Sequencing of the reverse transcrip

Sequencing of the reverse transcriptase (RT) region of 26 human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) isolates from eight patients treated with 3'-azido-3'-deoxythymidine (AZT) revealed a mutation at codon 210 from TTG (leucine) to TGG (tryptophan) exclusively in association with resistance to AZT. The mutation Trp-210 was observed in 15 of the 20 isolates phenotypically resistant to AZT, being more commonly observed than resistance-associated mutations at codons 67, 70, and 219. Trp-210 was never observed before the emergence of resistance-associated mutations Leu-41 and Tyr-215, and in a sequential series of five isolates from one patient the order of emergence of mutations was found to be Tyr-215, Leu-41, and then Trp-210. Trp-210 was also found in association with the Leu-41, Asn-67, Arg-70, and Tyr-215 resistance genotype. To define the role of Trp-210 in AZT resistance, molecular HIV-1 clones were constructed with various combinations of RT mutations at codons 41, 67, 70, 210, and 215 and tested for susceptibility to AZT. In clones with polymerase genes derived either from HXB2-D or clinical isolates, Trp-210 alone did not increase AZT resistance, whereas in conjunction with Leu-41 and Tyr-215, Trp-210 contributed to high-level resistance (50% inhibitory concentration of >1 microM). In HXB2-D, Trp-210 with Tyr-215 generated a virus with resistance comparable to one with Leu-41, Tyr-215, and Trp-210. Inserting Trp-210 into the genetic context of mutations at codons 41, 67, 70, and 215 further enhanced resistance from a 50% inhibitory concentration of 1.44 microM to 8.41 microM. Molecular modeling of the tertiary structure of HIV-1 RT revealed that the distance between the side chains of Trp-210 (in helix alphaF) and Tyr-215 (in strand beta11a) approximated 4 A (1 A = 0.1 nm), sufficiently close to result in significant energetic interaction between these two aromatic side chains. In conclusion, Trp-210 contributes significantly to phenotypic AZT resistance of HIV-1 by augmenting resistance at least three- to sixfold in the context of two resistant genotypes, and its effect may require an interaction with an aromatic amino acid at position 215.