2.5. Colorimetric detection of S. a

2.5. Colorimetric detection of S. aureus using the selective filtration system

The assay procedure for the colorimetric detection of the target pathogen is illustrated in Fig. 2. After following the same thawing and washing steps mentioned in Section 2.4, the serial dilutions of S. aureus ranging from 1.5×104 to 1.5×108 CFU/mL were prepared in PBS, and 10 μL of each dilution was added to 90 μL of PBS or the milk. 10 μL of the pure sample or the inoculated milk sample was then mixed with 20 μL of the antibody/AuNP/MNP nanocomposites in 70 μL of PBS. The same amount of the nanocomposites was added to 80 μL of PBS as a negative control. A 30-min incubation of the mixture at RT with 130 rpm shake was followed by a 5-min magnetic separation of the captured cells from the medium. The resulting pellet was finally re-suspended in 100 μL of PBS. In the meantime, the CA membrane filter with 0.8 μm diameter pores was wetted in PBS for 5 min before being placed on a 100 mL Erlenmeyer flask equipped with a filter. A PDMS film with 3 mm diameter holes (7 or 8 on each film) was then put on the membrane to define the filtration locations. Subsequently, 50 μL of the re-suspended bacteria-antibody/AuNP/MNP complexes was pipetted into the PDMS hole where the solution was filtered through the membrane under the vacuum pressure. While the unbound nanoparticles, which have much smaller diameter than the membrane pores, could easily pass through the filter, large S. aureus-bound antibody/AuNP/MNP nanocomposites could not penetrate through the pores and consequently remained on the membrane surface, resulting in a colored spot. Any unbound nanocomposites non-specifically adhering to the membrane was washed away by flowing 50 μL of PBS through each PDMS hole. The remaining particles on the membrane surface were reacted with 5 μL of the gold enhancement solution (5 mM hydroxylamine and 25 mM HAuCl4 in 10 mM citrate buffer at pH 4.0) to intensify the color signal, and 10 μL of PBS was added to each hole after 1 min to stop the reaction. The color intensities from three replicates for each target bacteria concentration were quantified and averaged using a digital camera and ImageJ (Wayne Rasband, National Institute of Health, USA; http://rsb.info.nih.gov/ij) that converted the color signal to the optical density.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 การเทียบเคียงตรวจหมอเทศข้างลาย S. ที่ใช้ระบบกรองที่ใช้The assay procedure for the colorimetric detection of the target pathogen is illustrated in Fig. 2. After following the same thawing and washing steps mentioned in Section 2.4, the serial dilutions of S. aureus ranging from 1.5×104 to 1.5×108 CFU/mL were prepared in PBS, and 10 μL of each dilution was added to 90 μL of PBS or the milk. 10 μL of the pure sample or the inoculated milk sample was then mixed with 20 μL of the antibody/AuNP/MNP nanocomposites in 70 μL of PBS. The