- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
2.3.2. Antibody–colloidal gold conj
2.3.2. Antibody–colloidal gold conjugate
The amount of coating antibody (polyclonal rabbit antibody for
polysaccharides of S. typhi O901) on the surface of the gold nanoparticles
was optimized from 75mg/L to 1200 mg/L. Solutions were
prepared from 15,000 mg/L stock solutions of the rabbit antibody
to S. typhi. An appropriate volume of stock solutionwas added into a
centrifuge tube containing 2.0mL of the colloidal gold solution. The
pH solutionwas adjusted to 8.0 under stirring andwas followed by
incubation at room temperature for 1 h. The absorbance at 519 nm
of these samples was recorded and plotted versus the amount of
coating antibody in order to determine the optimal amount of coating
antibody.
After obtaining the optimal amount of coating antibody, the
antibody–colloidal gold conjugate was prepared. The optimized
amount of polyclonal rabbit antibody for the polysaccharides of
S. typhi was added to 2mL of the colloidal gold solution. The solutionwas
then adjusted to pH 8.0 using Na2CO3 andwas followed by
incubation at room temperature for 1 h under stirring. Next, 100L
of 3% BSA solution was added to minimize nonspecific adsorption,
and the solutionwas incubated under stirring for an additional hour
at room temperature. The antibody–colloidal gold conjugate was
centrifuged at 15,000rpm for 10min. The soft sediment was collected,washed and suspended in PBS solution, where the conjugate
could be stored for more than 1 month at 4 ◦C.
2.4. Immunoassay procedure
The immunoassay procedure is shown in Fig. 1. First, 50L
of 125mg/L monoclonal antibody was added into the polystyrene
microwells and incubated at 37 ◦C for 2 h. Second, the solution was
removed, and the microwells were washed with PBS (pH 7.4) for
four times followed by the addition of 50L of 1% BSA solution to
block the active sites of microwells from nonspecific adsorption.
The microwells were incubated at 37 ◦C for 2 h. The PBS (pH 7.4)
washing step was repeated followed by the addition of 50L of S.
typhi into the microwells. After incubating at 37 ◦C for 1 h followed
by another PBS washing step, 50L of the antibody–colloidal gold
conjugate was added to the solution, which was incubated at 37 ◦C
for 1 h in order to obtain the sandwich reaction. After performing
four washing steps, 100L of copper-enhancer solution was
added to the solution, which was incubated at room temperature
for 10min. After the microwells were washed four times with doubly
distilled water, 100L of 1M nitric acid solution was added to
dissolve copper. Finally, the solution containing the released copper
ions was transferred into an electrochemical cell and diluted
to 3mL with doubly distilled water. The experiments were carried
out by anodic stripping voltammetry.
3. Results and discussion
3.1. Preparation of the antibody–colloidal gold conjugate
3.1.1. Preparation of the gold nanoparticles
To characterize the gold nanoparticles, primary UV–vis spectra
of the gold (III) ion and the gold nanoparticle solution were
recorded. It was observed that the maximum absorbance of the
gold nanoparticles occurred at a wavelength of 519 nm, which
was similar to other reports [25]. This result indicated that the
synthesis had yielded gold nanoparticles. From TEM measurements,
the average gold nanoparticle size was 15 nm (data not
shown).
3.1.2. Preparation of the antibody–colloidal gold conjugate
Using the preparation procedure for antibody–colloidal gold
conjugates as mentioned above, it was found that the antibodies
could bind with the gold nanoparticles. The visible spectrum of
antibody–colloidal gold conjugate displayed an absorption band at
519 nm, and there were no significant changes in the absorption
spectrum of the gold nanoparticles. This could be explained if gold
still exhibited the characteristics of a nanosized particle after binding.
However, the antibody–colloidal gold conjugate generated a
higher signal when compared to those of the gold nanoparticle at
the same wavelength.
The effect of the amount of coating antibody on the surface of
the gold nanoparticles was examined in a range of 75–1200mg/L.
It could be seen that the absorbance increased with increasing
the amount of coating antibody up to 450 mg/L. The absorbance
decreased after the amount of coating antibody was higher than
450 mg/L (data not shown). This indicated that a concentration of
450 mg/L was a suitable amount of coating antibody. Moreover, it
was also effective in preventing aggregation.
3.2. Determination of copper (II) ion at a glassy carbon electrode
In our proposed method, the final step of immunoassay, the
copper deposited on gold nanoparticles, was dissolved in an acid
solution and detected at GC electrode. The amount of copper
deposited on the gold nanoparticles is directly proportional to the
amount of S. typhi. Therefore, the sensitivity of S. typhi determination
is related to the sensitivity of the Cu (II) ion determination. Our
goal was to evaluate the performance of the electrochemical assay
for the determination of the copper (II) ion using a glassy carbon
electrode. Several parameters were investigated in order to obtain
suitable conditions for the Cu (II) ion determination.
3.2.1. The effect of the deposition potential
The effect of the deposition potential on the stripping peak current
of the Cu (II) ionwas studied from−0.3V to −0.6 V. The anodic
peak currents were increased rapidly from −0.3V to −0.45 V, and
no significant differences were observed for the anodic peak current
between −0.5V and −0.6V as shown in Fig. 2(A). Therefore, a
deposition potential of −0.5V was selected in the experiment.
3.2.2. The effect of the deposition time
The deposition time of the Cu (II) ion at a glassy carbon electrode
directly affects the sensitivity of the anodic stripping analysis.
For this reason, the influence of the deposition time for the detection
of copper was studied, with deposition times ranging from
1min to 8min. As shown in Fig. 2(B), when the deposition times
were increased from 1 min to 6 min, the anodic peak currents also
increased, and after 6 min, the current remained constant. Therefore,
6 min was chosen as the suitable deposition time.
3.2.3. Linearity
In order to judge the possibility of applying the assay for quantitative
analysis, the linearity range was examined. Under optimal
conditions, a good linearity in the anodic peak current with the
copper (II) concentration over a range of 0.10–100Mwas obtained
with a linear correlation coefficient of 0.9950 (as shownin Fig. 2(C)).
The detectable limit, which was calculated as three times the standard
deviation, was 3.77×10−2 M. It can therefore be concluded
that anodic stripping voltammetry is a very highly sensitivemethod
for Cu (II) ion determination, and therefore copper-enhanced gold
nanoparticles can be effectively detected by this method.
3.3. Optimization of the immunoassay conditions
3.3.1. The effect of the concentration and the reaction time of
copper-enhancer solution
The sensitivity of the electrochemical immunoassay based on
a colloidal gold-labeled antibody can be achieved by the catalytic
precipitation of copper on the gold nanoparticles. The concentration
of copper would therefore affect the amount of copper metal
deposited on the gold nanoparticles. The copper concentration in
the copper-enhancer solution was investigated within the range of
0.10–0.40 M. The results demonstrated (Fig. 3(A)) that the anodic
peak current increasedwith increasing copper concentration along
with the background signal. Therefore, the ratio of current between
the S. typhi and the background signal was calculated as a function
of the copper concentration to determine the concentration
which provided optimal sensitivity. The signal to background ratio
reached a maximum value at a copper concentration of 0.10M and
signal was steady, as shown in Fig. 3(B). To assure that amount of
copper is enough for detection of S. typhi, therefore; excess copper
concentration of 0.2Mwas selected for all subsequent experiments.
The reaction time of the copper-enhancer solution should also
be optimized, since it is related to the amount of copper metal
The amount of coating antibody (polyclonal rabbit antibody for
polysaccharides of S. typhi O901) on the surface of the gold nanoparticles
was optimized from 75mg/L to 1200 mg/L. Solutions were
prepared from 15,000 mg/L stock solutions of the rabbit antibody
to S. typhi. An appropriate volume of stock solutionwas added into a
centrifuge tube containing 2.0mL of the colloidal gold solution. The
pH solutionwas adjusted to 8.0 under stirring andwas followed by
incubation at room temperature for 1 h. The absorbance at 519 nm
of these samples was recorded and plotted versus the amount of
coating antibody in order to determine the optimal amount of coating
antibody.
After obtaining the optimal amount of coating antibody, the
antibody–colloidal gold conjugate was prepared. The optimized
amount of polyclonal rabbit antibody for the polysaccharides of
S. typhi was added to 2mL of the colloidal gold solution. The solutionwas
then adjusted to pH 8.0 using Na2CO3 andwas followed by
incubation at room temperature for 1 h under stirring. Next, 100L
of 3% BSA solution was added to minimize nonspecific adsorption,
and the solutionwas incubated under stirring for an additional hour
at room temperature. The antibody–colloidal gold conjugate was
centrifuged at 15,000rpm for 10min. The soft sediment was collected,washed and suspended in PBS solution, where the conjugate
could be stored for more than 1 month at 4 ◦C.
2.4. Immunoassay procedure
The immunoassay procedure is shown in Fig. 1. First, 50L
of 125mg/L monoclonal antibody was added into the polystyrene
microwells and incubated at 37 ◦C for 2 h. Second, the solution was
removed, and the microwells were washed with PBS (pH 7.4) for
four times followed by the addition of 50L of 1% BSA solution to
block the active sites of microwells from nonspecific adsorption.
The microwells were incubated at 37 ◦C for 2 h. The PBS (pH 7.4)
washing step was repeated followed by the addition of 50L of S.
typhi into the microwells. After incubating at 37 ◦C for 1 h followed
by another PBS washing step, 50L of the antibody–colloidal gold
conjugate was added to the solution, which was incubated at 37 ◦C
for 1 h in order to obtain the sandwich reaction. After performing
four washing steps, 100L of copper-enhancer solution was
added to the solution, which was incubated at room temperature
for 10min. After the microwells were washed four times with doubly
distilled water, 100L of 1M nitric acid solution was added to
dissolve copper. Finally, the solution containing the released copper
ions was transferred into an electrochemical cell and diluted
to 3mL with doubly distilled water. The experiments were carried
out by anodic stripping voltammetry.
3. Results and discussion
3.1. Preparation of the antibody–colloidal gold conjugate
3.1.1. Preparation of the gold nanoparticles
To characterize the gold nanoparticles, primary UV–vis spectra
of the gold (III) ion and the gold nanoparticle solution were
recorded. It was observed that the maximum absorbance of the
gold nanoparticles occurred at a wavelength of 519 nm, which
was similar to other reports [25]. This result indicated that the
synthesis had yielded gold nanoparticles. From TEM measurements,
the average gold nanoparticle size was 15 nm (data not
shown).
3.1.2. Preparation of the antibody–colloidal gold conjugate
Using the preparation procedure for antibody–colloidal gold
conjugates as mentioned above, it was found that the antibodies
could bind with the gold nanoparticles. The visible spectrum of
antibody–colloidal gold conjugate displayed an absorption band at
519 nm, and there were no significant changes in the absorption
spectrum of the gold nanoparticles. This could be explained if gold
still exhibited the characteristics of a nanosized particle after binding.
However, the antibody–colloidal gold conjugate generated a
higher signal when compared to those of the gold nanoparticle at
the same wavelength.
The effect of the amount of coating antibody on the surface of
the gold nanoparticles was examined in a range of 75–1200mg/L.
It could be seen that the absorbance increased with increasing
the amount of coating antibody up to 450 mg/L. The absorbance
decreased after the amount of coating antibody was higher than
450 mg/L (data not shown). This indicated that a concentration of
450 mg/L was a suitable amount of coating antibody. Moreover, it
was also effective in preventing aggregation.
