี่ยน Gln โดย L -Ala-L-Gln ที่ระดับความเข้มข้นที่ค่อนข้างต่ำกว่าปกติ 4 mm L-Ala-L-Gln ในสื่อเชิงพาณิชย์ (เช่น GlutamaxI) ช่วยลดการเผาผลาญมากแอมโมเนียและอาจมีผลประโยชน์ในการเพิ่มจำนวนเซลล์ หลังจากที่ความมุ่งมั่นที่เหมาะสมของที่ดีที่สุด
ความเข้มข้นของ Dipeptide นี้ในกรณีใด ๆ โดยเฉพาะวิธีการของเราอาจจะขยายไปยังประเภทต่างๆของเซลล์จึงช่วยเพิ่มโปรโตคอลที่จัดตั้งขึ้นแล้วสำหรับการทดลองเพาะเลี้ยงเซลล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตารางที่ 1 แสดงให้เห็นว่า สื่อในการสังเคราะห์แอมโมเนียคือ : 0.53 มิลลิเมตร ใน gln มม. dmem-4 . ในทางตรงกันข้าม แอมโมเนียใน l-ala-lgln มม. dmem-4 ต่ำกว่าขีดจำกัด . ต่อไปนี้บ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ระดับแอมโมเนียที่เพิ่มขึ้นในสื่อทั้งหมด ใน dmem gln , ปริมาณแอมโมเนียเป็น 66 % มากกว่าวัดในตัวกลางเดียวกันในวันที่ 0 นอกจากนี้อย่างใดอย่างหนึ่งหรือผ่าน undialyzed FCS หรือ ultroser กรัมคิดเป็นเพิ่มขึ้นในระดับแอมโมเนีย by100 – 110 % ในสื่อและ l-ala-l-gln เซรั่มอาหารเสริมแอมโมเนียสุทธิมีค่าที่ต่ำกว่ามากและแสดงประมาณหนึ่งในสามของค่าที่เกี่ยวข้องของสื่อ gln และอาหารเสริม เซรั่ม ระดับแอมโมเนียสูงในเซลล์วัฒนธรรมสื่อกับ gln มากกว่าในผู้ที่มี l-ala-lgln . อย่างไรก็ตาม ค่าของแอมโมเนียการเผาผลาญคล้ายกันมากทั้ง gln - l-ala-l-glncontaining สื่อและนี้คือไม่มีข้อมูลเพิ่มเติมใด ๆ การเจริญเติบโตของเซลล์ นอกจากนี้ แอมโมเนีย การเผาผลาญอาหารเป็น 23% สูงกว่าใน dmem-l-ala-l-gln + 5% FCS กว่าสลายแอมโมเนียใน dmem gln + 5 % และอัตราส่วนที่เกี่ยวข้องของ FCS ดีเอ็นเอแอมโมเนีย / การเผาผลาญอาหาร สะท้อนแนวโน้มเดียวกัน ( เช่น 0.029 ( VS ) ในการสรุป , การค้นหาที่เด่นที่สุดในการทดลองที่แสดงในตารางที่ 1 ที่สลายแอมโมเนียที่ผลิตที่เท่าเทียมกันและปริมาณสูงขึ้นใน l-ala-l-gln - 4 มิลลิเมตร มากกว่าใน gln 4 มม. ที่มีสื่อและนี้คือไม่เสริมการเจริญเติบโตของเซลล์ เช่น undialyzed หรือผ่าน ultroser FCS หรือ เราถือว่า ดังนั้น ไดเพปไทด์น้อยกว่า วัฒนธรรมสื่อควรบัญชีสำหรับแอมโมเนียการเผาผลาญอาหารน้อยลง และในที่สุดการเติบโตของเซลล์ดีขึ้น สำหรับวัตถุประสงค์นี้ เราเพาะเลี้ยงเซลล์สำหรับช่วงเวลาที่ขยายได้ถึง 96 ชั่วโมงใน dmem 0.25 –ประกอบด้วย 2 มม. l-ala-l-gln . ได้อย่างมีประสิทธิภาพ รูป 1B แสดงให้เห็นว่าการเจริญเติบโตที่ดีขึ้นจะเกิดขึ้นแต่เฉพาะบางความเข้มข้นต่ำของไดเปปไทด์ ( 0.25 - 0.50 มม. ) และวัฒนธรรม ช่วงระหว่าง 48 และ 96 ชั่วโมงในความคมชัดใน 48 ชั่วโมงเซลล์วัฒนธรรม เซลล์ bv-2 ขยายตัวดีขึ้นเล็กน้อยกับ gln 4 มิลกว่า l-ala-lgln ( รูปที่ 1A ) แม้ว่าแต่ละระดับของแอมโมเนียการเผาผลาญอาหารที่ gln 4 มม. สูงกว่า 0.25 - 0.50 มม. ที่ l-ala-l-gln ( รูปที่ 1A ) ทั้งนี้ ข้อมูลของเราแสดงให้เห็นว่า การใช้ไดเพปไทด์จะกลายเป็นประโยชน์ในขั้นตอนภายหลัง เช่น 48 และ 96 ชั่วโมง ) ของวัฒนธรรมเซลล์ bv-2 . ในรูปแสดงให้เห็นว่าอัตราส่วนการสลายแอมโมเนีย / ดีเอ็นเอโพรไฟล์เดียวกันของการจัดแสดงความคิดเห็นที่นำเสนอในรูปที่ 1A ซึ่งแสดงว่าเซลล์ bv-2 ค่อนข้างไม่ดีแพ้แอมโมเนีย เมื่อรับประทานร่วมกับรายงานตามความไวของชนิดของเซลล์อื่น ๆและเส้นเพื่อยับยั้งการเจริญเติบโตของแอมโมเนีย ( MC limans et al . , 1981 ; ค่ะ et al . , 1988 ) , ผลของเราใน bv-2 เซลล์แนะนำให้กำหนดความต้องการที่น้อยที่สุดสำหรับ l-ala-l-gln อาจจะมีประโยชน์สำหรับการเจริญเติบโตของเซลล์ดีขึ้น นอกจากการเติบโตของเซลล์เซลล์ฟาโกไซโตซิส หน้าที่สำคัญ เช่น เอ็นไซม์ lysosomal เฉียบพลันระยะและการหลั่งโปรตีน ได้รับผลกระทบ โดยยกระดับ แอมโมเนียที่ความเข้มข้น นี้อาจเกิดขึ้นโดยไม่มีการเปลี่ยนแปลงที่เห็นได้ชัดในลักษณะของกล้องจุลทรรศน์แสงเซลล์ ( atanassov et al . , 1994 ) มันจึงเป็นเรื่องสำคัญ เมื่อสร้างสภาวะการเพาะเลี้ยงเซลล์ เพื่อพยายามที่จะไม่เพียง แต่จะเพิ่มการเจริญเติบโตของเซลล์ แต่ยังเพื่อให้ระดับของแอมโมเนียต่ำเท่าที่ทำได้สรุป ตัวอย่างของเซลล์ bv-2 สาธิตแทน gln โดย l-ala-l-gln ที่ความเข้มข้นต่ำกว่าปกติ 4 มม. l-ala-l-gln ในสื่อเชิงพาณิชย์ ( เช่น glutamaxi ) มากจะช่วยลดการสลายแอมโมเนีย และอาจมีผลประโยชน์ต่อเซลล์ proliferation . หลังจากการกำหนดที่เหมาะสมของ เหมาะสมความเข้มข้นของไดเปปไทด์นี้ในกรณีใด ๆโดยเฉพาะ ระบบของเราสามารถขยายไปยังประเภทต่างๆของเซลล์เพื่อปรับปรุงเรียบร้อยแล้วโปรโตคอลสำหรับการทดลองเซลล์เพาะเลี้ยง