same amount of the nanocomposites was added to 80 μL of PBS as a negative control. A 30-min incubation of the mixture at RT with 130 rpm shake was followed by a 5-min magnetic separation of the captured cells from the medium. The resulting pellet was finally re-suspended in 100 μL of PBS. In the meantime, the CA membrane filter with 0.8 μm diameter pores was wetted in PBS for 5 min before being placed on a 100 mL Erlenmeyer flask equipped with a filter. A PDMS film with 3 mm diameter holes (7 or 8 on each film) was then put on the membrane to define the filtration locations. Subsequently, 50 μL of the re-suspended bacteria-antibody/AuNP/MNP complexes was pipetted into the PDMS hole where the solution was filtered through the membrane under the vacuum pressure. While the unbound nanoparticles, which have much smaller diameter than the membrane pores, could easily pass through the filter, large S. aureus-bound antibody/AuNP/MNP nanocomposites could not penetrate through the pores and consequently remained on the membrane surface, resulting in a colored spot. Any unbound nanocomposites non-specifically adhering to the membrane was washed away by flowing 50 μL of PBS through each PDMS hole. The remaining particles on the membrane surface were reacted with 5 μL of the gold enhancement solution (5 mM hydroxylamine and 25 mM HAuCl4 in 10 mM citrate buffer at pH 4.0) to intensify the color signal, and 10 μL of PBS was added to each hole after 1 min to stop the reaction. The color intensities from three replicates for each target bacteria concentration were quantified and averaged using a digital camera and ImageJ (Wayne Rasband, National Institute of Health, USA; http://rsb.info.nih.gov/ij) that converted the color signal to the optical density.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 การตรวจสอบสีของเชื้อ S. aureus โดยใช้ระบบการกรองที่เลือกขั้นตอนการทดสอบสำหรับการตรวจจับสีของเชื้อโรคเป้าหมายจะแสดงในรูปที่ 2. หลังจากต่อไปละลายเหมือนกันและขั้นตอนการซักผ้าที่กล่าวไว้ในมาตรา 2.4 ที่เจือจางอนุกรมของเชื้อ S. aureus ตั้งแต่ 1.5 × 104-1.5 × 108 CFU / mL ได้จัดทำพีบีเอสและ 10 ไมโครลิตรของการลดสัดส่วนแต่ละถูกบันทึกอยู่ใน 90 ไมโครลิตร ของพีบีเอสหรือนม 10 ไมโครลิตรของกลุ่มตัวอย่างบริสุทธิ์หรือตัวอย่างนมผสมเชื้อแล้วกับ 20 ไมโครลิตรของแอนติบอดี / AuNP / MNP nanocomposites 70 ไมโครลิตรของพีบีเอส จำนวนเงินเดียวกันของนาโนคอมพอสิตที่ถูกเพิ่มเข้ามาใน 80 ไมโครลิตรของพีบีเอสเป็นตัวควบคุมเชิงลบ บ่ม 30 นาทีส่วนผสมที่ RT ที่มีการสั่นรอบต่อนาที 130 ตามมาด้วยการแยกแม่เหล็ก 5 นาทีของเซลล์ที่ถูกจับจากสื่อ เม็ดส่งผลให้ในที่สุดก็กลับมาลอยอยู่ใน 100 ไมโครลิตรของพีบีเอส ในขณะเดียวกันตัวกรองเมมเบรนที่มี CA 0.8 ไมโครเมตรเส้นผ่าศูนย์กลางรูขุมขนได้เปียกในพีบีเอสเป็นเวลา 5 นาทีก่อนที่จะถูกวางไว้บนขวด 100 มิลลิลิตร Erlenmeyer การติดตั้งตัวกรอง ภาพยนตร์ PDMS 3 มมหลุมขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง (7 หรือ 8 ในภาพยนตร์แต่ละเรื่อง) จากนั้นก็ใส่ในเมมเบรนที่จะกำหนดสถานที่การกรอง ต่อมา 50 ไมโครลิตรของใหม่ระงับแบคทีเรียแอนติบอดี / AuNP / คอมเพล็กซ์ MNP ถูกปิเปตลงไปในหลุมที่ PDMS วิธีการแก้ปัญหาที่ถูกกรองผ่านเยื่อหุ้มเซลล์ภายใต้ความดันสูญญากาศ ในขณะที่ไม่ได้ผูกไว้อนุภาคนาโนที่มีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางเล็กกว่ารูขุมขนเมมเบรนได้อย่างง่ายดายสามารถผ่านตัวกรองขนาดใหญ่เอสแอนติบอดี้ที่ถูกผูกไว้เรีย / AuNP / MNP nanocomposites ไม่สามารถเจาะผ่านรูขุมขนและทำให้ยังคงอยู่บนพื้นผิวเมมเบรนที่มีผลใน จุดสี หลุด nanocomposites ใด ๆ ที่ไม่ใช่เฉพาะการยึดมั่นในเมมเบรนที่ถูกล้างออกไปโดยการไหล 50 ไมโครลิตรของพีบีเอสผ่านแต่ละหลุม PDMS อนุภาคที่เหลืออยู่บนพื้นผิวเมมเบรนได้รับการตอบสนองด้วย 5 ไมโครลิตรของการแก้ปัญหาการเพิ่มประสิทธิภาพของทอง (ไฮดรอกซิ 5 มิลลิและ 25 มิลลิ HAuCl4 ในบัฟเฟอร์ซิเตรต 10 มิลลิที่ pH 4.0) ที่จะกระชับสัญญาณสีและ 10 ไมโครลิตรของพีบีเอสถูกบันทึกอยู่ในแต่ละหลุม หลังวันที่ 1 นาทีเพื่อหยุดปฏิกิริยา ความเข้มของสีจากสามซ้ำสำหรับแต่ละเป้าหมายแบคทีเรียที่ถูกวัดความเข้มข้นและเฉลี่ยการใช้กล้องดิจิตอลและ ImageJ (เวย์นราสแบนด์สถาบันสุขภาพแห่งชาติสหรัฐอเมริกา; http://rsb.info.nih.gov/ij) ที่แปลงสี ส่งสัญญาณให้ความหนาแน่นของออปติคอล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 7.4 การตรวจหาของ S . aureus ใช้

เลือกระบบการกรองขั้นตอนการทดสอบเพื่อตรวจหาเชื้อ 7.4 ของเป้าหมายจะแสดงในรูปที่ 2 หลังจากการล้างเหมือนกันและขั้นตอนที่ระบุไว้ในมาตรา 2.4 , ซีเรียลเจือจางของ S . aureus ตั้งแต่ 1.5 × 104 1.5 × 108 CFU / ml ได้เตรียมในพีบีเอสและ 10 μ L ของแต่ละการเพิ่ม 90 μ L ของ PBS หรือนม 10 μ L ของตัวอย่างเชื้อบริสุทธิ์หรือผสมกับนม จำนวน 20 μลิตร ) / aunp / mnp นาโนคอมโพสิทใน 70 μ L ของ PBS ปริมาณที่เท่ากันของนาโนคอมโพสิต ได้เพิ่มเป็น 80 μ L ของ PBS เป็นชุดควบคุมลบ30 นาทีบ่มส่วนผสมที่ RT กับ 130 รอบสั่นตามมาด้วย 5 นาทีแยกแม่เหล็กของจับเซลล์ จากสื่อ ส่งผลให้เม็ดสุดท้ายจะแขวนลอยอยู่ใน 100 μ L ของ PBS ในขณะเดียวกัน , CA เมมเบรนกรอง 0.8 μเมตรเส้นผ่าศูนย์กลางรูก็เปียกใน PBS สำหรับ 5 นาทีก่อนที่จะถูกวางไว้บน 100 ml เออร์เลนเมเยอร์ขวดพร้อมไส้กรองภาพยนตร์โดยมีหลุมขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 3 มิลลิเมตร ( 7 หรือ 8 ในแต่ละภาพยนตร์ ) แล้วใส่แผ่นกรอง เพื่อกำหนดตำแหน่ง จำนวน 50 μ L ของ Re ระงับแบคทีเรียแอนติบอดี / aunp / mnp เชิงซ้อนคือ pipetted เข้าโดยหลุมที่โซลูชั่นถูกกรองผ่านเมมเบรนภายใต้สุญญากาศความดัน ขณะที่อนุภาคที่หลุด ,ซึ่งมีเส้นผ่าศูนย์กลางเล็กกว่าเยื่อรูขุมขนได้อย่างง่ายดายสามารถผ่านตัวกรองที่มีขนาดใหญ่ , S . aureus ผูกพันแอนติบอดี / aunp / mnp นาโนคอมโพสิตไม่สามารถเจาะผ่านรูและจึงยังคงอยู่บนผิวเยื่อ ส่งผลให้จุดสีใด ๆไม่หลุดโดยเฉพาะการยึดมั่นในเมมเบรนนาโนคอมโพสิตถูกล้างโดยไหล 50 μ L ของ PBS ผ่านแต่ละโดยหลุม เหลืออนุภาคบนพื้นผิวเมมเบรนทำปฏิกิริยากับ 5 μล. เพิ่มทองโซลูชั่น ( มีน 5 มม. และ 25 มม. 10 มม. haucl4 ซิเตรทบัฟเฟอร์ pH 4.0 ) เพื่อกระชับสัญญาณสีและ 10 μ L ของ PBS ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละหลุม หลังจาก 1 นาที เพื่อหยุดปฏิกิริยา สีความเข้มจากสามแบบสำหรับแต่ละเป้าหมายความเข้มข้นปริมาณแบคทีเรียจากการใช้กล้องดิจิตอลและ ImageJ ( เวย์น rasband , สถาบันสุขภาพแห่งชาติสหรัฐอเมริกา http://rsb.info.nih.gov/ij ) ที่แปลงสัญญาณสีและความหนาแน่น
Optical