2.6. Granulosa cell collection and

2.6. Granulosa cell collection and hypoxia treatment Ovaries were repeatedly washed with PBS and ethanol (70%).Granulosa cells were aseptically harvested by aspiration of large follicles (>5 mm) with a 26-gauge needle, released in medium containing heparin (50 IU/ml), centrifuged for pelleting and then treated with 0.9% prewarmed ammonium chloride at 37 °C for 1 min to
remove red blood cells. Cell number and viability were estimated using a haemocytometer under a phase contrast microscope after vital staining with trypan blue (0.4%) of an aliquot of the cell suspension. Cells were seeded in DMEM/Ham’s F12 supplemented with sodium bicarbonate (2.2 mg/ml), bovine serum albumin (BSA 0.1%), penicillin (100 IU/ml), streptomycin (100 lg/ml),
amphotericin B (2.5 lg/ml), selenium (5 ng/ml) and transferrin(5 lg/ml). Once seeded in 24-well plates (106/ml), cells were incu-bated at 37 °C under humidified atmosphere (5% CO2) for 24 h andthen subjected for 18 h to normoxia (19% O2), hypoxia (5% O2) anoxia (1% O2). Anoxia was achieved employing an AnaerocultÒ Amini while hypoxia was obtained by means of an AnaerocultÒ C
mini (Merck KgaA, Darmstadt, Germany). In both cases the system
consisted of plastic pouches and a paper gas generating sachet
(Basini et al., 2004)
freezed until STC 1 assay

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 คอลเลกชันของเซลล์ granulosa และการรักษาขาดออกซิเจนรังไข่ถูกล้างซ้ำด้วยพีบีเอสและเอทานอล (70%). เซลล์ granulosa เก็บเกี่ยวปลอดเชื้อโดยความทะเยอทะยานของรูขุมขนาดใหญ่ (> 5 มิลลิเมตร) ด้วยเข็ม 26 วัดได้รับการปล่อยตัวในสื่อที่มีเฮ (50 IU / มล.) สำหรับหมุนเหวี่ยงอัดเม็ดและรับการรักษาแล้วด้วยแอมโมเนียมคลอไรด์ 0.9% prewarmed ที่ 37 ° C เป็นเวลา 1
นาทีเพื่อขจัดเซลล์เม็ดเลือดแดง จำนวนเซลล์และมีชีวิตอยู่ที่ประมาณโดยใช้สไลด์นับเม็ดเลือดภายใต้กล้องจุลทรรศน์คมชัดขั้นตอนหลังจากการย้อมสีที่มีความสำคัญ Trypan สีฟ้า (0.4%) ของ aliquot ของเซลล์แขวนลอยที่ เซลล์ที่ถูกเมล็ดใน DMEM / แฮม F12 เสริมด้วยโซเดียมไบคาร์บอเนต (2.2 mg / ml), อัลบูมิซีรั่มวัว (BSA 0.1%) ยาปฏิชีวนะ (100 IU / ml), streptomycin (100 LG / ml)
amphotericin B (2.5 LG / มล.) ซีลีเนียม (5 ng / ml) และ transferrin (5 LG / ml) เมล็ดเมื่ออยู่ในแผ่น 24 หลุม (106 / ml) เซลล์มี incu-ซึ้งน้อยลงที่ 37 ° C ภายใต้บรรยากาศเอ็ดสาย humidi (5% CO2) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง andthen ภายใต้ 18 h เพื่อ normoxia (19% O2) ออกซิเจน (5% O2) ล้มเหลว (1% O2) การล้มเหลวก็ประสบความสำเร็จจ้างAnaerocultÒ Amini ในขณะที่การขาดออกซิเจนที่ได้รับโดยวิธีการของAnaerocultÒ C
มินิ (Merck KGaA, Darmstadt, เยอรมนี)
ในทั้งสองกรณีระบบประกอบไปด้วยถุงพลาสติกและก๊าซที่ก่อให้เกิดกระดาษซอง
(Basini et al., 2004)
freezed จนกระทั่งเอสทีซี 1 ทดสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 การเก็บและรักษาภาวะรังไข่เซลล์ธรรมชาติอยู่ซ้ำ ๆล้างด้วย pbs และเอทานอล ( 70% ) aseptically เก็บเกี่ยวโดยปณิธานธรรมชาติเซลล์มีรูขุมขนขนาดใหญ่ ( > 5 มม. ) เข็มเป็น 26 วัด ที่ถูกปล่อยออกมาในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มี heparin ( 50 IU / ml ) , ไฟฟ้าสำหรับอัดและจากนั้นได้รับ 0.9% prewarmed แอมโมเนียมคลอไรด์ ที่ 37 ° C เป็นเวลา 1 นาที

เอาเซลล์เม็ดเลือดแดงเบอร์เซลล์และสามารถประมาณโดยใช้ haemocytometer ภายใต้กล้องจุลทรรศน์เฟสตรงกันข้าม หลังจากที่สําคัญย้อมด้วยไตรแพนสีฟ้า ( 0.4% ) เป็นส่วนลงตัวของเซลล์แขวนลอย . เซลล์มีเมล็ดใน dmem / แฮมของ F12 ผสมโซเดียมไบคาร์บอเนต ( 2.2 mg / ml ) อัลบูมิน ( ( 0.1% ) , เพนนิซิลิน ( 100 IU / ml ) , streptomycin 100 LG / ml )
amphotericin B ( 2.5 LG / มิลลิลิตรซีลีเนียม ( 5 ng / ml ) และทรานสเฟอริน ( 5 ) ต่อมิลลิลิตร ) เมื่อเมล็ดใน 24 ดีแผ่น ( 106 / ml ) cells ที่ 37 ° C ภายใต้ incu ลดความชื้นจึงเอ็ดบรรยากาศคาร์บอนไดออกไซด์ 5% ) 24 ชั่วโมง โดยภายใต้ 18 H กับวิทยาศาสตร์ ( 19 % ออกซิเจน ( O2 ) 5 % O2 ) ข้อมูลข่าวสาร ( 1 % O2 ) ผู้ร่วมอภิปรายได้บรรลุการเป็น anaerocult Ò amini ในขณะที่ออกซิเจนได้โดยวิธีการของ anaerocult Ò C
มินิ ( กระตุ้นการทดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี )ในทั้งสองกรณีระบบ
ประกอบด้วยกระเป๋าพลาสติกและกระดาษซองผลิตแก๊ส
( basini et al . , 2004 )
freezed จนกว่า STC 1 การทดสอบ