3.2. Determination of copper (II) ion at a glassy carbon electrode
In our proposed method, the final step of immunoassay, the
copper deposited on gold nanoparticles, was dissolved in an acid
solution and detected at GC electrode. The amount of copper
deposited on the gold nanoparticles is directly proportional to the
amount of S. typhi. Therefore, the sensitivity of S. typhi determination
is related to the sensitivity of the Cu (II) ion determination. Our
goal was to evaluate the performance of the electrochemical assay
for the determination of the copper (II) ion using a glassy carbon
electrode. Several parameters were investigated in order to obtain
suitable conditions for the Cu (II) ion determination.
3.2.1. The effect of the deposition potential
The effect of the deposition potential on the stripping peak current
of the Cu (II) ionwas studied from−0.3V to −0.6 V. The anodic
peak currents were increased rapidly from −0.3V to −0.45 V, and
no significant differences were observed for the anodic peak current
between −0.5V and −0.6V as shown in Fig. 2(A). Therefore, a
deposition potential of −0.5V was selected in the experiment.
3.2.2. The effect of the deposition time
The deposition time of the Cu (II) ion at a glassy carbon electrode
directly affects the sensitivity of the anodic stripping analysis.
For this reason, the influence of the deposition time for the detection
of copper was studied, with deposition times ranging from
1min to 8min. As shown in Fig. 2(B), when the deposition times
were increased from 1 min to 6 min, the anodic peak currents also
increased, and after 6 min, the current remained constant. Therefore,
6 min was chosen as the suitable deposition time.
3.2.3. Linearity
In order to judge the possibility of applying the assay for quantitative
analysis, the linearity range was examined. Under optimal
conditions, a good linearity in the anodic peak current with the
copper (II) concentration over a range of 0.10–100Mwas obtained
with a linear correlation coefficient of 0.9950 (as shownin Fig. 2(C)).
The detectable limit, which was calculated as three times the standard
deviation, was 3.77×10−2 M. It can therefore be concluded
that anodic stripping voltammetry is a very highly sensitivemethod
for Cu (II) ion determination, and therefore copper-enhanced gold
nanoparticles can be effectively detected by this method.
3.3. Optimization of the immunoassay conditions
3.3.1. The effect of the concentration and the reaction time of
copper-enhancer solution
The sensitivity of the electrochemical immunoassay based on
a colloidal gold-labeled antibody can be achieved by the catalytic
precipitation of copper on the gold nanoparticles. The concentration
of copper would therefore affect the amount of copper metal
deposited on the gold nanoparticles. The copper concentration in
the copper-enhancer solution was investigated within the range of
0.10–0.40 M. The results demonstrated (Fig. 3(A)) that the anodic
peak current increasedwith increasing copper concentration along
with the background signal. Therefore, the ratio of current between
the S. typhi and the background signal was calculated as a function
of the copper concentration to determine the concentration
which provided optimal sensitivity. The signal to background ratio
reached a maximum value at a copper concentration of 0.10M and
signal was steady, as shown in Fig. 3(B). To assure that amount of
copper is enough for detection of S. typhi, therefore; excess copper
concentration of 0.2Mwas selected for all subsequent experiments.
The reaction time of the copper-enhancer solution should also
be optimized, since it is related to the amount of copper metal
0/5000
2.3.2. แอนติบอดี-colloidal ค่าสังยุคทอง
จำนวนแอนติบอดีเคลือบ (กระต่าย polyclonal แอนติบอดีสำหรับ
polysaccharides ของ S. typhi O901) บนผิวเก็บกักทอง
ปรับจาก 75mg/L การ 1200 มิลลิกรัม/L. โซลูชั่นถูก
เตรียมแก้ไขปัญหาสต็อกของแอนติบอดีกระต่ายจาก 15000 mg/L
กับ S. typhi การ solutionwas หุ้นเพิ่มเข้าไปในปริมาณที่เหมาะสม
เครื่องหมุนเหวี่ยงประกอบด้วย 2 หลอดมล 0 colloidal ทองโซลูชัน ใน
solutionwas ค่า pH ปรับปรุง 8.0 ภายใต้กวนตามด้วย andwas
บ่มที่อุณหภูมิห้องใน 1 ชั่วโมง Absorbance ที่ 519 nm
ตัวอย่างเหล่านี้ถูกบันทึกไว้ และพล็อตเทียบกับจำนวน
เคลือบแอนติบอดีเพื่อกำหนดจำนวนสูงสุดของเคลือบ
แอนติบอดี
หลังจากได้รับยอดสูงสุดของแอนติบอดีเคลือบ การ
ค่าสังยุคทอง colloidal – แอนติบอดีเตรียมไว้ การเพิ่มประสิทธิภาพ
จำนวนกระต่าย polyclonal แอนติบอดีสำหรับ polysaccharides ของ
S. typhi มีเพิ่ม 2mL colloidal ทองโซลูชัน Solutionwas
แล้ว ปรับค่า pH 8.0 ใช้ Na2CO3 andwas ตาม
บ่มที่อุณหภูมิห้องสำหรับ h 1 ภายใต้กวน ถัดไป 100 L
ของบีเอสเอ 3% เพิ่มโซลูชั่นเพื่อลดการดูดซับที่เจาะจง,
และ solutionwas incubated ภายใต้กวนชั่วโมงเพิ่มเติม
ที่อุณหภูมิห้อง ค่าสังยุคทอง colloidal – แอนติบอดีถูก
centrifuged ที่ 15000 rpm สำหรับ 10 นาที ตะกอนนุ่มเก็บ ล้าง และถูกระงับใน PBS โซลูชัน ที่ค่าสังยุค
สามารถจัดเก็บกว่า 1 เดือนที่ 4 ◦C ได้
2.4 ได้ วิธี immunoassay
วิธี immunoassay จะแสดงใน Fig. 1 แรก 50 L
ของ 125mg/L monoclonal แอนติบอดีถูกเพิ่มลงในโฟม
microwells และ incubated ที่ ◦C 37 สำหรับ 2 h ที่สอง การแก้ปัญหาถูก
เอา และ microwells จะถูกล้าง ด้วย PBS (pH 7.4) สำหรับ
สี่ครั้งตามแห่ง L 50 ของบีเอสเอ 1% เพื่อ
บล็อกไซต์ใช้งานอยู่ของ microwells จากเจาะจงดูดซับ
microwells ถูก incubated ที่ ◦C 37 สำหรับ 2 h PBS (pH 7.4)
ขั้นตอนการล้างถูกทำซ้ำตาม ด้วยการเพิ่ม L 50 ของ S.
typhi เข้า microwells หลังจาก incubating ที่ ◦C 37 สำหรับ 1 h ตาม
อีกตอนซักผ้า PBS, L 50 ทองแอนติบอดี-colloidal
เพิ่มค่าสังยุคเพื่อการแก้ปัญหา ซึ่งถูก incubated ที่ 37 ◦C
สำหรับ h 1 เพื่อรับปฏิกิริยาแซนด์วิช หลังจากที่ทำ
สี่ขั้นตอนซักผ้า L 100 โซลูชันเพิ่มทองแดงถูก
เพิ่มโซลูชั่น ซึ่งถูก incubated ที่อุณหภูมิห้อง
สำหรับ 10 นาที หลังจาก microwells ถูกล้าง 4 ครั้งกับสองเหตุการณ์
เพิ่มการกลั่นน้ำ L 100 ของกรดไนตริก 1M
ละลายทองแดง สุดท้าย โซลูชันที่ประกอบด้วยทองแดงออก
ประจุถูกโอนย้ายไปยังเซลล์ electrochemical และผสม
ไป 3mL ด้วยน้ำกลั่นสองเหตุการณ์ ได้ดำเนินการทดลองการ
ออกตาม anodic ปอก voltammetry
3 ผลลัพธ์และสนทนา
3.1 เตรียมค่าสังยุคทองแอนติบอดี-colloidal
3.1.1 เตรียมเก็บกักทอง
ต้องกำหนดลักษณะเก็บกักทอง แรมสเป็คตรา UV – vis หลัก
ทองคำ (III) ไอออนและโซลูชัน nanoparticle ทองถูก
บันทึก ได้สังเกตที่ absorbance สูงสุดของการ
เก็บกักทองเกิดขึ้นที่ความยาวคลื่นของ 519 nm ซึ่ง
รายงานอื่น ๆ [25] ผลลัพธ์นี้ระบุที่
สังเคราะห์ได้ผลเก็บกักทอง จากยการวัด,
ขนาดเฉลี่ยทอง nanoparticle 15 nm (ข้อมูลไม่
แสดง) .
3.1.2 เตรียมค่าสังยุคทองแอนติบอดี-colloidal
ใช้ขั้นตอนการเตรียมแอนติบอดี-colloidal ทอง
conjugates ดังกล่าวข้างต้น มันถูกพบที่แอนตี้การ
สามารถผูกกับเก็บกักทอง สเปกตรัมมองเห็นได้ของ
ค่าสังยุคทองแอนติบอดี-colloidal แสดงแถบการดูดซึมที่
519 nm และมีไม่เปลี่ยนแปลงที่สำคัญในการดูดซึม
สเปกตรัมของเก็บกักทอง นี้สามารถอธิบายถ้าทอง
ยังคง จัดแสดงลักษณะของอนุภาคตัวรองหลังผูก
อย่างไรก็ตาม ค่าสังยุคทองแอนติบอดี-colloidal สร้างเป็น
สัญญาณสูงขึ้นเมื่อเทียบกับบรรดา nanoparticle ทองที่
เดียวความยาวคลื่น
ผลของจำนวนแอนติบอดีเคลือบบนพื้นผิวของ
เก็บกักทองถูกตรวจสอบในช่วง 75 – 1200mg/L.
สามารถเห็นว่า absorbance ที่เพิ่มกับเพิ่ม
จำนวนแอนติบอดีเคลือบสูงสุด 450 มิลลิกรัม/L. Absorbance ที่
ลดลงหลังจากจำนวนเคลือบแอนติบอดีได้สูงกว่า
450 mg/L (ไม่ได้แสดงข้อมูล) นี้แสดงที่ความเข้มข้นของ
450 mg/L มีจำนวนแอนติบอดีเคลือบเหมาะสม นอกจากนี้ มัน
ยังมีประสิทธิภาพในการป้องกันการรวมกัน
3.2 ความมุ่งมั่นของทองแดง (II) ไอออนที่ไฟฟ้าคาร์บอนฟิต
ของเราเสนอวิธี ขั้นตอนสุดท้ายของ immunoassay
เก็บกักทองนำฝากในทองแดง ไม่ละลายในกรดเป็น
โซลูชัน และพบที่ GC อิเล็กโทรด จำนวนทอง
ฝากทองคำขนาดนาโนเมตรซึ่งเป็นสัดส่วนโดยตรงกับการ
จำนวน S. typhi ดังนั้น ความไวของ S. typhi กำหนด
สัมพันธ์กับความไวของการวัดที่ Cu (II) ไอออน ของเรา
เป้าหมายได้เพื่อ ประเมินประสิทธิภาพของการวิเคราะห์ทางเคมีไฟฟ้า
สำหรับความมุ่งมั่นของไอออน (II) ทองแดงที่ใช้คาร์บอนฟิต
อิเล็กโทรด พารามิเตอร์หลายอย่างถูกตรวจสอบเพื่อขอรับ
เงื่อนไขเหมาะสำหรับ Cu (II) ไอออนกำหนด.
