3. Results and discussionThe affect

3. Results and discussion
The affected plants showed various kinds of malformation of vegetative and floral parts. The affected vines showed conspicuous tufts of malformed branches giving a witches broom appearance with yellowing symptoms (Fig. 1a). The stalk of affected spike increased in length, the bracts and the flowers were transformed into small leaf like structures and floral buds of the affected spikes were transformed into small branches with nodes and internodes similar to fruiting laterals (Fig. 1b). Malformed fruiting laterals produced aborted flower buds/small leaf like structures. DNA extracted from these malformed budtips was used as template in PCR. In the case of first round PCR, use of primers SN910601/P6 failed to yield visible amplified DNA fragments either from infected or healthy tissues of black pepper. This could be due to the presence of DNA concentration below the detection limit in ethidium bromide-stained agarose gel. When the first round PCR products were reamplified in the nested PCR using primers R16F2n/R16R2, a DNA fragment of 1.2 kb was obtained in the diseased black pepper samples and a known phytoplasma positive sample (periwinkle little leaf) but not in asymptomatic plants (Fig. 2). This DNA fragment was cloned and its nucleotide sequence determined. The sequence was deposited in GenBank and its accession number listed in Table 1. The sequenced region which contained 1230 bases was compared with corresponding region of phytoplasma isolates belonging to different groups from different hosts and regions (Table 1). Comparative sequence analyses showed that the black pepper phytoplasma shared maximum sequence identity (98.7–99.4%) with phytoplasma isolates belonging to aster yellows group (16Sr I) (Table 2). In contrast, black pepper phytoplasma showed an identity ranging from 87.0 to 88.0% with seven members of elm yellows group (16Sr V) used for comparison. Identities among different members within a group was >98% (Table 2). The identities of black pepper phytoplasma with 13 other groups and other undesignated groups (Table 1) were in the range of 88–96% (not shown). Phylogenetic tree constructed using these sequences also revealed that among phytoplasmas, black pepper phytoplasma was most closely related to the members of 16S rDNA group I (aster yellows) forming one cluster that is well separated from other groups (Fig. 3).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.
ผลการอภิปรายและพืชที่ได้รับผลกระทบพบว่ามีหลายชนิดของความไม่สมประกอบของพืชและชิ้นส่วนดอกไม้ เถาได้รับผลกระทบที่เห็นได้ชัดเจนที่แสดงให้เห็นกระจุกอยู่ในรูปแบบของสาขาให้แม่มดลักษณะไม้กวาดที่มีอาการเหลือง (รูป. 1a) ก้านเข็มได้รับผลกระทบเพิ่มขึ้นในระยะเวลาที่ใบประดับและดอกไม้ที่ถูกเปลี่ยนเป็นใบเล็ก ๆ เช่นโครงสร้างและตาแหลมดอกไม้ได้รับผลกระทบถูกเปลี่ยนเป็นสาขาขนาดเล็กที่มีโหนดและ internodes คล้ายกับ laterals ผล (รูป. 1b) laterals ผลในรูปแบบการผลิตที่ถูกทำแท้งตาดอก / ใบเล็ก ๆ เช่นโครงสร้าง ดีเอ็นเอที่สกัดจาก budtips ไม่ถูกต้องเหล่านี้ถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบใน PCR ในกรณีของการ PCR รอบแรกการใช้ไพรเมอร์ SN910601 / P6 ล้มเหลวที่จะให้ผลผลิตที่มองเห็นชิ้นส่วนดีเอ็นเอขยายทั้งจากเนื้อเยื่อที่ติดเชื้อหรือการมีสุขภาพดีของพริกไทยดำ ซึ่งอาจเป็นเพราะการปรากฏตัวของความเข้มข้นของดีเอ็นเอกว่าขีด จำกัด ในการตรวจสอบ ethidium bromide เปื้อนเจล agarose เมื่อผลิตภัณฑ์ PCR รอบแรกถูก reamplified ใน PCR ที่ซ้อนกันโดยใช้ไพรเมอร์ R16F2n / R16R2 เป็นชิ้นดีเอ็นเอ 1.2 กิโลได้ในตัวอย่างพริกไทยดำโรคและตัวอย่าง phytoplasma ที่รู้จักกันในเชิงบวก (หอยขมใบเล็ก ๆ ) แต่ไม่ได้อยู่ในพืชที่ไม่มีอาการ (รูปที่ . 