BACKGROUND: Rapid detection and identification of viruses are important for early diagnosis and effective surveillance of hand, foot, and mouth disease (HFMD). We described a novel assay using multilocus PCR and reverse transcription-PCR coupled with electrospray ionization mass spectrometry (RT-PCR/ESI-MS) to simultaneously detect and identify human enterovirus A-D, adenovirus A-F, human herpesvirus 1-8, parvovirus B19 and polyomavirus. OBJECTIVES: To evaluate the accuracy and efficacy of the RT-PCR/ESI-MS method, to detect and type enterovirus from specimens of clinical diagnosed HFMD patients. STUDY DESIGN: In this study, 152 specimens of clinically diagnosed HFMD patients were studied by the assay using RT-PCR/ESI-MS method. The detection and typing of enterovirus by RT-PCR/ESI-MS were compared with results from reference molecular methods. RESULTS: The assay detected enteroviruses in 97 (63.8%) specimens, resulting in a sensitivity of 93.8% (95% CI: 91.8-95.7%) and a specificity of 87.5% (95% CI: 84.8-90.2%) compared with a reference clinical diagnostic test. Most enterovirus genotypes (65/84; 77%) determined by the platform were consistent with 5' UTR sequence analysis, and most misidentifications resulted from the virus library, which could be further improved by updating the enterovirus database. In addition to enteroviruses, herpesviruses, polyomaviruses, adenoviruses and human rhinoviruses were detected and identified in 55 (36%) HFMD specimens by RT-PCR/ESI-MS. CONCLUSION: With the capability of high throughput and detection and typing of multiple clinically relevant viruses simultaneously, RT-PCR/ESI-MS can be a rapid and robust laboratory tool for identifying viral pathogens.
ภูมิหลัง: การตรวจสอบและการตรวจสอบอย่างรวดเร็วของไวรัสมีความสำคัญต่อการวินิจฉัยและการเฝ้าระวังที่มีประสิทธิภาพของมือเท้าและโรคปาก (HFMD) เราอธิบายวิธีใหม่โดยใช้ Multilocus PCR และ reverse RT-PCR คู่กับ electrospray ไอออนไนซ์มวลสาร (RT-PCR / ESI-MS) ไปพร้อม ๆ กันตรวจสอบและระบุ AD enterovirus มนุษย์ adenovirus AF, herpesvirus มนุษย์ 1-8, parvovirus B19 และ polyomavirus . วัตถุประสงค์: เพื่อประเมินความถูกต้องและความมีประสิทธิภาพของวิธี RT-PCR / ESI-MS, การตรวจสอบและพิมพ์ enterovirus จากตัวอย่างของการวินิจฉัยผู้ป่วยโรคมือเท้าปากทางคลินิก รูปแบบการศึกษา: การศึกษาครั้งนี้ 152 ตัวอย่างของผู้ป่วยที่ได้รับการวินิจฉัยทางคลินิกโรคมือเท้าปากได้รับการศึกษาโดยการทดลองใช้วิธี RT-PCR / ESI-MS การตรวจสอบและการพิมพ์ของ enterovirus โดย RT-PCR / ESI-MS ถูกเมื่อเทียบกับผลลัพธ์ที่ได้จากการอ้างอิงวิธีโมเลกุล ผลการทดสอบพบ enteroviruses ใน 97 (63.8%) ตัวอย่างที่เกิดขึ้นในความไวของ 93.8% (95% CI: 91.8-95.7%) และความจำเพาะของ 87.5% (95% CI: 84.8-90.2%) เมื่อเทียบกับ อ้างอิงทดสอบวินิจฉัยทางคลินิก ส่วนใหญ่สายพันธุ์เอนเทอโร (65/84; 77%) กำหนดโดยแพลตฟอร์มมีความสอดคล้องกับการวิเคราะห์ลำดับ 5 'UTR และ misidentifications ส่วนใหญ่เป็นผลมาจากห้องสมุดไวรัสซึ่งอาจจะดีขึ้นต่อไปโดยการปรับปรุงฐานข้อมูล enterovirus นอกจาก enteroviruses, herpesviruses, polyomaviruses, อะดีโนไวรัสและ rhinoviruses ของมนุษย์ได้รับการตรวจพบและระบุใน 55 (36%) ตัวอย่างโรคมือเท้าปากโดย RT-PCR / ESI-MS สรุป: ด้วยความสามารถของ throughput สูงและการตรวจสอบและการพิมพ์ของไวรัสทางคลินิกหลายคนพร้อมกัน, RT-PCR / ESI-MS สามารถเป็นเครื่องมือทางห้องปฏิบัติการอย่างรวดเร็วและมีประสิทธิภาพสำหรับการระบุเชื้อไวรัส
การแปล กรุณารอสักครู่..
