The basic Northern blotting techniq

The basic Northern blotting technique is that described
in (Ref. 2). Good results can be obtained by analysing between 10 µg and 30 µg of total RNA on a formaldehyde
gel. Denaturing gels are prepared using 1% agarose (molecular biology grade), 7.2% (v/v) formaldehyde (stock solution is 40%) in 1.1 × MOPS buffer pH 7.0. The RNA is
dissolved in 50% deionised formamide (Sigma), 7.2% (v/v)
formaldehyde and 0.5 × MOPS buffer and heated to 65◦C
for 15 minutes. To each sample is added 2 µl of sample loading buffer and 1 µl of ethidium bromide (1 mg/ml), and
the sample is loaded immediately and electrophoresed at
20 V/cm in 1 × MOPS buffer, until the fast blue (bromophenol blue) is about 3 cm from the bottom of the gel. The
RNA is transferred to a membrane by conventional capillary
blotting (Ref. 2), as shown in (Fig. 1). The membrane to be
used for transfer is a matter of personal preference, however
DuralonTM (Stratagene) gives consistently good results. The
manufacturers recommendations for transfer and hybridisation conditions should be followed for optimal results.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เทคนิคซับพื้นฐานภาคเหนือคือการที่อธิบายไว้ใน (Ref. 2)
ผลลัพธ์ที่ดีสามารถรับได้โดยการวิเคราะห์ระหว่าง 10 ไมโครกรัมและ 30
ไมโครกรัมของอาร์เอ็นเอรวมดีไฮด์เจล เจล denaturing นี้จัดทำขึ้นโดยใช้ 1% agarose (เกรดอณูชีววิทยา) 7.2% (v / v) ไฮด์ (สารละลายหุ้น 40%) 1.1 × MOPS บัฟเฟอร์ pH 7.0 RNA
ถูกกลืนหายไปใน50% deionised formamide (ซิกม่า) 7.2% (v / v)
ดีไฮด์และ 0.5 × MOPS buffer
และอุ่นให้65◦Cเป็นเวลา15 นาที ตัวอย่างแต่ละคนจะเพิ่ม 2 ไมโครลิตรของ buffer โหลดตัวอย่าง 1 ไมโครลิตรของโบรไมด์ ethidium (1 mg / ml)
และกลุ่มตัวอย่างที่มีการโหลดทันทีและelectrophoresed ที่
20 V / cm ใน 1 ×บัฟเฟอร์ MOPS จนสีฟ้าอย่างรวดเร็ว (bromophenol สีฟ้า ) คือประมาณ 3 ซม. จากด้านล่างของเจล
RNA ถูกโอนไปยังเมมเบรนจากเส้นเลือดฝอยธรรมดา
blotting (Ref. 2) ดังแสดงใน (รูปที่ 1). เมมเบรนที่จะใช้สำหรับการถ่ายโอนเป็นเรื่องของความชอบส่วนบุคคล แต่ DuralonTM (Stratagene) ให้ผลลัพธ์ที่ดีอย่างต่อเนื่อง คำแนะนำผู้ผลิตสำหรับการถ่ายโอนและเงื่อนไข hybridisation ควรจะปฏิบัติตามเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่ดีที่สุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พื้นฐานของเทคนิคที่อธิบายวิธี
( อ้างอิงที่ 2 ) ผลลัพธ์ที่ดีได้ โดยวิเคราะห์ระหว่าง 10 µกรัม 30 µกรัมของ RNA ทั้งหมดฟอร์มาลดีไฮด์
เจล เจลี่เตรียมไว้ใช้ 1 % ( ระดับอณูชีววิทยา ) 7.2 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) ฟอร์มาลดีไฮด์ ( โซลูชั่นหุ้น 40% ) 1.1 × mops บัฟเฟอร์ pH 7.0 . ยีนคือ
ละลาย 50% deionised ฟอร์มาไมด์ ( Sigma ) 7.2 เปอร์เซ็นต์ ( v / v )
ฟอร์มาลดีไฮด์และ 0.5 × mops บัฟเฟอร์และให้ความร้อนถึง 65 ◦ C
เป็นเวลา 15 นาที ตัวอย่างเป็น 2 µ l ตัวอย่างโหลดบัฟเฟอร์ และ 1 µ l ทิเดียมโบรไมด์ ( 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) และ
ตัวอย่างโหลดทันที และ electrophoresed ที่
20 v / cm 1 × mops บัฟเฟอร์จนเร็วสีฟ้า ( โบรโมฟีนอลบลู ) ประมาณ 3 ซม. จากด้านล่างของ เจล
อาร์เอ็นเอจะถูกโอนไปยังเยื่อโดย
หลอดเลือดฝอยธรรมดาราย ( อ้างอิง 2 ) ดังแสดงในรูปที่ 1 ) เมมเบรนเป็น
เพื่อถ่ายทอดเป็นเรื่องของความชอบส่วนตัว แต่
duralontm ( stratagene ) ให้ผลดีอย่างต่อเนื่อง
ผู้ผลิตแนะนำสำหรับการถ่ายโอนและเงื่อนไขไฮบริไดเซชันควรจะปฏิบัติตามเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่ดีที่สุด