These conditions were favorable for

These conditions were favorable for harvesting a large amount of TRPM8 from the plasma membranes of cells stably expressing the protein. For control, the same extraction conditions were applied to the plasma membranes of HEK-293 cells not expressing TRPM8, where no TRPM8 protein was detected with anti-Myc IgG (Fig. 3, lane 1). In order to receive homogeneous fraction of the protein, TRPM8 was further purified by gel-filtration chromatography on Sehpacryl-300
column in 134 NaCl mM, 5 KCl mM, 1 MgCl2 mM and 10 Hepes mM, pH 7.4, containing 2 mM DDM.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เงื่อนไขเหล่านี้เป็นที่ดีสำหรับการเก็บเกี่ยวจำนวนมาก TRPM8 จากเยื่อหุ้มพลาสม่าของเซลล์เสถียรแสดงโปรตีน สำหรับการควบคุมเงื่อนไขการสกัดเดียวกันถูกนำไปใช้กับเยื่อหุ้มพลาสม่าของ HEK-293 เซลล์ไม่แสดง TRPM8 ที่ไม่มีโปรตีน TRPM8 พบกับการต่อต้านการ Myc IgG (รูปที่. 3 ช่องทางที่ 1) เพื่อที่จะได้รับส่วนที่เป็นเนื้อเดียวกันของโปรตีน TRPM8 บริสุทธิ์ต่อไปโดยโคเจลกรองบน ​​Sehpacryl-300
ของคอลัมน์ใน 134 มิลลิโซเดียมคลอไรด์, โพแทสเซียมคลอไรด์ 5 มิลลิ 1 มิลลิ MgCl2 และ 10 มิลลิ HEPES ค่า pH 7.4 ที่มี 2 มิลลิ DDM

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เงื่อนไขเหล่านี้ดีสำหรับการเก็บเกี่ยวเป็นจำนวนมากของ trpm8 จากพลาสมาเมมเบรนของเซลล์อย่างถาวร ได้แก่ โปรตีน สำหรับการควบคุมสภาวะการสกัดเดียวกันถูกใช้กับพลาสมาเมมเบรนของ hek-293 เซลล์ไม่แสดง trpm8 ที่ไม่มี trpm8 โปรตีนที่ตรวจพบด้วย IgG anti มิค ( ภาพที่ 3 ช่องที่ 1 ) เพื่อที่จะได้รับส่วนที่เป็นเนื้อเดียวกันของโปรตีนtrpm8 ยังบริสุทธิ์ โดยเจลฟิลสามารถ sehpacryl-300
คอลัมน์ใน 134 NaCl มม. 5 . มม. 1 มม. และ 10 มม. ชุดฮีเปส pH 7.4 ที่ 868 2 มิลลิเมตร