2) ชิ้นดีเอ็นเอนี้ถูกโคลนและลำดับเบสของกำหนด ลำดับที่ถูกฝากไว้ใน GenBank และจำนวนการเข้าจดทะเบียนในตารางที่ 1 ภาคติดใจที่มีฐาน 1230 เมื่อเทียบกับภูมิภาคที่สอดคล้องกันของเชื้อ phytoplasma อยู่ในกลุ่มที่แตกต่างจากครอบครัวที่แตกต่างกันและภูมิภาค (ตารางที่ 1) ลำดับเปรียบเทียบการวิเคราะห์แสดงให้เห็นว่า phytoplasma พริกไทยดำที่ใช้ร่วมกันลำดับบัตรสูงสุด (98.7-99.4%) กับไอโซเลท phytoplasma อยู่ในกลุ่มสีเหลืองดอกแอสเตอร์ (16Sr I) (ตารางที่ 2) ในทางตรงกันข้าม phytoplasma พริกไทยดำแสดงให้เห็นตัวตนตั้งแต่ 87.0-88.0% กับเจ็ดสมาชิกของกลุ่มสีเหลืองเอล์ม (16Sr V) ที่ใช้ในการเปรียบเทียบ อัตลักษณ์ที่แตกต่างกันในหมู่สมาชิกภายในกลุ่มเป็น> 98% (ตารางที่ 2) ตัวตนของ phytoplasma พริกไทยดำกับ 13 กลุ่มอื่น ๆ และกลุ่ม undesignated อื่น ๆ (ตารางที่ 1) อยู่ในช่วง 88-96% (ไม่แสดง) Phylogenetic ต้นไม้สร้างขึ้นโดยใช้ลำดับเหล่านี้ยังพบว่าในกลุ่มไฟโตพลาสมาพริกไทยดำ phytoplasma ถูกที่สุดที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับสมาชิกของกลุ่ม 16S rDNA ผม (สีเหลืองดอกแอสเตอร์) สร้างกลุ่มหนึ่งที่แยกออกจากกันอย่างดีจากกลุ่มอื่น ๆ (รูปที่. 3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 . ผลและการอภิปราย
ผลกระทบพืชมีหลายชนิดผิดปกติและชิ้นส่วนพืชดอกไม้ ผลกระทบเถาพบเด่นกระจุกสาขาผิดแบบน่ะซี่ให้ไม้กวาดแม่มดปรากฏอาการมีสีเหลือง ( รูปที่ 1A ) ก้านของผลกระทบชั่วคราวเพิ่มความยาวส่วนใบและดอกมีขนาดเล็ก เช่น โครงสร้าง และกลายเป็นใบไม้ดอกไม้ buds ของผลกระทบแทบถูกเปลี่ยนเป็นสาขาขนาดเล็กที่มีโหนดและปล้องคล้ายกับผล laterals ( รูปที่ 1A ) ผิดแบบน่ะซี่ติด laterals ผลิตยกเลิกดอกตูมขนาดเล็ก / ใบ เช่น โครงสร้าง ดีเอ็นเอที่สกัดได้จาก budtips ผิดแบบน่ะซี่ เหล่านี้ถูกใช้เป็นแม่แบบใน PCRในกรณีของพีซีอาร์รอบแรก ใช้ไพรเมอร์ sn910601 / P6 ล้มเหลวในการมองเห็นเพิ่มผลผลิตดีเอ็นเอทั้งจากการติดเชื้อหรือสุขภาพเนื้อเยื่อของพริกไทยดำ ซึ่งอาจเป็นเพราะการปรากฏตัวของ DNA ความเข้มข้นต่ำกว่าขีดจำกัดในทิเดียมโบรไมด์เปื้อนเจล . เมื่อรอบแรกและผลิตภัณฑ์ reamplified ในวิธี PCR โดยใช้ primers r16f2n / r16r2 ซ้อนกัน ,เป็นดีเอ็นเอของ 1.2 KB ) โรคพริกไทยตัวอย่างและตัวอย่างที่รู้จักกันเป็นเชื้อไฟโตพลาสมา ( แพงพวยใบเล็ก ) แต่ในพืชกลุ่ม ( รูปที่ 2 ) นี้คือขนาดของดีเอ็นเอและลำดับนิวคลีโอไทด์มุ่งมั่น ลําดับที่ฝากในขนาดและเปลี่ยนเบอร์โทรศัพท์ที่ระบุไว้ในตารางที่ 1ในภูมิภาคนี้ ซึ่งมีฐานของเราถูกเมื่อเทียบกับภูมิภาคที่สอดคล้องกันของเชื้อไฟโตพลาสมา แยกเป็นของกลุ่มที่แตกต่างกันจากโฮสต์ที่แตกต่างกันและภูมิภาค ( ตารางที่ 1 ) การวิเคราะห์การเปรียบเทียบพบว่า ไฟโตพลาสมาพริกไทยดำแบ่งปันตัวตนลำดับสูงสุด ( 98.7 – 99.4 เปอร์เซ็นต์ ) แยกเชื้อไฟโตพลาสมาของแอสเตอร์ สีเหลือง กรุ๊ป ( 16sr ฉัน ) ( ตารางที่ 2 ) ในทางตรงกันข้ามไฟโตพลาสมาพริกไทยดำมีตัวตนตั้งแต่ 87.0 ให้ 88.0 ด้วยเจ็ดสมาชิกของ Elm สีเหลือง กรุ๊ป ( 16sr V ) ที่ใช้สำหรับการเปรียบเทียบ ตัวตนของสมาชิกที่แตกต่างกันภายในกลุ่ม > 98% ( ตารางที่ 2 ) ตัวตนของเชื้อไฟโตพลาสมาพริกไทยดำกับกลุ่มอื่น ๆและกลุ่ม undesignated อื่นๆ ( ตารางที่ 1 ) อยู่ในช่วง 88 – 96 % ( ไม่แสดง )สร้างโดยใช้ลำดับ phylogenetic ต้นไม้เหล่านี้ ยังเปิดเผยว่า ใน phytoplasmas เชื้อไฟโตพลาสมา , พริกไทยดํา คือส่วนใหญ่ที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับสมาชิกของกลุ่ม 16S rDNA ( แอสเตอร์สีเหลือง ) สร้างกลุ่มหนึ่งที่ถูกแยกออกจากกลุ่มอื่น ๆ ( รูปที่ 3 )