2.6. Immunohistochemistry analysisP

2.6. Immunohistochemistry analysis
Paraffin sections (5 μm) of skins were deparaffinized and rehydrated in graded ethanol. Endogenous peroxidase activity was blocked with 3% hydrogen peroxide for 10 min. After being washed three times (5 min each) with phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.4), the sections were incubated in 5% BSA diluted in PBS for 20 min to block the non-specific binding, then incubated with 1:70 diluted rabbit polyclonal antibodies against xCT overnight at 4 °C. After being washed in PBS, the sections were incubated in polymerized HRP-conjugated goat anti-rabbit second antibody (CWBIO, China) at 37 °C for 30 min. After being washed 3 times (5 min each) in PBS, immunoreactivity was visualized by incubating sections in the presence of 3, 3″-diaminobenzidine (Tiangen, China) substrate. The sections were counterstained with hematoxylin, dehydrated, clear sealed with neutral balsam. For negative controls, the slides were incubated overnight with non-immune bovine serum instead of the primary antibody.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6. Immunohistochemistry วิเคราะห์ส่วนพาราฟิน (5 μm) สกินได้ deparaffinized และ rehydrated ในเอทานอลที่มีการจัดระดับ กิจกรรม endogenous peroxidase ถูกบล็อก ด้วยไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 3% สำหรับ 10 นาที หลังจากการล้าง 3 ครั้ง (5 นาทีละ) ด้วย buffered ฟอสเฟตน้ำเกลือ (PBS ค่า pH 7.4), ส่วนที่ incubated 5% บีเอสเอผสมใน PBS ใน 20 นาทีเพื่อบล็อคการรวมไม่ใช่เฉพาะ แล้ว incubated กับ 1:70 ที่ทำให้กระต่ายแอนตี้ polyclonal กับ xCT ค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจากการล้างใน PBS ส่วนถูกจัด incubated ในแพะ polymerized HRP กลวงป้องกันกระต่ายสองแอนติบอดี (CWBIO จีน) ที่ 37 ° C สำหรับ 30 นาที หลังจากการล้าง 3 ครั้ง (5 นาทีละ) ใน PBS, immunoreactivity มี visualized โดย incubating ส่วนในต่อหน้าของพื้นผิว 3 ″-diaminobenzidine (Tiangen จีน) 3 ส่วนที่ counterstained กับ hematoxylin อบแห้ง ปิดผนึกกับ balsam กลางชัดเจน สำหรับควบคุมค่าลบ ภาพนิ่งถูก incubated ค้างคืน ด้วยซีรั่มวัวไม่คุ้มกันแทนแอนติบอดีหลัก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 การวิเคราะห์หลอด
พาราฟินส่วน ( 5 μ m ) ของผิวหนังและเป็น deparaffinized ได้ทำการ รีไฮเดรทมในระดับเอทานอล กิจกรรมเอนไซม์ภายนอกถูกปิดกั้นด้วยไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 3% เป็นเวลา 10 นาที หลังจากการล้าง 3 ครั้ง ( 5 นาทีแต่ละ ) กับเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( PBS pH 7.4 ) , ส่วนที่ถูกบ่มใน 5% BSA เจือจางใน PBS 20 นาทีเพื่อป้องกันชนิดผูกแล้วแยก 1:70 เจือจางกระต่ายใช้แอนติบอดีต่อ xct ค้างคืนที่ 4 องศา หลังจากการล้างใน PBS , ส่วนที่ถูกบ่มในโพลิเมอร์ HRP และแพะป้องกันกระต่ายที่สองแอนติบอดี ( cwbio , จีน ) ที่อุณหภูมิ 37 องศา C เป็นเวลา 30 นาที หลังจากการล้าง 3 ครั้ง ( 5 นาทีแต่ละครั้ง ) ในการมองเห็น โดยการแช่เป็นพีบีเอส ส่วนในการแสดงตนของ 33 เพลง - diaminobenzidine ( tiangen , จีน ) สาร ส่วนที่เป็น counterstained กับย้อมแห้ง ล้าง ปิดด้วยเทียนที่เป็นกลาง สำหรับการควบคุมลบภาพนิ่งถูกบ่มค้างคืนกับวัวไม่ภูมิคุ้มกันซีรั่มแทนแอนติบอดีประถมศึกษา