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ลำดับภาคกลับ transcriptase (RT) ของไวรัสเอชไอวีมนุษย์ 26 ชนิด 1 (เอชไอวี-1) แยกจากแปดผู้ป่วยที่รักษา ด้วย 3'-azido-3-deoxythymidine (AZT) เปิดเผยการกลายพันธุ์ที่รหัสพันธุกรรม 210 จาก TTG (leucine) กับ TGG (ทริปโตเฟน) เฉพาะในความสัมพันธ์กับความต้านทานต่อ AZT การกลายพันธุ์การ Trp-210 ถูกสังเกตใน 15 ของ 20 แยก phenotypically ทนต่อ AZT การสังเกตมากกว่า ปกติมากกว่าสัมพันธ์ต่อต้านการกลายพันธุ์ที่ codons 67, 70 และ 219 Trp-210 ได้ถูกก็ไม่เคยเกิดร่วมต้านทานกลายพันธุ์ลือ-41 และ Tyr 215 และชุดลำดับห้าแยกจากผู้ป่วยหนึ่งใน ลำดับของการเกิดขึ้นของการกลายพันธุ์พบเป็น Tyr 215 ลัว-41 และ Trp 210 แล้ว นอกจากนี้ยังพบ Trp-210 กับลัว-41, Asn-67 อาร์กิวเมนต์ของค่า-70 และลักษณะทางพันธุกรรมความต้านทาน Tyr 215 เพื่อกำหนดบทบาทของ Trp-210 ในต้านทาน AZT โมเลกุลเอชไอวี-1 โคลนถูกสร้างขึ้น ด้วยชุดต่าง ๆ ของกลายพันธุ์ RT ที่ codons 41, 67, 70, 210 และ 215 และทดสอบง่าย AZT ในโคลนกับพอลิเมอเรส ยีนมาจาก HXB2-D หรือทางคลินิกแยก Trp-210 คนเดียวได้เพิ่มต้านทาน AZT ขณะร่วมกับลือ-41 และ Tyr 215, Trp-210 ส่วนความต้านทานสูง (50% ลิปกลอสไขเข้มข้น > 1 microM) ใน HXB2-D, Trp-210 กับ Tyr 215 สร้างไวรัสกับความต้านทานเทียบเท่ากับกับลัว-41, Tyr 215 และ Trp-210 แทรก Trp-210 ในบริบททางพันธุกรรมของการกลายพันธุ์ที่ codons 41, 67, 70 และ 215 เพิ่มเติมเพิ่มความต้านทานต่อจากเข้มข้น 50% ลิปกลอสไขของ 1.44 microM 8.41 microM สร้างแบบจำลองโมเลกุลของโครงสร้างระดับตติยภูมิของเอชไอวี-1 RT เปิดเผยที่ระยะห่างระหว่างห่วงโซ่ข้างของ Trp-210 (ในเกลียว alphaF) และ Tyr-215 (ในเดอะ beta11a) เลียนแบบ 4 A (1 A = 0.1 nm), พอปิดทั้งโต้ตอบมีพลังอย่างมีนัยสำคัญระหว่างโซ่ข้างหอมสองเหล่านี้ เบียดเบียน Trp-210 รวมอย่างมีนัยสำคัญต่อต้าน AZT ไทป์ของเชื้อเอชไอวี-1 โดยอีกความต้านทานน้อยสาม - การ sixfold ในบริบทของการศึกษาจีโนไทป์ทนสอง และผลของมันอาจทำการโต้ตอบกับกรดอะมิโนหอมที่ตำแหน่ง 215

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ลำดับของ transcriptase ย้อนกลับ (RT) ภูมิภาค 26 มนุษย์ Immunodeficiency Virus Type 1 (HIV-1) ที่แยกได้จากผู้ป่วยที่รักษาแปดกับ 3'-azido-3- deoxythymidine (AZT) เปิดเผยว่าการกลายพันธุ์ที่ codon 210 จาก TTG (leucine) เพื่อ TGG (โพรไบโอ) เฉพาะในการเชื่อมโยงกับความต้านทานต่อการ AZT การกลายพันธุ์ Trp-210 พบว่าใน 15 ของ 20 แยกลักษณะภายนอกที่จะทน AZT ถูกตั้งข้อสังเกตมากกว่าปกติกว่าการกลายพันธุ์ต้านทานที่เกี่ยวข้อง codons ที่ 67, 70 และ 219 Trp-210 ก็ไม่เคยสังเกตเห็นก่อนที่จะเกิดขึ้นของการกลายพันธุ์ต้านทานที่เกี่ยวข้อง Leu-41 และเทอร์-215 และในซีรีส์ลำดับที่ห้าที่แยกจากผู้ป่วยรายหนึ่งคำสั่งของการเกิดขึ้นของการกลายพันธุ์พบว่าเทอร์-215, Leu-41 และจากนั้น Trp-210 Trp-210 นอกจากนี้ยังพบว่าในการเชื่อมโยงกับลื้อ-41, Asn-67, Arg-70 และเทอร์-215 ยีนต้านทาน ในการกำหนดบทบาทของ Trp-210 ในการต่อต้าน AZT ที่โมเลกุลโคลน HIV-1 ถูกสร้างด้วยชุดต่างๆของการกลายพันธุ์ RT codons ที่ 41, 67, 70, 210, และ 215 และการทดสอบเพื่อความไวต่อการ AZT ในโคลนที่มียีนโพลิเมอร์ที่ได้รับทั้งจากสายพันธุ์ HXB2-D หรือคลินิก Trp-210 เพียงอย่างเดียวไม่ได้เพิ่มความต้านทาน AZT ในขณะที่ร่วมกับลื้อ-41 และเทอร์-215, Trp-210 ส่วนร่วมในการต้านทานระดับสูง (50% ยับยั้ง ความเข้มข้นของ> 1 ไมโครโม) ใน HXB2-D, Trp-210 กับเทอร์-215 สร้างไวรัสที่มีความต้านทานเปรียบได้กับเป็นหนึ่งเดียวกับลื้อ-41, เทอร์-215 และ Trp-210 ใส่ Trp-210 เข้ามาในบริบทของการกลายพันธุ์ทางพันธุกรรมที่ codons 41, 67, 70, 215 และต้านทานเพิ่มขึ้นจาก 50% ความเข้มข้นยับยั้ง 1.44 ไมโครโมไป 8.41 ไมโครโม การสร้างแบบจำลองโมเลกุลของโครงสร้างในระดับอุดมศึกษาของเชื้อ HIV-1 RT เปิดเผยว่าระยะห่างระหว่างโซ่ด้านข้างของ Trp-210 (ในส่วนที่เป็นเกลียว alphaF) และเทอร์-215 (ใน beta11a สาระ) ประมาณ 4 (1 A = 0.1 นาโนเมตร) ใกล้พอ จะส่งผลให้การทำงานร่วมกันอย่างมีนัยสำคัญที่มีพลังระหว่างทั้งสองด้านโซ่หอม โดยสรุป Trp-210 มีส่วนสำคัญที่จะต้านทาน AZT ฟีโนไทป์ของเชื้อ HIV-1 โดย augmenting ต้านทานอย่างน้อยสามไปหกในบริบทของทั้งสองสายพันธุ์ที่ทนและผลของมันอาจจะต้องมีปฏิสัมพันธ์กับกรดอะมิโนที่มีกลิ่นหอมที่ตำแหน่ง 215

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ลำดับของ reverse transcriptase ( RT ) เขต 26 เชื้อไวรัสไวรัส type 1 ( HIV-1 ) ที่แยกได้จากผู้ป่วยที่ได้รับการรักษาด้วย , 3 ' - azido-3 ' - deoxythymidine ( AZT ) พบการกลายพันธุ์ที่โคดอน 210 จากทีทีจี ( ลิวซีน ) tgg ( ทริป ) โดยเฉพาะในความสัมพันธ์กับความต้านทานต่อ AZT . การกลายพันธุ์ trp-210 พบใน 15 20 ไอโซเลต phenotypically ทนต่อ AZT ,เป็นบ่อยกว่าที่พบความต้านทานที่ซิสเต 67 , 70 และ 219 . trp-210 ไม่เคยสังเกตมาก่อนการเกิดการกลายพันธุ์และความต้านทานที่ leu-41 tyr-215 และในชุดลำดับของห้าที่แยกได้จากผู้ป่วยเพื่อการเกิดขึ้นของการกลายพันธุ์ พบว่าเป็น tyr-215 leu-41 , และจากนั้น trp-210 . trp-210 พบร่วมกับ leu-41 ,asn-67 arg-70 และ genotype , ต้านทาน tyr-215 . การกำหนดบทบาทของ trp-210 ในจะต้านทาน โมเลกุลในโคลนได้ถูกสร้างขึ้นด้วยชุดต่างๆของยีน ras RT ที่ 41 , 67 , 70 , 210 และ 215 และทดสอบความไวต่อ AZT . ในโคลนยีนโดยได้มาจาก hxb2-d หรือคลินิกสายพันธุ์ trp-210 คนเดียวไม่ได้เพิ่มขึ้นจะต้านทานในขณะที่ร่วมกับ leu-41 tyr-215 trp-210 และ , สนับสนุนระดับสูงต้านทาน ( ความเข้มข้นยับยั้ง 50% > 1 microm ) ใน hxb2-d trp-210 , กับ tyr-215 สร้างไวรัสที่มีความต้านทานเทียบกับ leu-41 tyr-215 , และ trp-210 . ใส่ trp-210 ในบริบททางพันธุกรรมของยีน ras ใน 41 , 67 , 70 ,และ 215 เพิ่มความต้านทานจาก 50% พบว่า ความเข้มข้นของ 1.44 microm ถึง 8.41 microm . แบบจำลองโมเลกุลของโครงสร้างตติยภูมิของ HIV-1 RT พบว่าระยะห่างระหว่างโซ่ข้างของ trp-210 ( เกลียว alphaf ) และ tyr-215 ( กลุ่มสาระการเรียนรู้ beta11a ) โดยประมาณ 4 ( 1 = 0.1 นาโนเมตร )พอใกล้ที่จะส่งผลอย่างแข็งขัน ปฏิสัมพันธ์ระหว่างทั้งสองหอมข้างโซ่ สรุป trp-210 มีส่วนช่วยอย่างมากที่จะทนต่อ AZT ฟีโนไทป์ของเชื้อโดย augmenting ความต้านทานอย่างน้อยสาม - ค.ศ. 1940 หกในบริบทของการต้านทาน 2 พันธุ์ และผลของมันจะต้องมีปฏิสัมพันธ์กับอะโรมาติกกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง 215 .