Agrobacterium-mediated transformati

Agrobacterium-mediated transformation has been the preferred system for transforming apples. Although transgenic lines have been obtained form a number of genotypes, the transformation efficiency was not high. Apple is highly heterozygous genetically, so its seedling populations segregate heavily. We speculate that a genotype with high regeneration capacity and sensitive to Agrobacterium could be screened from the seedling population of apple. In order to verify this hypothesis, we developed in vitro seedling clones of apple (Malus × domestica) and compared their regeneration capacity and susceptibility to Agrobacterium tumefaciens in this study. Royal Gala, a genotype had been widely used in apple transformation, was selected as the source of seeds. First, 10 clones with higher multiplication capacity and normal leaf shape and smooth leaf surface, named GL-1 to GL-10, were screened out from 100 in vitro seedling clones. The capacity of adventitious bud regeneration from leaf segments were compared among the ten clones, and the result showed that GL-3 exhibited extremely higher adventitious regeneration capacity. GL-3 was also compared with its parent on the regeneration capacity, and the data showed that the number of buds per explant of GL-3 was 2.6 fold higher than that of Royal Gala. The susceptibility of GL-3 to Agrobacterium was compared with Royal Gala by monitoring the transient expression of GUS in leaf segments. For GL-3, the percentage of explants with large GUS-positive patches was 46.7 ± 1.1%, which was obviously higher than that (25.1 ± 7.2%) of Royal Gala. After the leaf segments of GL-3 were transformed with A. tumefaciens strain EHA105 carrying the AtmiR156a antisense gene, the percentage of explants with kanamycin-resistant buds reached 27.5%. In conclusion, a genotype with high regeneration capacity and sensitive to Agrobacterium was screened out from the seedling population of apple, and this strategy could be applied in other perennial woody plants.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แปลง mediated อโกรแบคทีเรียมได้รับระบบที่ต้องการสำหรับการแปลงแอปเปิ้ล แม้ว่าถั่วเหลืองบรรทัดได้ถูกรับ ตัวเลขของแบบฟอร์ม ประสิทธิภาพการแปลงไม่สูง แอปเปิ้ลเป็น heterozygous สูงแปลงพันธุกรรม เพื่อของประชากรแหล่ง segregate มาก เราคาดการณ์ว่า อาจมีฉายลักษณะทางพันธุกรรมที่ มีกำลังการผลิต และความไวต่ออโกรแบคทีเรียมสูงฟื้นฟูจากประชากรแหล่งของแอปเปิ้ล เพื่อตรวจสอบสมมติฐานนี้ เราพัฒนาการเพาะเลี้ยงแหล่งโคลนของแอปเปิ้ล (Malus × domestica) และเปรียบเทียบการฟื้นฟูกำลังการผลิตและง่าย tumefaciens อโกรแบคทีเรียมในการศึกษานี้ งานรอยัล ลักษณะทางพันธุกรรมที่ได้รับกันอย่างแพร่หลายใช้ในการแปลงแอปเปิ้ล ถูกเลือกเป็นแหล่งที่มาของเมล็ดพันธุ์ ครั้งแรก โคลน 10 คูณความจุที่สูงกว่าใบปกติรูปร่าง และพื้น ผิวใบเรียบ ชื่อ GL-1 GL-10 ถูกฉายออกมาจากโคลนแหล่งเพาะเลี้ยง 100 กำลังการผลิตของ adventitious bud ฟื้นฟูจากเซ็กเมนต์ใบถูกเปรียบเทียบระหว่างโคลนสิบ และผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่า GL-3 จัดแสดงกำลังฟื้นฟู adventitious สูงมาก GL-3 ถูกเปรียบเทียบกับหลักความสามารถฟื้นฟูยัง และข้อมูลแสดงให้เห็นว่า จำนวนอาหารต่อ explant GL-3 ถูกพับสูงกว่าของรอยัลงาน 2.6 ไก่ GL 3 เพื่ออโกรแบคทีเรียมถูกเปรียบเทียบกับงานราช โดยการตรวจสอบนิพจน์แบบฉับพลันของ GUS ในกลุ่มใบไม้ สำหรับ GL-3 เปอร์เซ็นต์ของ explants กับแพทช์ GUS บวกขนาดใหญ่ขึ้น 46.7 ± 1.1% ซึ่งไม่แน่นอนสูงกว่านั้น (25.1 ± 7.2%) ของงานรอยัล หลังจากส่วนใบของ GL-3 ถูกแปลง ด้วยต้องใช้ A. tumefaciens EHA105 แบกยีน antisense