conditions chosen in order to stimu

conditions chosen in order to stimulate the K+–Cl− cotransporter (KCC). 86Rb+ was added in 150 mM KNO3 to give a final [K+] of 7.5 mM in all experiments except those with HK saline and A23187-treated RBCs. After incubation with radioisotope for 10 min, RBCs were washed to remove extracellular 86Rb+, five-times in an ice-cold MgCl2 wash solution. For K+ efflux experiments, RBCs were loaded overnight at 4 °C by addition of 86Rb+ after which cells were washed five times in an ice-cold wash solution. RBCs were then suspended at 2% haematocrit
(Hct) in standard saline at 37 °C. Aliquots were taken at 5 min intervals for 30–60 min and spun through phthalate oil. The cell pellet was lysed with detergent, deproteinised with TCA, and counted by liquid scintillation (cpm). A semilog plot (of cpm at time = t/cpm at time = 0) was used to determine the rate constant for K+ efflux. Except for experiments to measure Na+/K+ pump activity, ouabain (100 μM) and bumetanide (10 μM) were present in all experiments to obviate any K+ transport through the Na+/K+ pump and the Na+–K+–2Cl− cotransporter, respectively. Either microhaematocrit determination or the cyanohaemoglobin method was used to measure the final Hct. KCC activity was assayed as
Cl−-dependent K+ influx; Gardos channel activity as the CLT-sensitive (5 μM) K+ influx; Na+/K+ pump activity as the ouabain-sensitive (100 μM) K+ influx and Psickle as the deoxygenation-induced K+ influx measured in the absence of Cl−.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เงื่อนไขที่เลือกเพื่อกระตุ้น K + – Cl− cotransporter (KCC) 86Rb + เพิ่ม 150 มม. KNO3 ให้สุดท้าย [K +] 7.5 มม.ในการทดลองทั้งหมดยกเว้นมี HK RBCs saline และ A23187 ถือว่า หลังจากบ่มกับ radioisotope สำหรับ 10 นาที RBCs ถูกล้างเอา extracellular 86Rb + ห้า - ครั้งในโซลูชันการล้าง MgCl2 ฉ่ำ สำหรับ K + efflux ทดลอง RBCs ถูกโหลดค้างคืนที่ 4 ° C โดยเพิ่ม 86Rb + หลังจากที่เซลล์ถูกล้างห้าครั้งในโซลูชันการล้างฉ่ำ RBCs ถูกหยุดชั่วคราวแล้วที่ haematocrit 2%(Hct) ในน้ำเกลือมาตรฐานที่ 37 องศาเซลเซียส Aliquots ถูกถ่ายในช่วงเวลา 5 นาทีสำหรับ 30 – 60 นาที และปั่นผ่านน้ำมันพทาเลท เม็ดเซลล์คือ lysed กับผงซักฟอก deproteinised กับ TCA และนับ โดย scintillation เหลว (cpm) แผน semilog (cpm ที่เวลา = t/cpm เวลา = 0) ถูกใช้เพื่อกำหนดค่าคงอัตราสำหรับ K + efflux ยกเว้นทดลองวัดนา + /mts K + ปั๊มกิจกรรม ouabain (100 μM) และบูมีทาไนด์ (10 μM) อยู่ในการทดลองทั้งหมดเพื่อ obviate ใด ๆ K + ขนส่งผ่านนา + /mts ปั๊ม K + และ Na + -K + – 2Cl− cotransporter ตามลำดับ Microhaematocrit กำหนดหรือวิธี cyanohaemoglobin ใช้วัดกิจกรรม Hct. KCC ถูก assayed เป็นสุดท้ายขึ้นอยู่กับ Cl− K + ไหลเข้า กิจกรรมช่อง Gardos เป็นลับของ CLT (5 μM) K + ไหลเข้า นา + /mts K + กิจกรรมปั๊มเป็นสำคัญ ouabain (100 μM) K + อีกและ Psickle เป็นเกิดจาก deoxygenation K + ไหลเข้าวัดของ Cl−

