2.5. Extraction and analysis of carotenoids
Raw and cooked pulp and chyme and micelle fraction of digested
pulp were extracted using a modification of the methods of AOAC
(AOAC, 1993) and Seo, Burri, Quan, and Neidlinger (2005). Briefly, 5–
10 mL of sample containing 0.8 μg apo-8′-carotenal as internal standard
was transferred to polypropylene test tubes. Methanol (MeOH): tetrahydrofuran
(10 mL, 50:50, v/v) was added and tubes vortexed (1 min)
before addition of hexane (10 mL). The mixture was vortexed (1 min),
centrifuged (1200 ×g, 4 °C, 10 min) and the upper layer transferred to
screw capped glass vials. Extraction was repeated 2–3 times, pooled organic
solvent was evaporated under nitrogen gas, and the residual film
immediately re-solubilized in 1:1 (v:v) mixture of MeOH:methyl-tertbutyl
ether and filtered for analysis by HPLC-DAD. Extraction of carotenes
from cell pellets followed the protocol of Chitchumroonchokchai
et al. (2004). Carotenoids were separated using a YMC™ C30 column
(4.6 × 150 mm, 5 μm; Waters, Milford, MA) coupled to diode array
2.5 การสกัดและการวิเคราะห์ของ carotenoidsกุ้งเยื่อกระดาษและเศษ chyme และ micelle เจ่าเยื่อที่สกัดโดยใช้การปรับเปลี่ยนวิธีการของ AOAC(AOAC, 1993) และ Seo, Burri, Quan และ Neidlinger (2005) สั้น ๆ 5 –10 มิลลิลิตรของตัวอย่างที่ประกอบด้วย μg 0.8 อาโป-8′-carotenal เป็นมาตรฐานภายในถูกถ่ายโอนไปหลอดทดสอบ polypropylene เมทานอ): tetrahydrofuran(10 mL คนละครึ่ง v/v) เข้ามา และท่อ vortexed (1 นาที)ก่อนนี้ของเฮกเซน (10 มล.) ส่วนผสมคือ vortexed (1 นาที),centrifuged (1200 ×กรัม 4 ° C, 10 นาที) และชั้นบนที่โอนย้ายไปน็อต vials capped แก้ว สกัดได้ซ้ำ 2 – 3 ครั้ง ทางถูกพูอินทรีย์ตัวทำละลายถูกหายไปภายใต้ก๊าซไนโตรเจน และฟิล์มเหลือทันทีอีก solubilized ในผสมกัน 1:1 (v: v) MeOH:methyl-tertbutylอีเทอร์ และกรองข้อมูลสำหรับการวิเคราะห์ด้วย HPLC-พ่อ สกัด carotenesจากเซลล์ ขี้ตามโพรโทคอล Chitchumroonchokchaial. ร้อยเอ็ด (2004) Carotenoids ถูกแยกโดยใช้คอลัมน์ YMC ™ C30(4.6 × 150 mm, μm 5 น้ำ ลฟอร์ด MA) ควบคู่กับไดโอดอาร์เรย์
การแปล กรุณารอสักครู่..

2.5 การสกัดและการวิเคราะห์ของ carotenoids
ดิบและเยื่อกระดาษสุกและ chyme
และส่วนของไมเซลล์ย่อยเยื่อกระดาษถูกสกัดโดยใช้การปรับเปลี่ยนวิธีการของAOAC
(AOAC, 1993) และ Seo, Burri, Quan และ Neidlinger (2005) สั้น ๆ 5
10 มิลลิลิตรของกลุ่มตัวอย่างที่มี 0.8 ไมโครกรัม APO-8'-carotenal
เป็นมาตรฐานภายในถูกโอนไปยังหลอดทดลองโพรพิลีน เมทานอล (เมธานอล): tetrahydrofuran
(10 มิลลิลิตร 50:50 v / v) ถูกบันทึกและท่อการ vortex (1 นาที)
ก่อนที่การเพิ่มขึ้นของเฮกเซน (10 มิลลิลิตร) ส่วนผสมที่ถูกการ vortex (1 นาที),
หมุนเหวี่ยง (1200 ×กรัม 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที)
และชั้นบนถ่ายโอนไปยังสกรูปกคลุมขวดแก้ว สกัดซ้ำ 2-3
ครั้งอินทรีย์รวบรวมตัวทำละลายระเหยภายใต้ก๊าซไนโตรเจนและภาพยนตร์ที่เหลือทันทีอีกครั้งละลายใน 1: 1 (V: V) ส่วนผสมของเมธานอล: methyl-tertbutyl อีเทอร์และกรองสำหรับการวิเคราะห์โดยวิธี HPLC-DAD . การสกัด carotenes จากเซลล์เม็ดตามโปรโตคอลของ Chitchumroonchokchai et al, (2004) Carotenoids ถูกแยกออกโดยใช้คอลัมน์ YMC ™ C30 (4.6 × 150 มม 5 ไมครอน; Waters, ฟอร์ด, แมสซาชูเซต) คู่กับ diode อาร์เรย์
การแปล กรุณารอสักครู่..

2.5 การสกัดและการวิเคราะห์ของ carotenoids
ดิบและสุก และส่วนของไมเซลล์เยื่อและอาหารที่ย่อยแล้วย่อย
เยื่อสกัดโดยใช้การดัดแปลงวิธีการไม่
( โปรตีน , 1993 ) และซอ burri Quan , และ neidlinger ( 2005 ) สั้น ๆ , 5 และ 10 มิลลิลิตรที่ประกอบด้วย 0.8
ตัวอย่างμกรัม apo-8 ’ - carotenal เป็น
มาตรฐานภายในถูกย้ายไปที่หลอดทดลอง โพรพิลีน เมทานอล ( เมทิลแอลกอฮอล์ ) เตตระไฮโดรฟแรน
:( 10 ml 50 V / V ) คือการเพิ่มและหลอด vortexed ( 1 นาที )
ก่อนเพิ่มฤทธิ์ ( 10 ml ) ส่วนผสม vortexed ( 1 นาที ) ,
ไฟฟ้า ( 1200 × g 4 ° C , 10 นาที ) และชั้นบนโอน
กรูฝาครอบขวดแก้ว การสกัดซ้ำ 2 - 3 ครั้ง รวมเป็นระเหยตัวทำละลายอินทรีย์
ภายใต้ก๊าซไนโตรเจน และที่เหลือทันที ซึ่งใน 1 : 1 เป็นภาพยนตร์
( v : V ) ส่วนผสมของปริมาณ :เมทิลอีเทอร์ tertbutyl
กรองสำหรับการวิเคราะห์โดย hplc-dad . การสกัดคาโรทีน
จากเซลล์เม็ดตามโปรโตคอลของ chitchumroonchokchai
et al . ( 2004 ) คาโรทีนอยด์ถูกแยกจากกันโดยใช้ ymc ™ C30 คอลัมน์
( 4.6 × 150 มม. , 5 μ M ; น้ำที่ Milford , MA ) คู่กับ ไดโอด เรย์
การแปล กรุณารอสักครู่..