3.2.1 ผลของการสะสมศักยภาพ
ผลของสะสมที่มีศักยภาพสูงสุด stripping ปัจจุบัน
ของ from−0.3V ionwas ที่เรียน Cu (II) การ −0.6 V ที่ anodic
กระแสสูงสุดได้เพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วจาก −0.3V เพื่อ −0.45 V และ
ไม่แตกต่างกันถูกสังเกตในช่วง peak anodic ปัจจุบัน
ระหว่าง −0.5V และ −0.6V แสดงใน Fig. 2(A) ดังนั้น การ
เลือกสะสมศักยภาพของ −0.5V ในการทดลอง
3.2.2 ผลของเวลาสะสม
เวลาสะสมของไอออน Cu (II) ที่ไฟฟ้าคาร์บอนฟิต
โดยตรงมีผลต่อความไวของ anodic stripping วิเคราะห์
สำหรับเหตุผลนี้ อิทธิพลของการสะสมเวลาในการตรวจพบ
ของทองแดงมีเรียน มีสะสมเวลาตั้งแต่
1 นาทีถึง 8 นาที ตามที่แสดงใน Fig. 2(B) เมื่อเวลาที่สะสม
ได้เพิ่มขึ้นจาก 1 นาทีต่ำสุด 6 ที่ anodic peak กระแสยัง
เพิ่ม ขึ้น และหลัง จาก นาทีที่ 6 ปัจจุบันยังคงคง ดังนั้น,
6 นาทีถูกเลือกเป็นเวลาสะสมเหมาะ
3.2.3 แบบดอกไม้
เพื่อสามารถนำไปใช้วิเคราะห์สำหรับตัดสินเชิงปริมาณ
วิเคราะห์ ช่วงแบบดอกไม้ถูกตรวจสอบ ภายใต้ดีที่สุด
เงื่อนไข แบบดอกไม้ดีในช่วง peak anodic ปัจจุบันกับการ
ทองแดง (II) ความเข้มข้นช่วง 0.10-100 Mwas รับ
มีคำสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์เชิงเส้นของ 0.9950 (เป็น shownin Fig. 2(C)) .
จำกัดอาสา ซึ่งมีคำนวณเป็นครั้งที่สามมาตรฐาน
3.77 การถูกเบี่ยงเบน 10−2 M มันสามารถดังนั้นสรุปได้
voltammetry stripping anodic ที่เป็นเป็นอย่างมาก sensitivemethod
สำหรับกำหนด Cu (II) ไอออน และดังนั้นทองเพิ่มทอง
เก็บกักสามารถมีประสิทธิภาพตรวจจับ โดยวิธีนี้ได้
3.3 ปรับเงื่อนไข immunoassay
3.3.1 ผลของความเข้มข้นและเวลาปฏิกิริยา
โซลูชันเพิ่มทองแดง
ตามความไวของ immunoassay ไฟฟ้า
แอนติบอดี colloidal ป้ายทองสามารถทำได้ โดยที่ตัวเร่งปฏิกิริยา
ฝนของทองแดงในการเก็บกักทอง ความเข้มข้น
ของทองแดงจะดังนั้นส่งผลต่อจำนวนของโลหะทองแดง
ฝากบนเก็บกักทอง ความเข้มข้นในทองแดง
โซลูชันเพิ่มทองแดงถูกสอบสวนของ
0.10-0.40 M แสดงให้เห็นว่าผลลัพธ์ (Fig. 3(A)) ที่ที่ anodic
increasedwith ปัจจุบันสูงสุดที่เพิ่มความเข้มข้นของทองแดงตาม
มีสัญญาณพื้นหลัง ดังนั้น อัตราส่วนของปัจจุบันระหว่าง
S. typhi และพื้นหลังสัญญาณคำนวณเป็นฟังก์ชัน
ของทองแดงความเข้มข้นในการกำหนดความเข้มข้น
ซึ่งให้ความไวสูงสุด สัญญาณต่อพื้น
ถึงค่าสูงสุดที่ความเข้มข้นที่ทองแดงของ 0.10M และ
สัญญาณแทบไม่มี ตามที่แสดงใน Fig. 3(B) เพื่อให้มั่นใจว่าจำนวน
ทองแดงจึงเพียงพอสำหรับการตรวจหาของ S. typhi ทองแดงส่วนเกิน
ความเข้มข้นของ 0.2Mwas สำหรับการทดลองทั้งหมดต่อมา
เวลาปฏิกิริยาของโซลูชันเพิ่มทองแดงควรยัง
ปรับให้เหมาะ เนื่องจากมันเกี่ยวข้องกับจำนวนของโลหะทองแดง
จำนวนแอนติบอดีเคลือบ (กระต่าย polyclonal แอนติบอดีสำหรับ
polysaccharides ของ S. typhi O901) บนผิวเก็บกักทอง
ปรับจาก 75mg/L การ 1200 มิลลิกรัม/L. โซลูชั่นถูก
เตรียมแก้ไขปัญหาสต็อกของแอนติบอดีกระต่ายจาก 15000 mg/L
กับ S. typhi การ solutionwas หุ้นเพิ่มเข้าไปในปริมาณที่เหมาะสม
เครื่องหมุนเหวี่ยงประกอบด้วย 2 หลอดมล 0 colloidal ทองโซลูชัน ใน
solutionwas ค่า pH ปรับปรุง 8.0 ภายใต้กวนตามด้วย andwas
บ่มที่อุณหภูมิห้องใน 1 ชั่วโมง Absorbance ที่ 519 nm
ตัวอย่างเหล่านี้ถูกบันทึกไว้ และพล็อตเทียบกับจำนวน
เคลือบแอนติบอดีเพื่อกำหนดจำนวนสูงสุดของเคลือบ
แอนติบอดี
หลังจากได้รับยอดสูงสุดของแอนติบอดีเคลือบ การ
ค่าสังยุคทอง colloidal – แอนติบอดีเตรียมไว้ การเพิ่มประสิทธิภาพ
จำนวนกระต่าย polyclonal แอนติบอดีสำหรับ polysaccharides ของ
S. typhi มีเพิ่ม 2mL colloidal ทองโซลูชัน Solutionwas
แล้ว ปรับค่า pH 8.0 ใช้ Na2CO3 andwas ตาม
บ่มที่อุณหภูมิห้องสำหรับ h 1 ภายใต้กวน ถัดไป 100 L
ของบีเอสเอ 3% เพิ่มโซลูชั่นเพื่อลดการดูดซับที่เจาะจง,
และ solutionwas incubated ภายใต้กวนชั่วโมงเพิ่มเติม
ที่อุณหภูมิห้อง ค่าสังยุคทอง colloidal – แอนติบอดีถูก
centrifuged ที่ 15000 rpm สำหรับ 10 นาที ตะกอนนุ่มเก็บ ล้าง และถูกระงับใน PBS โซลูชัน ที่ค่าสังยุค
สามารถจัดเก็บกว่า 1 เดือนที่ 4 ◦C ได้
2.4 ได้ วิธี immunoassay
วิธี immunoassay จะแสดงใน Fig. 1 แรก 50 L
ของ 125mg/L monoclonal แอนติบอดีถูกเพิ่มลงในโฟม
microwells และ incubated ที่ ◦C 37 สำหรับ 2 h ที่สอง การแก้ปัญหาถูก
เอา และ microwells จะถูกล้าง ด้วย PBS (pH 7.4) สำหรับ
สี่ครั้งตามแห่ง L 50 ของบีเอสเอ 1% เพื่อ
บล็อกไซต์ใช้งานอยู่ของ microwells จากเจาะจงดูดซับ
microwells ถูก incubated ที่ ◦C 37 สำหรับ 2 h PBS (pH 7.4)
ขั้นตอนการล้างถูกทำซ้ำตาม ด้วยการเพิ่ม L 50 ของ S.
typhi เข้า microwells หลังจาก incubating ที่ ◦C 37 สำหรับ 1 h ตาม
อีกตอนซักผ้า PBS, L 50 ทองแอนติบอดี-colloidal
เพิ่มค่าสังยุคเพื่อการแก้ปัญหา ซึ่งถูก incubated ที่ 37 ◦C
สำหรับ h 1 เพื่อรับปฏิกิริยาแซนด์วิช หลังจากที่ทำ
สี่ขั้นตอนซักผ้า L 100 โซลูชันเพิ่มทองแดงถูก
เพิ่มโซลูชั่น ซึ่งถูก incubated ที่อุณหภูมิห้อง
สำหรับ 10 นาที หลังจาก microwells ถูกล้าง 4 ครั้งกับสองเหตุการณ์
เพิ่มการกลั่นน้ำ L 100 ของกรดไนตริก 1M
ละลายทองแดง สุดท้าย โซลูชันที่ประกอบด้วยทองแดงออก
ประจุถูกโอนย้ายไปยังเซลล์ electrochemical และผสม
ไป 3mL ด้วยน้ำกลั่นสองเหตุการณ์ ได้ดำเนินการทดลองการ
ออกตาม anodic ปอก voltammetry
3 ผลลัพธ์และสนทนา
3.1 เตรียมค่าสังยุคทองแอนติบอดี-colloidal
3.1.1 เตรียมเก็บกักทอง
ต้องกำหนดลักษณะเก็บกักทอง แรมสเป็คตรา UV – vis หลัก
ทองคำ (III) ไอออนและโซลูชัน nanoparticle ทองถูก
บันทึก ได้สังเกตที่ absorbance สูงสุดของการ
เก็บกักทองเกิดขึ้นที่ความยาวคลื่นของ 519 nm ซึ่ง
รายงานอื่น ๆ [25] ผลลัพธ์นี้ระบุที่
สังเคราะห์ได้ผลเก็บกักทอง จากยการวัด,
ขนาดเฉลี่ยทอง nanoparticle 15 nm (ข้อมูลไม่
แสดง) .
3.1.2 เตรียมค่าสังยุคทองแอนติบอดี-colloidal
ใช้ขั้นตอนการเตรียมแอนติบอดี-colloidal ทอง
conjugates ดังกล่าวข้างต้น มันถูกพบที่แอนตี้การ
สามารถผูกกับเก็บกักทอง สเปกตรัมมองเห็นได้ของ
ค่าสังยุคทองแอนติบอดี-colloidal แสดงแถบการดูดซึมที่
519 nm และมีไม่เปลี่ยนแปลงที่สำคัญในการดูดซึม
สเปกตรัมของเก็บกักทอง นี้สามารถอธิบายถ้าทอง
ยังคง จัดแสดงลักษณะของอนุภาคตัวรองหลังผูก
อย่างไรก็ตาม ค่าสังยุคทองแอนติบอดี-colloidal สร้างเป็น
สัญญาณสูงขึ้นเมื่อเทียบกับบรรดา nanoparticle ทองที่
เดียวความยาวคลื่น
ผลของจำนวนแอนติบอดีเคลือบบนพื้นผิวของ
เก็บกักทองถูกตรวจสอบในช่วง 75 – 1200mg/L.
สามารถเห็นว่า absorbance ที่เพิ่มกับเพิ่ม
จำนวนแอนติบอดีเคลือบสูงสุด 450 มิลลิกรัม/L. Absorbance ที่
ลดลงหลังจากจำนวนเคลือบแอนติบอดีได้สูงกว่า
450 mg/L (ไม่ได้แสดงข้อมูล) นี้แสดงที่ความเข้มข้นของ
450 mg/L มีจำนวนแอนติบอดีเคลือบเหมาะสม นอกจากนี้ มัน
ยังมีประสิทธิภาพในการป้องกันการรวมกัน
3.2 ความมุ่งมั่นของทองแดง (II) ไอออนที่ไฟฟ้าคาร์บอนฟิต
ของเราเสนอวิธี ขั้นตอนสุดท้ายของ immunoassay
เก็บกักทองนำฝากในทองแดง ไม่ละลายในกรดเป็น
โซลูชัน และพบที่ GC อิเล็กโทรด จำนวนทอง
ฝากทองคำขนาดนาโนเมตรซึ่งเป็นสัดส่วนโดยตรงกับการ
จำนวน S. typhi ดังนั้น ความไวของ S. typhi กำหนด
สัมพันธ์กับความไวของการวัดที่ Cu (II) ไอออน ของเรา
เป้าหมายได้เพื่อ ประเมินประสิทธิภาพของการวิเคราะห์ทางเคมีไฟฟ้า
สำหรับความมุ่งมั่นของไอออน (II) ทองแดงที่ใช้คาร์บอนฟิต
อิเล็กโทรด พารามิเตอร์หลายอย่างถูกตรวจสอบเพื่อขอรับ
เงื่อนไขเหมาะสำหรับ Cu (II) ไอออนกำหนด.
