As the Con A aptabody is highly spe

As the Con A aptabody is highly specific, we opted to make the process a single step methodology by excluding the prior downstream processing steps. For this reason, we have loaded the crude extract of jack bean over chromatographic column without any intermediate purification. After completion of binding reaction, the affinity retained molecules were separated and eluted in high salt buffer. Elution of the target molecules from column can be performed either by adding denaturing agents, organic modifiers or by competing agents to the mobile phase, or by changing its pH or temperature during elution. As non-covalent forces constitute the basis of aptamer–protein interaction, we modulated the ionic strength of the mobile phase using high salt concentrations (0.25–2.0 M NaCl) to break the weak non-covalent forces and elute the target proteins. As shown in Fig. 2, 1.5 M NaCl was found to elute maximum protein from support with no effect of further increase in salt concentration. Probably, the smaller size and high target affinity of aptabody has played a crucial role in target purification. As small size of aptabody allows high surface coverage (density) over solid support, the accompanying high affinity and specificity ensures maximal target retention. These presumptions appear true by the obtained yield, purity and recovery of the purified Con A.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Aptabody คอน A เป็นการ เราเลือกเพื่อทำให้กระบวนการวิธีการขั้นตอนเดียว โดยไม่รวมขั้นตอนการประมวลผลขั้นปลายน้ำก่อน ด้วยเหตุนี้ เราได้โหลดสารสกัดหยาบของถั่วแจ็คผ่านคอลัมน์ chromatographic ไม่ฟอกกลางใด ๆ หลังจากเสร็จสิ้นการผูกปฏิกิริยา โมเลกุลความสัมพันธ์คงถูกแยก และ eluted ในเกลือบัฟเฟอร์สูง Elution ของโมเลกุลเป้าหมายจากคอลัมน์สามารถทำได้ โดยการเพิ่มตัวแทน denaturing วิเศษณ์อินทรีย์ หรือ โดยตัวแทนแข่งขันระยะเคลื่อน หรือ โดยการเปลี่ยนแปลงของ pH หรืออุณหภูมิระหว่าง elution เราเป็นกองกำลังไม่ใช่ covalent เป็นพื้นฐานของการโต้ตอบ aptamer – โปรตีน สันทัดแรง ionic ของเฟสเคลื่อนที่โดยใช้ความเข้มข้นเกลือสูง (0.25-2.0 M NaCl) ทำลายกองกำลังไม่ใช่ covalent อ่อนแอ และ elute โปรตีนเป้าหมาย ดังแสดงใน Fig. 2, 1.5 M NaCl พบกับ elute โปรตีนสูงสุดจากการสนับสนุนโดยไม่มีผลของความเข้มข้นของเกลือเพิ่มเติม คง ความสัมพันธ์ขนาดเล็กเป้าหมายสูง และขนาดของ aptabody ได้เล่นบทบาทที่สำคัญในเป้าหมายฟอก ขนาดเล็กของ aptabody ช่วยให้คลุมผิวสูง (ความหนาแน่น) เหนือสนับสนุนแข็ง มายุ่งและ specificity ใจคงเป้าหมายสูงสุด Presumptions เหล่านี้ปรากฏเป็นจริง โดยผลตอบแทนที่ได้รับ ความบริสุทธิ์ และการกู้คืนของคอนบริสุทธิ์อ.