ตาราง 5: ยีน Regulated BCM-7 รักษาในภาวะธำรงดุลกลูโคส (P < FDR 0.01, < 0.1)ทั้งพันธุดีเอ็นเอ MBD seq เปิดเผย differentially methylated ใบ (DMTs),5 ตามที่กำหนด โดยอัตราการค้นพบเท็จ (FDR) < 0.1 และ ANOVA ตาม ด้วย t นักเรียนไปรษณีย์เฉพาะกิจ -ทดสอบ (p < 0.05) ใบรวมทั้งยีนและ RNAs ไม่ใช่รหัสที่differentially methylated/ทับ ศัพท์ การเปลี่ยนแปลงเหนือพันธุกรรมเป็นการถอดเทป เปลี่ยนแปลงที่เกิดจาก BCM 7 ในทางชีวภาพ หรือหน้าที่เกี่ยวข้องเฉพาะ รับประเมินการใช้เครื่องมือการวิเคราะห์ทางความฉลาด (IPA) และเส้นทางต่าง ๆ ในการแสดงผลสูงสุด 10 ระบุ ผลลัพธ์ที่แสดงในตาราง 5 การเปลี่ยนแปลงในการ สถานะเหนือพันธุกรรมของยีนสำหรับการเผาผลาญน้ำตาลกลูโคส สังเคราะห์ และกลูโคส ภาวะธำรงดุลยังมีรายงานการเปลี่ยนแปลงภายใต้ BCM-7 ดังที่แสดงในตัวเลข 5 และ 6ตัวอย่างที่ 4: ผลของเบต้า Caseins อินซูลินรีเซพเตอร์หนูพยักหน้า 15 (ชาย และหญิง) ได้ถูกป้อนอาหารเสริมใน A1 หรือ A2 เบต้าเคโปรตีนนมจากหย่านม อาหารเหล่านี้ทำ โดยเฉพาะฟีดออสเตรเลียให้องค์ประกอบที่เพียงพอและโภชนาการ รุ่นของหนู (n. = 10) จากแต่ละเพศและอาหารมี euthanased ที่ 10W, 20W และขณะทำการผ่า ที่มีการรวบรวมตัวอย่างต่าง ๆและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ-80 องศาเซลเซียส หนูพยักหน้า 40 แล้วในการศึกษานี้: 10 ต่อกลุ่มชายหญิงอัล 20/A2); 10 ได้ euthanased ที่ 10W 20W รวบรวม และแช่แข็งในตับอ่อนRNAlaterTM'RNA จากเนื้อเยื่อในการวิเคราะห์การถอดรหัส RNA ถูกแยกโดยใช้ชุดการ RNAqueous ® 4PCR จาก Ambion (Austin, TX) ตามขั้นตอนตาม 13โพรโทคอลของผู้ผลิต RNA แยกได้รับการรักษากับ DNase การ RNA ตามนับ RNA โดยใช้ spectrophotometer ND-1000 NanoDrop เพิ่มเติม cDNA เป็น synthesised ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ โดยใช้การสังเคราะห์ cDNA แรกสาระจากโรช (ใน อินเดียนา) ผสม 1 มิลลิกรัมของ RNA, dNTP มม. 1, 60 mM hexamer สุ่มไพรเมอร์ 5 กับระดับอณูชีววิทยาพอ H2O ถูกเพิ่มเพื่อให้ได้ปริมาณตัวอย่างสุดท้ายของ13 ml ถัดไป ตัวอย่างได้เอทิลแอลกอฮอล์ที่อุณหภูมิ 65° C นาน 5 นาที และจากนั้น วางบนน้ำแข็งTranscriptor RT (20 หน่วย ml) (Roche), ยับยั้งป้องกัน RNase (40 U m1) (Roche), 5เกรด Transcriptor ปเทปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ (Roche), และอณูชีววิทยาH2O ถูกเพิ่มไปยังไดรฟ์ข้อมูลสุดท้ายของ 7 ml ในส่วนสองของปฏิกิริยาและสุดท้ายเปลี่ยนปริมาตร 10 กับ 20 mi นี้ตามมา โดยกกไข่ใน PTCThermocycler (M3วิจัย St. Bruno, QC แคนาดา) ที่ 25 ° C 10 นาที และ 30 นาทีในการสิ้นสุด55 องศาเซลเซียส สุดท้าย เอนไซม์ปเทถูกยับยั้ง โดยบ่มที่อุณหภูมิ 85° C 5นาทีตาราง 15 6: ลำดับรองพื้นสำหรับ qRTPCRSr--> ไม่ไปยีน 5' 3' ย้อนหลัง 51--> 3'1 INSR ATCCAGCCTGGGTGACATAG AGGGAG ผม 1 ฉัน GGACAACAACG2 IRS1 AAATTAGCCTGCCCTTCGTT TGCTGGAAACTTCTGCATTGต่อมา ทำทดสอบ qRT PCR ในเพิ่มขึ้นสามเท่าตัวอย่างที่ใช้ในเครื่อง qRT PCR LightCycler 480 จากโรช (Trivedi et al. Mol. Pharmcol. 2014) qRT-ทำ 20 PCR ใช้ 5 มล.ของ cDNA แม่ 10 มม. sense และ antisense ไพร เมอร์ 10SYBR เขียวผมหลักจากโรช dH2O เสียงสุดท้ายของ 20 ml รายชื่อไพรเมอร์ที่ใช้สำหรับวัตถุประสงค์นี้จะแสดงในตารางที่ 6 ตัวอย่างที่ใส่ผ่านการโพรโทคอต่อไปนี้ กกไข่ 5 นาทีที่ 95° C และ 95° C แล้ว 45 รอบ 10วินาที 60° C เป็นเวลา 20 วินาที และ 72° C เป็นเวลา 30 วินาที ตาม ด้วยรอบเดียว 95° c25 5 วินาที 1 นาทีที่ 65° C และ 97° C สำหรับเส้นโค้งหลอม ตาม ด้วยการทำความเย็นที่40° C สำหรับ 90 วินาที ไม่ควบคุมต้นแบบ (NTC) ถูกเรียกใช้บนแผ่น และเส้นโค้ง dissociation สร้างการตรวจสอบผลิตภัณฑ์เจาะจง และนี้ถูกตามปกติเพื่อหลีกเลี่ยงการขยายใด ๆ ไม่เฉพาะเจาะจง ข้อมูลที่ได้วิเคราะห์โดยใช้วิธีการนับโรช และถูกปกติระดับแอกตินเบต้า30แม้การประดิษฐ์ได้รับการอธิบายเช่น มันควรจะนิยมที่เปลี่ยนแปลงและปรับเปลี่ยนได้โดยไม่ต้องออกจากขอบเขตของการประดิษฐ์ตามที่กำหนดในการเรียกร้อง นอกจากนี้ เรียกว่าเทียบเท่าอยู่ในคุณลักษณะเฉพาะ เทียบเท่าดังกล่าวจะถูกรวมเป็นถ้าเรียกเฉพาะในนี้specification.
การแปล กรุณารอสักครู่..