3.2.1 ผลของการสะสมศักยภาพ
ผลของสะสมที่มีศักยภาพสูงสุด stripping ปัจจุบัน
ของ from−0.3V ionwas ที่เรียน Cu (II) การ −0.6 V ที่ anodic
กระแสสูงสุดได้เพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วจาก −0.3V เพื่อ −0.45 V และ
ไม่แตกต่างกันถูกสังเกตในช่วง peak anodic ปัจจุบัน
ระหว่าง −0.5V และ −0.6V แสดงใน Fig. 2(A) ดังนั้น การ
เลือกสะสมศักยภาพของ −0.5V ในการทดลอง
3.2.2 ผลของเวลาสะสม
เวลาสะสมของไอออน Cu (II) ที่ไฟฟ้าคาร์บอนฟิต
โดยตรงมีผลต่อความไวของ anodic stripping วิเคราะห์
สำหรับเหตุผลนี้ อิทธิพลของการสะสมเวลาในการตรวจพบ
ของทองแดงมีเรียน มีสะสมเวลาตั้งแต่
1 นาทีถึง 8 นาที ตามที่แสดงใน Fig. 2(B) เมื่อเวลาที่สะสม
ได้เพิ่มขึ้นจาก 1 นาทีต่ำสุด 6 ที่ anodic peak กระแสยัง
เพิ่ม ขึ้น และหลัง จาก นาทีที่ 6 ปัจจุบันยังคงคง ดังนั้น,
6 นาทีถูกเลือกเป็นเวลาสะสมเหมาะ
3.2.3 แบบดอกไม้
เพื่อสามารถนำไปใช้วิเคราะห์สำหรับตัดสินเชิงปริมาณ
วิเคราะห์ ช่วงแบบดอกไม้ถูกตรวจสอบ ภายใต้ดีที่สุด
เงื่อนไข แบบดอกไม้ดีในช่วง peak anodic ปัจจุบันกับการ
ทองแดง (II) ความเข้มข้นช่วง 0.10-100 Mwas รับ
มีคำสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์เชิงเส้นของ 0.9950 (เป็น shownin Fig. 2(C)) .
จำกัดอาสา ซึ่งมีคำนวณเป็นครั้งที่สามมาตรฐาน
3.77 การถูกเบี่ยงเบน 10−2 M มันสามารถดังนั้นสรุปได้
voltammetry stripping anodic ที่เป็นเป็นอย่างมาก sensitivemethod
สำหรับกำหนด Cu (II) ไอออน และดังนั้นทองเพิ่มทอง
เก็บกักสามารถมีประสิทธิภาพตรวจจับ โดยวิธีนี้ได้
3.3 ปรับเงื่อนไข immunoassay
3.3.1 ผลของความเข้มข้นและเวลาปฏิกิริยา
โซลูชันเพิ่มทองแดง
ตามความไวของ immunoassay ไฟฟ้า
แอนติบอดี colloidal ป้ายทองสามารถทำได้ โดยที่ตัวเร่งปฏิกิริยา
ฝนของทองแดงในการเก็บกักทอง ความเข้มข้น
ของทองแดงจะดังนั้นส่งผลต่อจำนวนของโลหะทองแดง
ฝากบนเก็บกักทอง ความเข้มข้นในทองแดง
โซลูชันเพิ่มทองแดงถูกสอบสวนของ
0.10-0.40 M แสดงให้เห็นว่าผลลัพธ์ (Fig. 3(A)) ที่ที่ anodic
increasedwith ปัจจุบันสูงสุดที่เพิ่มความเข้มข้นของทองแดงตาม
มีสัญญาณพื้นหลัง ดังนั้น อัตราส่วนของปัจจุบันระหว่าง
S. typhi และพื้นหลังสัญญาณคำนวณเป็นฟังก์ชัน
ของทองแดงความเข้มข้นในการกำหนดความเข้มข้น
ซึ่งให้ความไวสูงสุด สัญญาณต่อพื้น
ถึงค่าสูงสุดที่ความเข้มข้นที่ทองแดงของ 0.10M และ
สัญญาณแทบไม่มี ตามที่แสดงใน Fig. 3(B) เพื่อให้มั่นใจว่าจำนวน
ทองแดงจึงเพียงพอสำหรับการตรวจหาของ S. typhi ทองแดงส่วนเกิน
ความเข้มข้นของ 0.2Mwas สำหรับการทดลองทั้งหมดต่อมา
เวลาปฏิกิริยาของโซลูชันเพิ่มทองแดงควรยัง
ปรับให้เหมาะ เนื่องจากมันเกี่ยวข้องกับจำนวนของโลหะทองแดง
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.3.2 ทองแอนติบอดีคอลลอยด์ผัน
ปริมาณของแอนติบอดีเคลือบ (แอนติบอดีโพลีกระต่ายกับ
polysaccharides ของ S. typhi O901) บนพื้นผิวของอนุภาคนาโนทอง
ถูกปรับให้เหมาะสมจาก 75mg / L 1200 mg / ลิตร การแก้ปัญหาที่ถูก
จัดทำขึ้นจากการแก้ปัญหา 15,000 mg / L หุ้นของแอนติบอดีกระต่าย
ที่จะ S. typhi ปริมาณที่เหมาะสมของ solutionwas หุ้นเพิ่มเข้าไปใน
หลอด centrifuge มี 2.0mL ของการแก้ปัญหาทองคอลลอยด์
solutionwas ปรับ pH 8.0 ภายใต้ตื่นเต้น andwas ตามด้วย
การบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง การดูดกลืนแสงที่ 519 นาโนเมตร
ของตัวอย่างเหล่านี้ถูกบันทึกไว้และพล็อตเทียบกับปริมาณของ
แอนติบอดีเคลือบเพื่อที่จะกำหนดจำนวนที่เหมาะสมของการเคลือบ
แอนติบอดี
หลังจากได้รับจำนวนเงินที่ดีที่สุดของแอนติบอดีเคลือบ
แอนติบอดีคอลลอยด์ผันทองได้เตรียม ปรับ
ปริมาณของแอนติบอดีโพลีกระต่ายกับ polysaccharides ของ
เอส แบคทีเรียชนิดหนึ่งถูกบันทึกอยู่ใน 2 มล. ของการแก้ปัญหาทองคอลลอยด์ solutionwas
ปรับแล้ว pH 8.0 ใช้ Na2CO3 andwas ตามด้วย
การบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมงภายใต้การกวน ถัดไป 100 ลิตร
ของการแก้ปัญหา 3% BSA ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อลดการดูดซับเชิญชม,
และ solutionwas บ่มภายใต้ตื่นเต้นสำหรับชั่วโมงเพิ่มเติม
ที่อุณหภูมิห้อง แอนติบอดีคอลลอยด์ผันทอง
หมุนเหวี่ยงที่ 15,000 รอบต่อนาทีเพื่อ 10min ตะกอนอ่อนถูกเก็บรวบรวมล้างและการสนับสนุนในการแก้ปัญหาพีบีเอสที่ผัน
จะถูกเก็บไว้นานกว่า 1 เดือนที่ 4 ◦ C.
2.4 ขั้นตอน Immunoassay
immunoassay ขั้นตอนที่แสดงในรูปที่ 1. ขั้นแรก 50? ลิตร
ของ 125mg / L โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ถูกเพิ่มเข้าไปในสไตรีน
microwells และบ่มที่อุณหภูมิ 37 ◦ C เป็นเวลา 2 ชั่วโมง ประการที่สองการแก้ปัญหาที่ถูก
ลบออกและ microwells ถูกล้างด้วยพีบีเอส (pH 7.4) ใน
สี่ครั้งตามด้วยนอกเหนือจาก 50? ลิตรของการแก้ปัญหา BSA 1% ที่จะ
ปิดกั้นเว็บไซต์ที่ใช้งานของ microwells จากการดูดซับเชิญชม
microwells ถูกบ่มที่ 37 ◦ C เป็นเวลา 2 ชั่วโมง พีบีเอส (pH 7.4)
ขั้นตอนการซักซ้ำตามด้วยการเพิ่มขึ้นของ 50? ลิตร S.