AtmiR156a เปอร์เซ็นต์ของ explants กับกานามัยซินทนอาหารถึง 27.5% เบียดเบียน ลักษณะทางพันธุกรรมที่ มีกำลังการผลิต และความไวต่ออโกรแบคทีเรียมสูงฟื้นฟูถูกฉายออกมาจากประชากรแหล่งของแอปเปิ้ล และสามารถใช้กลยุทธ์นี้ในพืชวู้ดดี้ยืนต้นอื่น ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เชื้อ Agrobacterium ได้รับระบบที่ต้องการสำหรับการเปลี่ยนแอปเปิ้ล แม้ว่าสายการดัดแปรพันธุกรรมได้รับแบบฟอร์มจำนวนของสายพันธุ์ที่มีประสิทธิภาพการเปลี่ยนแปลงไม่สูง แอปเปิ้ลเป็นอย่างมาก heterozygous พันธุกรรมเพื่อให้ประชากรของต้นกล้าแยกอย่างหนัก เราคาดการณ์ว่ายีนที่มีความจุสูงและการฟื้นฟูความไวต่อ Agrobacterium จะได้รับการคัดเลือกจากประชากรต้นกล้าของแอปเปิ้ล เพื่อที่จะตรวจสอบสมมติฐานนี้เราพัฒนาในโคลนต้นกล้าเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อของแอปเปิ้ล (Malus domestica ×) และเมื่อเทียบกับกำลังการผลิตของพวกเขาและการฟื้นฟูความไวต่อการ Agrobacterium tumefaciens ในการศึกษานี้ รอยัล Gala, จีโนไทป์ได้รับการใช้กันอย่างแพร่หลายในการเปลี่ยนแปลงแอปเปิ้ลได้รับเลือกเป็นแหล่งที่มาของเมล็ด ครั้งแรกที่ 10 โคลนที่มีความจุสูงกว่าการคูณและรูปร่างใบปกติและผิวใบเรียบชื่อ GL-1 ถึง GL-10 ได้รับการคัดเลือกจาก 100 ในโคลนต้นกล้าการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ ความจุของการฟื้นฟูตาบังเอิญจากส่วนใบถูกนำมาเปรียบเทียบในหมู่สิบโคลนและผลที่ได้แสดงให้เห็นว่า GL-3 แสดงความจุฟื้นฟูบังเอิญที่สูงขึ้นอย่างมาก GL-3 ยังถูกเมื่อเทียบกับผู้ปกครองที่มีต่อการฟื้นฟูกำลังการผลิตและข้อมูลที่แสดงให้เห็นว่าจำนวนของตาต่อชิ้นส่วนของ GL-3 เป็น 2.6 เท่าสูงกว่าที่รอยัล Gala ความไวของ GL-3 Agrobacterium ถูกเมื่อเทียบกับรอยัล Gala โดยการตรวจสอบการแสดงออกชั่วคราวของ GUS ในส่วนใบ สำหรับ GL-3, ร้อยละของชิ้นส่วนที่มีแพทช์ GUS บวกขนาดใหญ่คือ 46.7 ± 1.1% ซึ่งเห็นได้ชัดว่าสูงกว่า (25.1 ± 7.2%) ของรอยัล Gala หลังจากที่ส่วนใบของ GL-3 ถูกเปลี่ยนด้วย EHA105 A. tumefaciens สายพันธุ์แบกยีน antisense AtmiR156a เปอร์เซ็นต์ของชิ้นส่วนที่มีตา KANAMYCIN ทนถึง 27.5% สรุปได้ว่ายีนที่มีความจุสูงและการฟื้นฟูความไวต่อ Agrobacterium ถูกคัดออกจากประชากรต้นกล้าของแอปเปิ้ลและกลยุทธ์นี้สามารถนำไปใช้ในพืชไม้ยืนต้นอื่น ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อโกรแบคทีเรียม ( แปลงได้รับระบบที่ต้องการเปลี่ยนแอปเปิ้ล แม้ว่าสายพันธุ์ได้รับแบบฟอร์มหมายเลขของพันธุ์ การแปลงประสิทธิภาพไม่สูงนัก แอปเปิ้ลเป็นอย่างสูงที่สร้างทางพันธุกรรมเพื่อต้นกล้าประชากรแยกอย่างหนักเราคาดการณ์ว่า จีโนไทป์ที่มีความจุสูงและอ่อนไหวต่อการคัดกรองจาก Agrobacterium เป็นต้นกล้าประชากรของแอปเปิ้ล เพื่อพิสูจน์สมมุติฐานนี้ เราพัฒนาในการเพาะต้นกล้าพันธุ์ของแอปเปิ้ล ( malus × domestica ) และการเปรียบเทียบความจุของพวกเขาและรวบรวม Agrobacterium tumefaciens ในการศึกษานี้ รอยัล กาล่าพันธุกรรมที่ได้รับการใช้กันอย่างแพร่หลายในการแปลงแอปเปิ้ลได้รับเลือกเป็นแหล่งที่มาของเมล็ด แรก 10 โคลนและรูปร่างใบคูณความจุสูงกว่าปกติและเรียบผิวใบ ชื่อ gl-1 เพื่อ gl-10 , ฉายออกมาจาก 100 ในหลอดทดลองของโคลน ความจุของปากดีบัดฟื้นฟูจากส่วนใบ เปรียบเทียบระหว่างโคลน 10และพบว่ามีการเพิ่มขึ้นมาก gl-3 ปากดีความจุ gl-3 ยังเทียบกับพ่อแม่ของตนในการฟื้นฟูศักยภาพ และข้อมูลพบว่า จำนวนหน่อต่อต่อของ gl-3 เป็น 2.6 เท่าสูงกว่าที่ของรอยัล กาล่า .ความไวของการจําลอง gl-3 เทียบกับหลวงงานโดยการตรวจสอบการแสดงออกของกัสชั่วคราวในส่วนของใบ สำหรับ gl-3 , ร้อยละของการเจริญเติบโตที่มีขนาดใหญ่บวกแพทช์เป็น 46.7 กัส± 1.1% ซึ่งเห็นได้ชัดที่สูงกว่า ( ราย± 7.2% ) ราชงาน หลังจากที่ใบ ส่วนของ gl-3 ถูกเปลี่ยนด้วยซีเครียดถ่ายยีนพบในสายพันธุ์ EHA105 แบก atmir156a ยีน antisense , ร้อยละของการเจริญเติบโตกับตาป้องกันนถึง 27.5 ล้านบาท สรุป จีโนไทป์ที่มีความจุสูงและอ่อนไหวต่อการจําลองฉายออกมาจากต้นกล้าประชากรของแอปเปิ้ล และกลยุทธ์นี้สามารถประยุกต์ใช้ในพรรณไม้ยืนต้นอื่น ๆ .