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เงื่อนไขการได้รับการแต่งตั้งเพื่อกระตุ้น K + -Cl- cotransporter (KCC) 86Rb + ถูกบันทึกอยู่ใน 150 มิลลิ KNO3 เพื่อให้เป็นครั้งสุดท้าย [K +] 7.5 มิลลิในการทดลองทั้งหมดยกเว้นผู้ที่มีน้ำเกลือฮ่องกงและเม็ดเลือดแดง A23187 รับการรักษา หลังจากการบ่มด้วยไอโซโทปเป็นเวลา 10 นาที, เม็ดเลือดแดงถูกล้างเพื่อเอาสาร 86Rb + ห้าครั้งใน MgCl2 เย็นแก้ปัญหาล้าง สำหรับ K + ทดลองไหล, เม็ดเลือดแดงถูกโหลดค้างคืนที่ 4 ° C โดยนอกเหนือจาก 86Rb + หลังจากที่เซลล์ถูกล้างห้าครั้งในการแก้ปัญหาล้างเย็น เม็ดเลือดแดงถูกระงับแล้วที่ 2 hematocrit%
(Hct) ในน้ำเกลือมาตรฐานที่ 37 ° C aliquots ถูกนำมาที่ช่วงเวลา 5 นาที 30-60 นาทีและหมุนผ่านน้ำมัน phthalate ตะกอนเซลล์ถูก lysed ด้วยผงซักฟอก, โปรตีนต่ำกับ TCA และนับประกายของเหลว (CPM) พล็อต semilog (จาก CPM ในเวลา = t / CPM ในเวลา = 0) ถูกใช้ในการกำหนดค่าคงที่อัตรา K + ไหล ยกเว้นสำหรับการทดลองการวัดนา k + + / กิจกรรมปั๊ม ouabain (100 ไมครอน) และ Bumetanide (10 ไมครอน) อยู่ในปัจจุบันในการทดลองทั้งหมดเพื่อขจัดใด K + การขนส่งผ่านนา k + + / เครื่องสูบน้ำและนา + -K + -2Cl- cotransporter ตามลำดับ ทั้งความมุ่งมั่น microhaematocrit หรือวิธี cyanohaemoglobin ถูกนำมาใช้ในการวัดสุดท้าย Hct กิจกรรม KCC ได้รับการวิเคราะห์เป็น
Cl - ขึ้นอยู่กับ K + ไหลบ่าเข้ามา; กิจกรรมช่อง Gardos เป็น CLT-สำคัญ (5 ไมครอน) K + ไหลบ่าเข้ามา; นา k + + / กิจกรรมปั๊ม ouabain-สำคัญ (100 ไมครอน) K + และไหลบ่าเข้ามา Psickle เป็น deoxygenation เหนี่ยวนำให้เกิดการไหลบ่าเข้า K + วัดในกรณีที่ไม่มี Cl-

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เงื่อนไขการเลือก เพื่อกระตุ้น K - Cl − cotransporter ( KCC ) 86rb เพิ่มใน kno3 150 มิลลิเมตรให้ ] K สุดท้าย [ 7.5 มม. การทดลองทั้งหมดยกเว้นเกลือ HK และ a23187 ถือว่า rbcs . หลังจากบ่มด้วยแร่ 10 นาที rbcs ถูกล้างเพื่อลบและ 86rb ห้าครั้งในน้ำแข็งเย็นล้างชุดโซลูชั่น สำหรับ เค การทดลองrbcs คงไปค้างคืนที่ 4 ° C โดยการ 86rb หลังจากที่เซลล์ได้ซักห้าครั้งในเย็นโซลูชั่นล้าง rbcs จึงระงับที่ 2% ฮีมาโตคริต
( Hct ) ในน้ำเกลือมาตรฐานที่อุณหภูมิ 37 องศา เฉยๆ ถ่ายที่ 5 นาทีช่วงเวลา 30 – 60 นาทีและปั่นผ่านน้ำมันพทาเลท . เซลล์เม็ดเป็น lysed คุณสมบัติกับ TCA ด้วยผงซักฟอก ,และนับจากแสงของเหลว ( CPM ) แปลงเป็นเซมิล็อก ( CPM ในเวลา = T / CPM ในเวลา = 0 ) ถูกนำมาใช้เพื่อหาค่าคงที่อัตราของการไหลออก ยกเว้นการทดลองวัดนา / กิจกรรมการปั๊ม K ( 100 μ M ) และบูมีทาไนด์ ( 10 μ m ) เป็นปัจจุบันในทุกการทดลอง เพื่อป้องกันใด ๆของการขนส่งผ่าน na / k ปั๊มและ na – K ( − 2cl cotransporter ตามลำดับกำหนดให้ไมโครฮีมาโตคริต หรือ cyanohaemoglobin วิธีที่ใช้วัดอัตราสุดท้าย กิจกรรม KCC ซีรั่มเป็น Cl − 2 K -
ไหล ; gardos ช่องทางกิจกรรมเป็น CLT อ่อนไหว ( 5 μ M ) K Na / K ไหล ; กิจกรรมการปั๊มเป็นสําคัญ ( 100 μ M ) K และเป็นการกระตุ้นการ psickle K เข้าวัดในการขาดงานของ Cl − .