typhi เป็น microwells หลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 37 ◦ C เป็นเวลา 1 ชั่วโมงตาม
ด้วยอีกขั้นตอนการซักผ้าพีบีเอส, 50? ลิตรแอนติบอดีทองคอลลอยด์
ผันถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อแก้ปัญหาซึ่งได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 37 ◦ C
เป็นเวลา 1 ชั่วโมงเพื่อให้ได้ปฏิกิริยาแซนวิช หลังจากดำเนินการ
สี่ขั้นตอนการซักผ้า, 100 ลิตรของการแก้ปัญหาทองแดงเพิ่มได้รับการ
เพิ่มเข้ามาในการแก้ปัญหาซึ่งได้รับการบ่มที่อุณหภูมิห้อง
เป็นเวลา 10 นาที หลังจาก microwells ถูกล้างสี่ครั้งด้วยทวีคูณ
น้ำกลั่น 100 ลิตร 1M สารละลายกรดไนตริกถูกบันทึก
ละลายทองแดง ในที่สุดการแก้ปัญหาที่มีทองแดงปล่อย
ไอออนถูกย้ายเข้าไปในเซลล์ไฟฟ้าเคมีและปรับลด
ไปประมาณ 3 mL ด้วยน้ำกลั่นทวีคูณ การทดลองที่ได้ดำเนิน
การโดยขั้วบวก voltammetry ลอก
3 ผลและอภิปราย
3.1 การเตรียมแอนติบอดีคอลลอยด์ผันทอง
3.1.1 การเตรียมอนุภาคนาโนทองคำ
เพื่อลักษณะของอนุภาคนาโนทองสเปกตรัม UV-Vis หลัก
ทอง (III) ไอออนและโซลูชั่นที่อนุภาคนาโนทองคำที่ถูก
บันทึกไว้ มันถูกตั้งข้อสังเกตว่าการดูดกลืนแสงสูงสุดของ
อนุภาคนาโนทองที่เกิดขึ้นที่ความยาวคลื่น 519 นาโนเมตรซึ่ง
มีความคล้ายคลึงกับรายงานอื่น ๆ [25] ผลที่ได้นี้ชี้ให้เห็นว่า
การสังเคราะห์อนุภาคนาโนได้ให้ผลสีทอง จากการวัด TEM,
ขนาดอนุภาคนาโนทองคำเฉลี่ย 15 นาโนเมตร (ข้อมูลไม่
แสดง)
3.1.2 การเตรียมแอนติบอดีคอลลอยด์ผันทอง
โดยใช้ขั้นตอนการเตรียมการแอนติบอดีทองคอลลอยด์
conjugates ดังกล่าวข้างต้นพบว่าแอนติบอดี
จะผูกด้วยอนุภาคนาโนทอง สเปกตรัมที่มองเห็นของ
แอนติบอดีคอลลอยด์ผันทองแสดงวงดนตรีการดูดซึมที่
519 นาโนเมตรและไม่มีการเปลี่ยนแปลงที่สำคัญในการดูดซึม
สเปกตรัมของอนุภาคนาโนทอง นี้อาจจะอธิบายได้ว่าทอง
ยังคงจัดแสดงลักษณะของอนุภาค nanosized หลังจากที่มีผลผูกพัน
แต่แอนติบอดีคอลลอยด์ผันทองที่สร้าง
สัญญาณสูงขึ้นเมื่อเทียบกับของอนุภาคนาโนทองที่
ความยาวคลื่นเดียวกัน
ผลกระทบจากปริมาณของแอนติบอดีเคลือบ บนพื้นผิวของ
อนุภาคนาโนทองถูกตรวจสอบในช่วง 75-1200mg / ลิตร
มันอาจจะเห็นได้ว่าการดูดกลืนแสงเพิ่มขึ้นเมื่อเพิ่ม
ปริมาณของแอนติบอดีเคลือบถึง 450 มก. / ลิตร การดูดกลืนแสง
ลดลงหลังจากที่ปริมาณของแอนติบอดีเคลือบสูงกว่า
450 mg / L (ไม่ได้แสดงข้อมูล) นี้ชี้ให้เห็นว่าความเข้มข้นของ
450 mg / L เป็นจำนวนเงินที่เหมาะสมของการเคลือบแอนติบอดี นอกจากนี้
ยังเป็นที่มีประสิทธิภาพในการป้องกันการรวม
3.2 การหาปริมาณทองแดง (II) ไอออนที่ขั้วไฟฟ้าคาร์บอนเหลือบ
ในวิธีการที่นำเสนอของเราในขั้นตอนสุดท้ายของ immunoassay,
ทองแดงวางอยู่บนอนุภาคนาโนทองคำที่ถูกละลายในกรด
และการแก้ปัญหาที่ตรวจพบ GC อิเล็กโทรด ปริมาณของทองแดง
วางอยู่บนอนุภาคนาโนทองคำเป็นสัดส่วนโดยตรงกับ
ปริมาณของ S. typhi ดังนั้นความไวของการกำหนด typhi เอส
มีความสัมพันธ์กับความไวของ Cu (II) การกำหนดไอออน ของเรา
เป็นเป้าหมายที่จะประเมินผลการทำงานของการทดสอบทางเคมีไฟฟ้า
สำหรับการกำหนดของทองแดง (II) ไอออนโดยใช้คาร์บอนเหลือบ
อิเล็กโทรด หลายพารามิเตอร์การตรวจสอบเพื่อให้ได้
เงื่อนไขที่เหมาะสมสำหรับลูกบาศ์ก (II) การกำหนดไอออน
3.2.1 ผลของการที่มีศักยภาพการสะสม
ผลของการที่มีศักยภาพการสะสมในปัจจุบันยอดการลอก
ของ Cu (II) การศึกษาจาก ionwas-0.3V ถึง -0.6 V. ขั้วบวก
กระแสสูงสุดเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วจาก-0.3V ถึง -0.45 V, และ
ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญถูกตั้งข้อสังเกตสำหรับปัจจุบันยอดขั้วบวก
ระหว่าง 0.5V และ 0.6V-ตามที่แสดงในรูปที่ 2 (A) ดังนั้นการ
ที่มีศักยภาพการสะสมของ-0.5V ได้รับเลือกในการทดลอง
3.2.2 ผลของเวลาการสะสม
เวลาการสะสมของไอออนทองแดง (II) ที่ขั้วไฟฟ้าคาร์บอนเหลือบ
ผลโดยตรงต่อความไวของการวิเคราะห์ขั้วบวกลอก
ด้วยเหตุนี้อิทธิพลของเวลาการสะสมสำหรับการตรวจสอบ
ของทองแดงได้รับการศึกษาที่มี ครั้งสะสมตั้งแต่
1min จะ 8min ดังแสดงในรูปที่ 2 (B) เมื่อครั้งการสะสม
เพิ่มขึ้นจาก 1 นาทีถึง 6 นาทีกระแสสูงสุดขั้วบวกยัง
เพิ่มขึ้นและหลัง 6 นาทีในปัจจุบันยังคงอยู่อย่างต่อเนื่อง ดังนั้น
6 นาทีรับเลือกให้เป็นเวลาสะสมที่เหมาะสม
3.2.3 เชิงเส้น
เพื่อที่จะตัดสินความเป็นไปได้ของการใช้การวิเคราะห์เชิงปริมาณเพื่อ
วิเคราะห์ช่วงเชิงเส้นถูกตรวจสอบ ภายใต้ที่ดีที่สุด
เงื่อนไขเชิงเส้นที่ดีในการขั้วบวกสูงสุดในปัจจุบันที่มี
ทองแดง (II) ความเข้มข้นในช่วง 0.10-100? Mwas ได้
ด้วยค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์เชิงเส้นของ .9950 (ตาม shownin รูปที่ 2. (C))
จำกัด ที่ตรวจพบ ซึ่งได้รับการคำนวณเป็นสามเท่าของมาตรฐาน
การเบี่ยงเบนเป็น 3.77 × 10-2? เอ็ม มันจึงสามารถสรุปได้
ว่าขั้วบวกลอก voltammetry เป็น sensitivemethod สูงมาก
เพื่อ Cu (II) การกำหนดไอออนและดังนั้นจึงทองแดงเพิ่มทอง
อนุภาคนาโนสามารถตรวจพบได้อย่างมีประสิทธิภาพโดยวิธีการนี้
3.3 การเพิ่มประสิทธิภาพของเงื่อนไข immunoassay
3.3.1 ผลของความเข้มข้นและเวลาการเกิดปฏิกิริยาของ
สารละลายทองแดงเพิ่ม
ความไวของ immunoassay ไฟฟ้าขึ้นอยู่กับ
แอนติบอดีที่ติดฉลากทองคอลลอยด์สามารถทำได้โดยการเร่งปฏิกิริยา
การตกตะกอนของทองแดงอนุภาคนาโนทอง ความเข้มข้น
ของทองแดงจึงจะส่งผลกระทบต่อปริมาณของโลหะทองแดง
วางอยู่บนอนุภาคนาโนทอง ความเข้มข้นของทองแดงใน
สารละลายทองแดงเพิ่มการถูกตรวจสอบในช่วงของ
0.10-0.40 เมตรแสดงให้เห็นถึงผลที่ได้ (รูปที่ 3 (A)) ที่ขั้วบวก
ปัจจุบันยอด increasedwith เพิ่มความเข้มข้นทองแดงพร้อม
กับสัญญาณพื้นหลัง ดังนั้นอัตราส่วนของปัจจุบันระหว่าง
S. typhi และสัญญาณพื้นหลังที่คำนวณได้เป็นหน้าที่
ของความเข้มข้นทองแดงเพื่อตรวจสอบความเข้มข้น
ที่ให้ความไวที่เหมาะสม อัตราส่วนสัญญาณต่อพื้นหลัง
ถึงค่าสูงสุดที่ความเข้มข้นทองแดงของ 0.10M และ
เป็นสัญญาณอย่างต่อเนื่องตามที่แสดงในรูปที่ 3 (B) เพื่อให้มั่นใจว่าปริมาณของ
ทองแดงก็เพียงพอสำหรับการตรวจสอบของเอส typhi จึง; ทองแดงส่วนเกิน
ความเข้มข้นของ 0.2Mwas เลือกสำหรับการทดลองที่ตามมา
เวลาการเกิดปฏิกิริยาของสารละลายทองแดงเพิ่มก็ควร
จะปรับเพราะมันเป็นเรื่องที่เกี่ยวข้องกับจำนวนเงินที่ทำจากโลหะทองแดง
ปริมาณของแอนติบอดีเคลือบ (แอนติบอดีโพลีกระต่ายกับ
polysaccharides ของ S. typhi O901) บนพื้นผิวของอนุภาคนาโนทอง
ถูกปรับให้เหมาะสมจาก 75mg / L 1200 mg / ลิตร การแก้ปัญหาที่ถูก
จัดทำขึ้นจากการแก้ปัญหา 15,000 mg / L หุ้นของแอนติบอดีกระต่าย
ที่จะ S. typhi ปริมาณที่เหมาะสมของ solutionwas หุ้นเพิ่มเข้าไปใน
หลอด centrifuge มี 2.0mL ของการแก้ปัญหาทองคอลลอยด์
solutionwas ปรับ pH 8.0 ภายใต้ตื่นเต้น andwas ตามด้วย
การบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง การดูดกลืนแสงที่ 519 นาโนเมตร
ของตัวอย่างเหล่านี้ถูกบันทึกไว้และพล็อตเทียบกับปริมาณของ
แอนติบอดีเคลือบเพื่อที่จะกำหนดจำนวนที่เหมาะสมของการเคลือบ
แอนติบอดี
หลังจากได้รับจำนวนเงินที่ดีที่สุดของแอนติบอดีเคลือบ
แอนติบอดีคอลลอยด์ผันทองได้เตรียม ปรับ
ปริมาณของแอนติบอดีโพลีกระต่ายกับ polysaccharides ของ
เอส แบคทีเรียชนิดหนึ่งถูกบันทึกอยู่ใน 2 มล. ของการแก้ปัญหาทองคอลลอยด์ solutionwas
ปรับแล้ว pH 8.0 ใช้ Na2CO3 andwas ตามด้วย
การบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมงภายใต้การกวน ถัดไป 100 ลิตร
ของการแก้ปัญหา 3% BSA ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อลดการดูดซับเชิญชม,
และ solutionwas บ่มภายใต้ตื่นเต้นสำหรับชั่วโมงเพิ่มเติม
ที่อุณหภูมิห้อง แอนติบอดีคอลลอยด์ผันทอง
หมุนเหวี่ยงที่ 15,000 รอบต่อนาทีเพื่อ 10min ตะกอนอ่อนถูกเก็บรวบรวมล้างและการสนับสนุนในการแก้ปัญหาพีบีเอสที่ผัน
จะถูกเก็บไว้นานกว่า 1 เดือนที่ 4 ◦ C.
2.4 ขั้นตอน Immunoassay
immunoassay ขั้นตอนที่แสดงในรูปที่ 1. ขั้นแรก 50? ลิตร
ของ 125mg / L โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ถูกเพิ่มเข้าไปในสไตรีน
microwells และบ่มที่อุณหภูมิ 37 ◦ C เป็นเวลา 2 ชั่วโมง ประการที่สองการแก้ปัญหาที่ถูก
ลบออกและ microwells ถูกล้างด้วยพีบีเอส (pH 7.4) ใน
สี่ครั้งตามด้วยนอกเหนือจาก 50? ลิตรของการแก้ปัญหา BSA 1% ที่จะ
ปิดกั้นเว็บไซต์ที่ใช้งานของ microwells จากการดูดซับเชิญชม
microwells ถูกบ่มที่ 37 ◦ C เป็นเวลา 2 ชั่วโมง พีบีเอส (pH 7.4)
ขั้นตอนการซักซ้ำตามด้วยการเพิ่มขึ้นของ 50? ลิตร S.