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในฐานะที่เป็นนักโทษ aptabody เป็นอย่างมากโดยเฉพาะที่เราเลือกที่จะทำให้กระบวนการวิธีการขั้นตอนเดียวโดยไม่รวมขั้นตอนการประมวลปลายน้ำก่อน ด้วยเหตุนี้เราได้โหลดสารสกัดจากถั่วแจ็คมากกว่าคอลัมน์โครมาโดยไม่บริสุทธิ์กลางใด ๆ หลังจากเสร็จสิ้นการผูกพันปฏิกิริยาความสัมพันธ์ไว้โมเลกุลถูกแยกออกและชะในบัฟเฟอร์เกลือสูง elution ของโมเลกุลเป้าหมายจากคอลัมน์สามารถดำเนินการอย่างใดอย่างหนึ่งโดยการเพิ่มตัวแทน denaturing ปรับเปลี่ยนอินทรีย์หรือตัวแทนแข่งขันเพื่อเฟสเคลื่อนที่หรือโดยการเปลี่ยนแปลงค่า pH หรืออุณหภูมิในช่วงชะ ในฐานะที่เป็นกองกำลังที่ไม่ใช่โควาเลนต์เป็นพื้นฐานของการมีปฏิสัมพันธ์ aptamer โปรตีนที่เราปรับความแรงของอิออนของเฟสเคลื่อนที่โดยใช้ความเข้มข้นของเกลือสูง (0.25-2.0 M NaCl) ที่จะทำลายกองกำลังที่ไม่ใช่โควาเลนต์ที่อ่อนแอและชะโปรตีนเป้าหมาย ดังแสดงในรูป 2, 1.5 M NaCl พบชะโปรตีนสูงสุดจากการสนับสนุนที่มีผลกระทบจากการเพิ่มขึ้นต่อไปในความเข้มข้นของเกลือไม่มี อาจจะมีขนาดเล็กลงและความสัมพันธ์เป้าหมายสูงของ aptabody มีบทบาทสำคัญในการทำให้บริสุทธิ์เป้าหมาย ในฐานะที่เป็นขนาดเล็ก ๆ ของ aptabody ช่วยคุ้มครองผิวสูง (ความหนาแน่น) มากกว่าการสนับสนุนของแข็งความสัมพันธ์กันสูงประกอบและความจำเพาะเพื่อให้แน่ใจว่าการเก็บรักษาเป้าหมายสูงสุด สมมติฐานเหล่านี้จะปรากฏเป็นจริงโดยอัตราผลตอบแทนที่ได้รับความบริสุทธิ์และการฟื้นตัวของคอน A. บริสุทธิ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เป็นโกง aptabody เฉพาะเจาะจงสูง เราเลือกที่จะให้กระบวนการวิธีการขั้นตอนเดียวโดยรวมก่อนผ่านการประมวลผล ขั้นตอน สำหรับเหตุผลนี้ เราได้บรรจุสารสกัดหยาบจากแจ็คและถั่วมากกว่าคอลัมน์โดยไม่มีกลางที่บริสุทธิ์ หลังจากความสมบูรณ์ของปฏิกิริยาการแยกโมเลกุล affinity เก็บไว้ในบัฟเฟอร์ และตัวอย่างเกลือสูงใช้เป้าหมายโมเลกุลจากคอลัมน์สามารถดำเนินการอย่างใดอย่างหนึ่งโดยการเพิ่มสารี่ , อินทรีย์ปรับเปลี่ยน หรือโดยตัวแทนแข่งขันในเฟสเคลื่อนที่ หรือ โดยการเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิในช่วง pH หรือใช้ . ไม่มีการบังคับอย่างเป็นพื้นฐานของ aptamer –โปรตีนปฏิสัมพันธ์ที่เราปรับความแรงของไอออนของเฟสเคลื่อนที่โดยใช้ความเข้มข้นเกลือสูง ( 0.25 – 20 M NaCl ) แบ่งการบังคับ และ elute อ่อนแอไม่ใช่เป้าหมายที่โปรตีน ดังแสดงในรูปที่ 2 , 1.5 M NaCl พบว่าโปรตีนจาก elute สูงสุดสนับสนุนกับไม่มีผลของการเพิ่มความเข้มข้นของเกลือ คง ขนาดเป็นพี่น้องกันและเป้าหมายสูง aptabody มีบทบาทสำคัญในการกำหนดเป้าหมายเป็นขนาดของ aptabody ช่วยให้ความคุ้มครองผิวสูง ( ความหนาแน่น ) สนับสนุนของแข็งมาตะบอยและความจำเพาะในการเป้าหมายสูงสุด ข้อสันนิษฐานเหล่านี้ปรากฏขึ้นจริง โดยนำผลผลิต ความบริสุทธิ์ และการฟื้นตัวของบริสุทธิ์ con A