typhi เป็น microwells หลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 37 ◦ C เป็นเวลา 1 ชั่วโมงตาม
ด้วยอีกขั้นตอนการซักผ้าพีบีเอส, 50? ลิตรแอนติบอดีทองคอลลอยด์
ผันถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อแก้ปัญหาซึ่งได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 37 ◦ C
เป็นเวลา 1 ชั่วโมงเพื่อให้ได้ปฏิกิริยาแซนวิช หลังจากดำเนินการ
สี่ขั้นตอนการซักผ้า, 100 ลิตรของการแก้ปัญหาทองแดงเพิ่มได้รับการ
เพิ่มเข้ามาในการแก้ปัญหาซึ่งได้รับการบ่มที่อุณหภูมิห้อง
เป็นเวลา 10 นาที หลังจาก microwells ถูกล้างสี่ครั้งด้วยทวีคูณ
น้ำกลั่น 100 ลิตร 1M สารละลายกรดไนตริกถูกบันทึก
ละลายทองแดง ในที่สุดการแก้ปัญหาที่มีทองแดงปล่อย
ไอออนถูกย้ายเข้าไปในเซลล์ไฟฟ้าเคมีและปรับลด
ไปประมาณ 3 mL ด้วยน้ำกลั่นทวีคูณ การทดลองที่ได้ดำเนิน
การโดยขั้วบวก voltammetry ลอก
3 ผลและอภิปราย
3.1 การเตรียมแอนติบอดีคอลลอยด์ผันทอง
3.1.1 การเตรียมอนุภาคนาโนทองคำ
เพื่อลักษณะของอนุภาคนาโนทองสเปกตรัม UV-Vis หลัก
ทอง (III) ไอออนและโซลูชั่นที่อนุภาคนาโนทองคำที่ถูก
บันทึกไว้ มันถูกตั้งข้อสังเกตว่าการดูดกลืนแสงสูงสุดของ
อนุภาคนาโนทองที่เกิดขึ้นที่ความยาวคลื่น 519 นาโนเมตรซึ่ง
มีความคล้ายคลึงกับรายงานอื่น ๆ [25] ผลที่ได้นี้ชี้ให้เห็นว่า
การสังเคราะห์อนุภาคนาโนได้ให้ผลสีทอง จากการวัด TEM,
ขนาดอนุภาคนาโนทองคำเฉลี่ย 15 นาโนเมตร (ข้อมูลไม่
แสดง)
3.1.2 การเตรียมแอนติบอดีคอลลอยด์ผันทอง
โดยใช้ขั้นตอนการเตรียมการแอนติบอดีทองคอลลอยด์
conjugates ดังกล่าวข้างต้นพบว่าแอนติบอดี
จะผูกด้วยอนุภาคนาโนทอง สเปกตรัมที่มองเห็นของ
แอนติบอดีคอลลอยด์ผันทองแสดงวงดนตรีการดูดซึมที่
519 นาโนเมตรและไม่มีการเปลี่ยนแปลงที่สำคัญในการดูดซึม
สเปกตรัมของอนุภาคนาโนทอง นี้อาจจะอธิบายได้ว่าทอง
ยังคงจัดแสดงลักษณะของอนุภาค nanosized หลังจากที่มีผลผูกพัน
แต่แอนติบอดีคอลลอยด์ผันทองที่สร้าง
สัญญาณสูงขึ้นเมื่อเทียบกับของอนุภาคนาโนทองที่
ความยาวคลื่นเดียวกัน
ผลกระทบจากปริมาณของแอนติบอดีเคลือบ บนพื้นผิวของ
อนุภาคนาโนทองถูกตรวจสอบในช่วง 75-1200mg / ลิตร
มันอาจจะเห็นได้ว่าการดูดกลืนแสงเพิ่มขึ้นเมื่อเพิ่ม
ปริมาณของแอนติบอดีเคลือบถึง 450 มก. / ลิตร การดูดกลืนแสง
ลดลงหลังจากที่ปริมาณของแอนติบอดีเคลือบสูงกว่า
450 mg / L (ไม่ได้แสดงข้อมูล) นี้ชี้ให้เห็นว่าความเข้มข้นของ
450 mg / L เป็นจำนวนเงินที่เหมาะสมของการเคลือบแอนติบอดี นอกจากนี้
ยังเป็นที่มีประสิทธิภาพในการป้องกันการรวม
3.2 การหาปริมาณทองแดง (II) ไอออนที่ขั้วไฟฟ้าคาร์บอนเหลือบ
ในวิธีการที่นำเสนอของเราในขั้นตอนสุดท้ายของ immunoassay,
ทองแดงวางอยู่บนอนุภาคนาโนทองคำที่ถูกละลายในกรด
และการแก้ปัญหาที่ตรวจพบ GC อิเล็กโทรด ปริมาณของทองแดง
วางอยู่บนอนุภาคนาโนทองคำเป็นสัดส่วนโดยตรงกับ
ปริมาณของ S. typhi ดังนั้นความไวของการกำหนด typhi เอส
มีความสัมพันธ์กับความไวของ Cu (II) การกำหนดไอออน ของเรา
เป็นเป้าหมายที่จะประเมินผลการทำงานของการทดสอบทางเคมีไฟฟ้า
สำหรับการกำหนดของทองแดง (II) ไอออนโดยใช้คาร์บอนเหลือบ
อิเล็กโทรด หลายพารามิเตอร์การตรวจสอบเพื่อให้ได้
เงื่อนไขที่เหมาะสมสำหรับลูกบาศ์ก (II) การกำหนดไอออน
3.2.1 ผลของการที่มีศักยภาพการสะสม
ผลของการที่มีศักยภาพการสะสมในปัจจุบันยอดการลอก
ของ Cu (II) การศึกษาจาก ionwas-0.3V ถึง -0.6 V. ขั้วบวก
กระแสสูงสุดเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วจาก-0.3V ถึง -0.45 V, และ
ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญถูกตั้งข้อสังเกตสำหรับปัจจุบันยอดขั้วบวก
ระหว่าง 0.5V และ 0.6V-ตามที่แสดงในรูปที่ 2 (A) ดังนั้นการ
ที่มีศักยภาพการสะสมของ-0.5V ได้รับเลือกในการทดลอง
3.2.2 ผลของเวลาการสะสม
เวลาการสะสมของไอออนทองแดง (II) ที่ขั้วไฟฟ้าคาร์บอนเหลือบ
ผลโดยตรงต่อความไวของการวิเคราะห์ขั้วบวกลอก
ด้วยเหตุนี้อิทธิพลของเวลาการสะสมสำหรับการตรวจสอบ
ของทองแดงได้รับการศึกษาที่มี ครั้งสะสมตั้งแต่
1min จะ 8min ดังแสดงในรูปที่ 2 (B) เมื่อครั้งการสะสม
เพิ่มขึ้นจาก 1 นาทีถึง 6 นาทีกระแสสูงสุดขั้วบวกยัง
เพิ่มขึ้นและหลัง 6 นาทีในปัจจุบันยังคงอยู่อย่างต่อเนื่อง ดังนั้น
6 นาทีรับเลือกให้เป็นเวลาสะสมที่เหมาะสม
3.2.3 เชิงเส้น
เพื่อที่จะตัดสินความเป็นไปได้ของการใช้การวิเคราะห์เชิงปริมาณเพื่อ
วิเคราะห์ช่วงเชิงเส้นถูกตรวจสอบ ภายใต้ที่ดีที่สุด
เงื่อนไขเชิงเส้นที่ดีในการขั้วบวกสูงสุดในปัจจุบันที่มี
ทองแดง (II) ความเข้มข้นในช่วง 0.10-100? Mwas ได้
ด้วยค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์เชิงเส้นของ .9950 (ตาม shownin รูปที่ 2. (C))
จำกัด ที่ตรวจพบ ซึ่งได้รับการคำนวณเป็นสามเท่าของมาตรฐาน
การเบี่ยงเบนเป็น 3.77 × 10-2? เอ็ม มันจึงสามารถสรุปได้
ว่าขั้วบวกลอก voltammetry เป็น sensitivemethod สูงมาก
เพื่อ Cu (II) การกำหนดไอออนและดังนั้นจึงทองแดงเพิ่มทอง
อนุภาคนาโนสามารถตรวจพบได้อย่างมีประสิทธิภาพโดยวิธีการนี้
3.3 การเพิ่มประสิทธิภาพของเงื่อนไข immunoassay
3.3.1 ผลของความเข้มข้นและเวลาการเกิดปฏิกิริยาของ
สารละลายทองแดงเพิ่ม
ความไวของ immunoassay ไฟฟ้าขึ้นอยู่กับ
แอนติบอดีที่ติดฉลากทองคอลลอยด์สามารถทำได้โดยการเร่งปฏิกิริยา
การตกตะกอนของทองแดงอนุภาคนาโนทอง ความเข้มข้น
ของทองแดงจึงจะส่งผลกระทบต่อปริมาณของโลหะทองแดง
วางอยู่บนอนุภาคนาโนทอง ความเข้มข้นของทองแดงใน
สารละลายทองแดงเพิ่มการถูกตรวจสอบในช่วงของ
0.10-0.40 เมตรแสดงให้เห็นถึงผลที่ได้ (รูปที่ 3 (A)) ที่ขั้วบวก
ปัจจุบันยอด increasedwith เพิ่มความเข้มข้นทองแดงพร้อม
กับสัญญาณพื้นหลัง ดังนั้นอัตราส่วนของปัจจุบันระหว่าง
S. typhi และสัญญาณพื้นหลังที่คำนวณได้เป็นหน้าที่
ของความเข้มข้นทองแดงเพื่อตรวจสอบความเข้มข้น
ที่ให้ความไวที่เหมาะสม อัตราส่วนสัญญาณต่อพื้นหลัง
ถึงค่าสูงสุดที่ความเข้มข้นทองแดงของ 0.10M และ
เป็นสัญญาณอย่างต่อเนื่องตามที่แสดงในรูปที่ 3 (B) เพื่อให้มั่นใจว่าปริมาณของ
ทองแดงก็เพียงพอสำหรับการตรวจสอบของเอส typhi จึง; ทองแดงส่วนเกิน
ความเข้มข้นของ 0.2Mwas เลือกสำหรับการทดลองที่ตามมา
เวลาการเกิดปฏิกิริยาของสารละลายทองแดงเพิ่มก็ควร
จะปรับเพราะมันเป็นเรื่องที่เกี่ยวข้องกับจำนวนเงินที่ทำจากโลหะทองแดง
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.3.2 . แอนติบอดี - คอลลอยด์ทองผัน
ปริมาณเคลือบแอนติบอดี ( antibody กระต่ายใช้สำหรับ S .
polysaccharides ที่ได้รับ o901 ) บนพื้นผิวของอนุภาคนาโนของทอง
คือปรับจาก 75 มก. / ลิตร , 200 มก. / ล. โซลูชั่น
เตรียมจาก 15 , 000 มก. / ล. หุ้นโซลูชั่นของกระต่ายที่ได้รับภูมิคุ้มกัน
s . ปริมาณที่เหมาะสมของหุ้น solutionwas เพิ่มเข้ามา
centrifuge หลอดบรรจุ 20ml ของโซลูชั่นทองคอลลอยด์
solutionwas ปรับ pH 8.0 ภายใต้กวนดำเนินการตาม
บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมงค่าการดูดกลืนแสงที่คุณ nm
ตัวอย่างเหล่านี้ถูกบันทึกไว้และวางแผนเมื่อเทียบกับปริมาณของ
เคลือบแอนติบอดีเพื่อหาปริมาณที่เหมาะสมของสารเคลือบผิว
หลังจากที่ได้รับปริมาณแอนติบอดี ที่เคลือบแอนติบอดี ,
แอนติบอดี ( Colloidal Gold ) ที่เตรียมไว้ การปรับปริมาณของแอนติบอดีที่ใช้สำหรับกระต่าย
s polysaccharides ของประเทศก็เพิ่ม 2ml ของโซลูชั่นทองคอลลอยด์ การ solutionwas
แล้วปรับ pH 8.0 ใช้ Na2CO3 ดำเนินการตาม
บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ในการกวน หน้า 100 L
ของสารละลาย BSA 3% เพิ่มเพื่อลดการติดเชื้อ
ดูดซับและ solutionwas บ่มภายใต้กวนสำหรับชั่วโมงเพิ่มเติม
อุณหภูมิห้อง แอนติบอดี ( Colloidal Gold ) เป็นระดับที่ 15000 rpm สำหรับวัน
. ตะกอนนุ่มเก็บล้างและแขวนลอยในสารละลาย PBS ที่ผัน
สามารถเก็บไว้ได้นานกว่า 1 เดือนที่ 4 ◦ C .
2.4 . ในผู้ป่วยที่มีขั้นตอน
ขั้นตอนแสดงในรูปที่ 1 แรก , 50 L
ของ 125mg / L โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่เพิ่มลงในพอลิสไตรีน
microwells บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ◦ 2 สารละลาย
ลบและ microwells ถูกล้างด้วย pbs ( pH 7.4 )
4 ครั้งตามด้วยเพิ่ม 50 L ของสารละลาย BSA 1 %
บล็อกไซต์งาน ของ microwells จากการติดเชื้อการ
microwells ถูกบ่มที่ 37 ◦ C 2 H , PBS ( pH 7.4 )
ขั้นตอนคือล้างซ้ำ ตามด้วยเพิ่ม 50 L S .
ไทฟอยด์ใน microwells . หลังจากเพาะที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ตาม◦
อีกซักก้าว พีบีเอส , 50 ลิตร ) – Colloidal Gold
) เติมสารละลายซึ่งถูกบ่มที่ 37 ◦ C
1 H เพื่อให้ได้แซนวิชปฏิกิริยา หลังจากการแสดง
4 ขั้นตอนการล้าง , 100 ผมของโซลูชั่นเสริมทองแดง
เพิ่มโซลูชั่นซึ่งถูกบ่มที่อุณหภูมิห้อง
สำหรับวัน หลังจาก microwells ได้ซัก 4 เท่าทวีคูณ
น้ำกลั่น 100 l M กรดไนตริกโซลูชั่นเพิ่ม
ละลายทองแดง ในที่สุด สารละลายที่มีไอออนออกทองแดง
โอนในเซลล์ไฟฟ้าเคมีและจาง
ไปม. ด้วยทวีคูณกลั่นน้ำ ทดลองพบว่า
โดยการถอดแคทไอออน .
3 ผลและการอภิปราย
3.1 . การเตรียมแอนติบอดี–คอลลอยด์ทองผัน
3.1.1 . การเตรียมการของอนุภาคทองระดับนาโนเมตร
ลักษณะของอนุภาคนาโนของทอง– UV Vis , การเปลี่ยนแปลง
ของทอง ( III ) ไอออนและทองสำหรับโซลูชั่นถูก
บันทึก พบว่าค่าการดูดกลืนแสงสูงสุดของ
อนุภาคนาโนของทองขึ้นที่ความยาวคลื่น 520 nm ซึ่ง
คล้ายคลึงกับรายงานอื่น ๆ [ 25 ] ผลการศึกษาพบว่า มีผล
การสังเคราะห์อนุภาคทองระดับนาโนเมตร จากการวัดแบบเฉลี่ย , ทอง
สำหรับขนาดทดลอง 15 nm ( ข้อมูลไม่แสดง 3.1.2
) . . การเตรียมแอนติบอดี–คอลลอยด์ทองผัน
โดยใช้วิธีการการเตรียมแอนติบอดี ( Colloidal Gold
สารประกอบที่ดังกล่าวข้างต้น พบว่าแอนติบอดี
สามารถผูกกับอนุภาคนาโนของทอง . สเปกตรัมที่มองเห็นของ
) – Colloidal Gold ) แสดงการดูดกลืนที่
519 nm และไม่มีการเปลี่ยนแปลงในการดูดซึม
สเปกตรัมของอนุภาคนาโนของทอง . นี้สามารถอธิบายได้ว่าทอง
ยังคงแสดงลักษณะของอนุภาค nanosized หลังจากผูก .
อย่างไรก็ตามแอนติบอดี–คอลลอยด์ทองผันสร้าง
สัญญาณที่สูง เมื่อเปรียบเทียบกับของทองสำหรับ
ที่ความยาวคลื่นเดียวกัน ผลของปริมาณของแอนติบอดีที่เคลือบบนพื้นผิวของอนุภาคนาโนของทอง
ถูกตรวจสอบในช่วงของ 75 – 1200mg
/ Lจะเห็นว่าค่าเพิ่มขึ้น
ปริมาณเคลือบแอนติบอดีถึง 450 มิลลิกรัม / ลิตรค่า
ลดลงหลังปริมาณเคลือบแอนติบอดีสูงกว่า
450 mg / l ( ข้อมูลไม่แสดง ) นี้ พบว่า ความเข้มข้นของ
450 mg / l เป็นจำนวนเงินที่เหมาะสมของผิวเคลือบแอนติบอดี นอกจากนี้ยังมีประสิทธิภาพในการป้องกันการเกาะกลุ่ม
.
2 .การหาปริมาณไอออนคอปเปอร์ ( II ) ที่เป็นเหลือบ ขั้วไฟฟ้าคาร์บอน
ในวิธีการที่เสนอ ขั้นตอนสุดท้ายของผู้ป่วย ,
ทองแดงฝากไว้บนอนุภาคนาโนทองคำ ละลายได้ในกรด
โซลูชั่นและตรวจพบใน GC อิเล็กโทรด ปริมาณของทองแดง
ฝากไว้บนอนุภาคนาโนของทองจะเป็นสัดส่วนโดยตรงกับปริมาณที่ได้รับ
S . . ดังนั้น ความไวของประเทศกำหนด
Sเกี่ยวข้องกับความไวของ Cu ( II ) ไอออน ความมุ่งมั่น เป้าหมายของเราคือเพื่อประเมินสมรรถนะของ
วิธีทางเคมีไฟฟ้าสำหรับการหาปริมาณทองแดง ( II ) ไอออนโดยใช้ขั้วไฟฟ้าคาร์บอน
เหมือนแก้ว หลายพารามิเตอร์ คือ เพื่อให้ได้ภาพที่เหมาะสมสำหรับ
Cu ( II ) รายละเอียดการดำเนินงาน .
. ผลของการเคลือบศักยภาพ
ผลกระทบของศักยภาพในการสะสมสูงสุดในปัจจุบัน
ของ Cu ( II ) ionwas ศึกษาจาก 0.3v 0.6 V −−ให้กระแสสูงสุดได้เพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วจากการ
0.3v ถึง−− 0.45 V ,
ไม่มีความแตกต่างที่พบในการสูงสุดในปัจจุบัน
ระหว่าง−− 0.6v เป็น 0.5v และ ในรูปที่ 2 ( ก ) ดังนั้น การเกิดของ−
0.5v ถูกเลือกในการทดลอง
3.2.2 .ผลของการเคลือบเวลา
สะสมเวลาของ Cu ( II ) ไอออนที่เป็นเหลือบ ขั้วไฟฟ้าคาร์บอน
มีผลโดยตรงต่อความไวของการปอกการวิเคราะห์ .
สำหรับเหตุผลนี้ อิทธิพลของเวลาการตรวจหา
ทองแดง ) กับเวลาในการเคลือบตั้งแต่
1 นาทีเพื่อ 8min . แสดงในรูปที่ 2 ( ข ) เมื่อสะสมครั้ง
) เพิ่มขึ้นจาก 1 นาทีถึง 6 นาทีกระแสสูงสุดการยัง
เพิ่มขึ้น และหลังจาก 6 นาที ปัจจุบันยังคงคงที่ ดังนั้น ,
6 นาทีโดยเลือกเวลาการสะสมที่เหมาะสม .
3.2.3 . เส้นตรง
เพื่อตัดสินความเป็นไปได้ของการใช้วิธีวิเคราะห์เชิงปริมาณ
, ช่วงการตรวจวัดและตรวจสอบ ภายใต้เงื่อนไขที่เหมาะสม
, ความถี่ในการสูงสุดในปัจจุบันกับ
ทองแดง ( II ) ในช่วงความเข้มข้น 0.10 – 100 mwas ได้
ที่มีค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์เชิงเส้นของ 0.9950 ( shownin รูปที่ 2 ( c ) ) .
วงเงินได้ ซึ่งคิดเป็น 3 เท่าของส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน
, 3.77 × 10 − 2 เมตร มันจึงสามารถสรุป
ว่า การถอดแคทไอออนเป็นอย่างมาก sensitivemethod
สำหรับไอออน Cu ( II ) ความมุ่งมั่นและดังนั้นจึงเพิ่มทองแดงทอง
นาโนสามารถได้อย่างมีประสิทธิภาพตรวจโดยวิธีนี้ .
3 . การเพิ่มประสิทธิภาพของเงื่อนไขทาง
3.3.1 . ผลของความเข้มข้นและเวลาปฏิกิริยาของโซลูชั่น
ทองแดงเพิ่มความไวของทางไฟฟ้าเคมีตาม
เป็นคอลลอยด์ทองป้ายแอนติบอดีสามารถทำได้โดยการ
การตกตะกอนของทองแดงในอนุภาคนาโนของทอง . ความเข้มข้นของทองแดง จึงส่งผลกระทบต่อ
ฝากปริมาณโลหะทองแดงบนอนุภาคนาโนของทอง . ความเข้มข้นของทองแดงในสารละลายทองแดง
Enhancer ตรวจสอบภายในช่วงของ
0.10 – 0.40 เมตร พบ ( รูปที่ 3 ( ก ) ที่สูงสุดในปัจจุบันการเพิ่มขึ้นเมื่อเพิ่มความเข้มข้นของทองแดง
พร้อมกับสัญญาณพื้นหลัง ดังนั้น อัตราส่วนของปัจจุบันระหว่าง
S . ไทฟอยด์และสัญญาณพื้นหลังมีค่าเป็นฟังก์ชัน
ของความเข้มข้นของทองแดงเพื่อตรวจสอบความเข้มข้น
ซึ่งให้ไวที่สุด สัญญาณ
พื้นถึงอัตราส่วนมูลค่าสูงสุดที่ความเข้มข้นของทองแดงและของ 0.10m
สัญญาณคงที่ ดังแสดงในรูปที่ 3 ( B ) เพื่อให้มั่นใจว่าปริมาณ
ทองแดงก็เพียงพอสำหรับการตรวจหา S . ไทฟอยด์ , ดังนั้น ; ที่ความเข้มข้นทองแดง
ส่วนเกินของ 0.2mwas เลือกสำหรับการทดลองที่ตามมาทั้งหมด
เวลาปฏิกิริยา ของเสริมทองแดงโซลูชั่นควร
จะเหมาะ เพราะมันเกี่ยวข้องกับปริมาณของโลหะทองแดง
ปริมาณเคลือบแอนติบอดี ( antibody กระต่ายใช้สำหรับ S .
polysaccharides ที่ได้รับ o901 ) บนพื้นผิวของอนุภาคนาโนของทอง
คือปรับจาก 75 มก. / ลิตร , 200 มก. / ล. โซลูชั่น
เตรียมจาก 15 , 000 มก. / ล. หุ้นโซลูชั่นของกระต่ายที่ได้รับภูมิคุ้มกัน
s . ปริมาณที่เหมาะสมของหุ้น solutionwas เพิ่มเข้ามา
centrifuge หลอดบรรจุ 20ml ของโซลูชั่นทองคอลลอยด์
solutionwas ปรับ pH 8.0 ภายใต้กวนดำเนินการตาม
บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมงค่าการดูดกลืนแสงที่คุณ nm
ตัวอย่างเหล่านี้ถูกบันทึกไว้และวางแผนเมื่อเทียบกับปริมาณของ
เคลือบแอนติบอดีเพื่อหาปริมาณที่เหมาะสมของสารเคลือบผิว
หลังจากที่ได้รับปริมาณแอนติบอดี ที่เคลือบแอนติบอดี ,
แอนติบอดี ( Colloidal Gold ) ที่เตรียมไว้ การปรับปริมาณของแอนติบอดีที่ใช้สำหรับกระต่าย
s polysaccharides ของประเทศก็เพิ่ม 2ml ของโซลูชั่นทองคอลลอยด์ การ solutionwas
แล้วปรับ pH 8.0 ใช้ Na2CO3 ดำเนินการตาม
บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ในการกวน หน้า 100 L
ของสารละลาย BSA 3% เพิ่มเพื่อลดการติดเชื้อ
ดูดซับและ solutionwas บ่มภายใต้กวนสำหรับชั่วโมงเพิ่มเติม
อุณหภูมิห้อง แอนติบอดี ( Colloidal Gold ) เป็นระดับที่ 15000 rpm สำหรับวัน
. ตะกอนนุ่มเก็บล้างและแขวนลอยในสารละลาย PBS ที่ผัน
สามารถเก็บไว้ได้นานกว่า 1 เดือนที่ 4 ◦ C .
2.4 . ในผู้ป่วยที่มีขั้นตอน
ขั้นตอนแสดงในรูปที่ 1 แรก , 50 L
ของ 125mg / L โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่เพิ่มลงในพอลิสไตรีน
microwells บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ◦ 2 สารละลาย
ลบและ microwells ถูกล้างด้วย pbs ( pH 7.4 )
4 ครั้งตามด้วยเพิ่ม 50 L ของสารละลาย BSA 1 %
บล็อกไซต์งาน ของ microwells จากการติดเชื้อการ
microwells ถูกบ่มที่ 37 ◦ C 2 H , PBS ( pH 7.4 )
ขั้นตอนคือล้างซ้ำ ตามด้วยเพิ่ม 50 L S .
ไทฟอยด์ใน microwells . หลังจากเพาะที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ตาม◦
อีกซักก้าว พีบีเอส , 50 ลิตร ) – Colloidal Gold
) เติมสารละลายซึ่งถูกบ่มที่ 37 ◦ C
1 H เพื่อให้ได้แซนวิชปฏิกิริยา หลังจากการแสดง
4 ขั้นตอนการล้าง , 100 ผมของโซลูชั่นเสริมทองแดง
เพิ่มโซลูชั่นซึ่งถูกบ่มที่อุณหภูมิห้อง
สำหรับวัน หลังจาก microwells ได้ซัก 4 เท่าทวีคูณ
น้ำกลั่น 100 l M กรดไนตริกโซลูชั่นเพิ่ม
ละลายทองแดง ในที่สุด สารละลายที่มีไอออนออกทองแดง
โอนในเซลล์ไฟฟ้าเคมีและจาง
ไปม. ด้วยทวีคูณกลั่นน้ำ ทดลองพบว่า
โดยการถอดแคทไอออน .
3 ผลและการอภิปราย
3.1 . การเตรียมแอนติบอดี–คอลลอยด์ทองผัน
3.1.1 . การเตรียมการของอนุภาคทองระดับนาโนเมตร
ลักษณะของอนุภาคนาโนของทอง– UV Vis , การเปลี่ยนแปลง
ของทอง ( III ) ไอออนและทองสำหรับโซลูชั่นถูก
บันทึก พบว่าค่าการดูดกลืนแสงสูงสุดของ
อนุภาคนาโนของทองขึ้นที่ความยาวคลื่น 520 nm ซึ่ง
คล้ายคลึงกับรายงานอื่น ๆ [ 25 ] ผลการศึกษาพบว่า มีผล
การสังเคราะห์อนุภาคทองระดับนาโนเมตร จากการวัดแบบเฉลี่ย , ทอง
สำหรับขนาดทดลอง 15 nm ( ข้อมูลไม่แสดง 3.1.2
) . . การเตรียมแอนติบอดี–คอลลอยด์ทองผัน
โดยใช้วิธีการการเตรียมแอนติบอดี ( Colloidal Gold
สารประกอบที่ดังกล่าวข้างต้น พบว่าแอนติบอดี
สามารถผูกกับอนุภาคนาโนของทอง . สเปกตรัมที่มองเห็นของ
) – Colloidal Gold ) แสดงการดูดกลืนที่
519 nm และไม่มีการเปลี่ยนแปลงในการดูดซึม
สเปกตรัมของอนุภาคนาโนของทอง . นี้สามารถอธิบายได้ว่าทอง
ยังคงแสดงลักษณะของอนุภาค nanosized หลังจากผูก .
อย่างไรก็ตามแอนติบอดี–คอลลอยด์ทองผันสร้าง
สัญญาณที่สูง เมื่อเปรียบเทียบกับของทองสำหรับ
ที่ความยาวคลื่นเดียวกัน ผลของปริมาณของแอนติบอดีที่เคลือบบนพื้นผิวของอนุภาคนาโนของทอง
ถูกตรวจสอบในช่วงของ 75 – 1200mg
/ Lจะเห็นว่าค่าเพิ่มขึ้น
ปริมาณเคลือบแอนติบอดีถึง 450 มิลลิกรัม / ลิตรค่า
ลดลงหลังปริมาณเคลือบแอนติบอดีสูงกว่า
450 mg / l ( ข้อมูลไม่แสดง ) นี้ พบว่า ความเข้มข้นของ
450 mg / l เป็นจำนวนเงินที่เหมาะสมของผิวเคลือบแอนติบอดี นอกจากนี้ยังมีประสิทธิภาพในการป้องกันการเกาะกลุ่ม
.
2 .การหาปริมาณไอออนคอปเปอร์ ( II ) ที่เป็นเหลือบ ขั้วไฟฟ้าคาร์บอน
ในวิธีการที่เสนอ ขั้นตอนสุดท้ายของผู้ป่วย ,
ทองแดงฝากไว้บนอนุภาคนาโนทองคำ ละลายได้ในกรด
โซลูชั่นและตรวจพบใน GC อิเล็กโทรด ปริมาณของทองแดง
ฝากไว้บนอนุภาคนาโนของทองจะเป็นสัดส่วนโดยตรงกับปริมาณที่ได้รับ
S . . ดังนั้น ความไวของประเทศกำหนด
Sเกี่ยวข้องกับความไวของ Cu ( II ) ไอออน ความมุ่งมั่น เป้าหมายของเราคือเพื่อประเมินสมรรถนะของ
วิธีทางเคมีไฟฟ้าสำหรับการหาปริมาณทองแดง ( II ) ไอออนโดยใช้ขั้วไฟฟ้าคาร์บอน
เหมือนแก้ว หลายพารามิเตอร์ คือ เพื่อให้ได้ภาพที่เหมาะสมสำหรับ
Cu ( II ) รายละเอียดการดำเนินงาน .
. ผลของการเคลือบศักยภาพ
ผลกระทบของศักยภาพในการสะสมสูงสุดในปัจจุบัน
ของ Cu ( II ) ionwas ศึกษาจาก 0.3v 0.6 V −−ให้กระแสสูงสุดได้เพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วจากการ
0.3v ถึง−− 0.45 V ,
ไม่มีความแตกต่างที่พบในการสูงสุดในปัจจุบัน
ระหว่าง−− 0.6v เป็น 0.5v และ ในรูปที่ 2 ( ก ) ดังนั้น การเกิดของ−
0.5v ถูกเลือกในการทดลอง
3.2.2 .ผลของการเคลือบเวลา
สะสมเวลาของ Cu ( II ) ไอออนที่เป็นเหลือบ ขั้วไฟฟ้าคาร์บอน
มีผลโดยตรงต่อความไวของการปอกการวิเคราะห์ .
สำหรับเหตุผลนี้ อิทธิพลของเวลาการตรวจหา
ทองแดง ) กับเวลาในการเคลือบตั้งแต่
1 นาทีเพื่อ 8min . แสดงในรูปที่ 2 ( ข ) เมื่อสะสมครั้ง
) เพิ่มขึ้นจาก 1 นาทีถึง 6 นาทีกระแสสูงสุดการยัง
เพิ่มขึ้น และหลังจาก 6 นาที ปัจจุบันยังคงคงที่ ดังนั้น ,
6 นาทีโดยเลือกเวลาการสะสมที่เหมาะสม .
3.2.3 . เส้นตรง
เพื่อตัดสินความเป็นไปได้ของการใช้วิธีวิเคราะห์เชิงปริมาณ
, ช่วงการตรวจวัดและตรวจสอบ ภายใต้เงื่อนไขที่เหมาะสม
, ความถี่ในการสูงสุดในปัจจุบันกับ
ทองแดง ( II ) ในช่วงความเข้มข้น 0.10 – 100 mwas ได้
ที่มีค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์เชิงเส้นของ 0.9950 ( shownin รูปที่ 2 ( c ) ) .
วงเงินได้ ซึ่งคิดเป็น 3 เท่าของส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน
, 3.77 × 10 − 2 เมตร มันจึงสามารถสรุป
ว่า การถอดแคทไอออนเป็นอย่างมาก sensitivemethod
สำหรับไอออน Cu ( II ) ความมุ่งมั่นและดังนั้นจึงเพิ่มทองแดงทอง
นาโนสามารถได้อย่างมีประสิทธิภาพตรวจโดยวิธีนี้ .
3 . การเพิ่มประสิทธิภาพของเงื่อนไขทาง
3.3.1 . ผลของความเข้มข้นและเวลาปฏิกิริยาของโซลูชั่น
ทองแดงเพิ่มความไวของทางไฟฟ้าเคมีตาม
เป็นคอลลอยด์ทองป้ายแอนติบอดีสามารถทำได้โดยการ
การตกตะกอนของทองแดงในอนุภาคนาโนของทอง . ความเข้มข้นของทองแดง จึงส่งผลกระทบต่อ
ฝากปริมาณโลหะทองแดงบนอนุภาคนาโนของทอง . ความเข้มข้นของทองแดงในสารละลายทองแดง
Enhancer ตรวจสอบภายในช่วงของ
0.10 – 0.40 เมตร พบ ( รูปที่ 3 ( ก ) ที่สูงสุดในปัจจุบันการเพิ่มขึ้นเมื่อเพิ่มความเข้มข้นของทองแดง
พร้อมกับสัญญาณพื้นหลัง ดังนั้น อัตราส่วนของปัจจุบันระหว่าง
S . ไทฟอยด์และสัญญาณพื้นหลังมีค่าเป็นฟังก์ชัน
ของความเข้มข้นของทองแดงเพื่อตรวจสอบความเข้มข้น
ซึ่งให้ไวที่สุด สัญญาณ
พื้นถึงอัตราส่วนมูลค่าสูงสุดที่ความเข้มข้นของทองแดงและของ 0.10m
สัญญาณคงที่ ดังแสดงในรูปที่ 3 ( B ) เพื่อให้มั่นใจว่าปริมาณ
ทองแดงก็เพียงพอสำหรับการตรวจหา S . ไทฟอยด์ , ดังนั้น ; ที่ความเข้มข้นทองแดง
ส่วนเกินของ 0.2mwas เลือกสำหรับการทดลองที่ตามมาทั้งหมด
เวลาปฏิกิริยา ของเสริมทองแดงโซลูชั่นควร
จะเหมาะ เพราะมันเกี่ยวข้องกับปริมาณของโลหะทองแดง
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- Vous été mannequin
- คุณขอเบอร์มือถือของเค้ามาให้ฉันหน่อย
- บ่ายนี้ผมลาหยุด
- เป็นได้แค่องครักษ์
- CoZy CoMFoRt
- لو سمحتي ردي
- ยีเอส แบตเตอรี่ ลงนามพันธมิตรทางธุรกิจกั
- เครื่องมือช่าง
- กี่วัน
- Send you pictures yes
- you are her?
- ้ีhurry
- เขาเป๋นลูกของพ่อมดที่ชั่วร้าย
- นักเรียนได้เรียนรู้
- Interrupt
- จัดขึ้นช่วงเดือนกรกฎาคมของทุกปีในเมืองโร
- มีแฟนยังคับ
- พรมชื่น
- I will find you
- ตําบล บางเมืองใหม่ อำเภอ เมืองสมุทรปรากา
- Garlic
- Sometimes, unfortunately, it may happen
- ฟัง
- ฟักลูกปูคืนสู่ธรรมชาติและศูนย์การเรียนรู
