APX was measured following the meth

APX was measured following the methods of Nakano and Asada
[29] by monitoring the rate of ascorbate oxidation at 290 nm
(E = 2.8 mM cm−1). The reaction mixture contained 25 mM phosphate
buffer (pH 7.0), 0.1 mM EDTA, 100 mM H2O2, 0.25 mM
ascorbate (AsA), and the enzyme aliquot.
GR was assayed according to the method of Foyer and Halliwell
[30] by following the decrease in absorbance at 340 nm
caused by NADPH oxidation (E = 6.2 mM cm−1). The reaction mixture
consisted of 25 mM HEPES buffer (pH 7.8), 0.5 mM glutathione
disulphide (GSSG), 0.12 mM NADPH, and the enzyme aliquot.
SOD was determined based on the photochemical method
described by Giannopolitis and Ries [31]. One unit of SOD activity
was defined as the amount of enzyme required to induce a 50%
inhibition of the rate of p-nitro blue tetrazolium chloride reduction
at 560 nm.
CAT activity was assayed in a reaction mixture containing
25 mM phosphate buffer (pH 7.0), 10 mM H2O2, and the
enzyme. The decomposition of H2O2 was followed at 240 nm
(E = 39.4 mM cm−1) [32].
The activity of guaiacol peroxidase (GPOD) was assayed following
the method described by Cakmak and Marschner [32] with
some modifications. The reaction mixture contained 25 mM phosphate
buffer (pH 7.0), 0.05% guaiacol, 10 mM H2O2, and the enzyme.
The activity was determined based on the increase in absorbance
at 470 nm caused by guaiacol oxidation (E = 26.6 mM cm−1).
DHAR (EC1.8.5.1) activity was measured by monitoring the
increase in absorbance at 265 nm (E = 14 mM−1 cm−1) caused by
the formation of AsA. The reaction mixture contained 100 mM
potassium phosphate (pH 7.0), 50 mM reduced glutathione, 5 mM
dehydroascorbate, and 100 L of the enzyme extract. The rate of
reaction was corrected for the non-enzymatic reduction of dehydroascorbate
by reduced glutathione [33].
2.9.2. Antioxidants determination
AsA and total glutathione were extracted from 0.5 g to 1.0 g of
leaf with 10 mL of 5% trichloroacetic acid and 5% sulfosalicylic acid,
respectively. AsA content was measured according to the methods
described by Arakawa et al. [34]. Total glutathione was determined
by an enzymatic cycling assay method by Griffith [35]. GSSG was
determined after GSH was removed through vinylpyridine derivatization.
GSH was determined by subtraction of GSSG from the total
GSH content.
2.9.3. Active oxygen species and lipid peroxidation determination
The production rate of O2 was determined according to Elstner
and Heupel [36] by monitoring the nitrite formation from hydroxylamine
in the presence of O2. The absorbance was read at 530 nm.
The content of H2O2 was determined by monitoring the A415 of
the titanium–peroxide complex according to Brennan and Frenkel
[37].
For the measurement of lipid peroxidation in leaves, the thiobarbituric
acid (TBA) test, which determines malonaldehyde (MDA)
as an end product of lipid peroxidation, was used. Leaf material
(500 mg) was homogenated in a potassium phosphate buffer (pH
7.8). The homogenate was centrifuged at 12,000
×
g for 20 min,
and 1 mL of the supernatant was incubated in boiling water for
30 min. The reaction was stopped by placing the reaction tubes
with 1 mL of TBA solution containing the above reagents plus 0.65%
TBA in an ice bath. The samples were centrifuged at 1500
×
g for
10 min, and the absorption of the supernatant was read at 532 nm.
The value for non-specific absorption at 600 nm was subtracted.
The amount of MDA was calculated from the extinction coefficient
155 mM−1 cm−1.
The data were analyzed using Origin 7.0 Software (OriginLab,
Northampton, MA, USA). The measurements were performed
on randomly selected samples from four replicates. Duncan’s

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ให้ APX ถูกวัดตามวิธีของนากาโนะและ Asada[29] โดยตรวจสอบอัตราการเกิดออกซิเดชัน ascorbate ที่ 290 nm(E = cm−1 2.8 mM) ฟอสเฟต 25 มม.ส่วนผสมประกอบด้วยปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ (pH 7.0), EDTA 0.1 มม. 100 มม. H2O2, 0.25 มม.ascorbate (AsA), และเอนไซม์ aliquotGR ถูก assayed ตามวิธีการของเคาน์เตอร์รับและ Halliwell[30] โดยลดลง absorbance ที่ 340 nmเกิดจากการออกซิเดชัน NADPH (E = 6.2 มม. cm−1) ส่วนผสมของปฏิกิริยาประกอบด้วย 25 มม. HEPES บัฟเฟอร์ (pH 7.8), กลูตาไธโอน 0.5 mMdisulphide (GSSG), NADPH 0.12 มม. และเอนไซม์ aliquotสดได้กำหนดตามวิธีการ photochemicalอธิบายโดย Giannopolitis Ries [31] กิจกรรมสดหนึ่งหน่วยถูกกำหนดเป็นจำนวนของเอนไซม์ที่จำเป็นเพื่อก่อให้เกิด 50%ยับยั้งอัตราลดคลอไรด์ tetrazolium บลูไนโตร pที่ 560 nmกิจกรรมแมวถูก assayed ในประกอบด้วยส่วนผสมของปฏิกิริยา25 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0), H2O2, 10 มม.และเอนไซม์ การเน่าของ H2O2 ถูกตามที่ 240 nm(E = cm−1 มม. 39.4) [32]กิจกรรมของ guaiacol peroxidase (GPOD) ถูก assayed ดังต่อไปนี้วิธีการอธิบายไว้ โดย Cakmak และ Marschner [32] ด้วยปรับเปลี่ยนบางอย่าง ฟอสเฟต 25 มม.ส่วนผสมประกอบด้วยปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ (pH 7.0), 0.05% guaiacol, 10 มม. H2O2 และเอนไซม์นี้กำหนดกิจกรรมตามการเพิ่มขึ้นของ absorbanceที่ 470 nm ที่เกิดจากการออกซิเดชัน guaiacol (E = 26.6 มม. cm−1)กิจกรรมดาร์ (EC1.8.5.1) ถูกวัด โดยการตรวจสอบการเพิ่ม absorbance ที่ 265 nm (E = 14 mM−1 cm−1) เกิดจากการก่อตัวของ AsA ปฏิกิริยาผสมอยู่ 100 มม.โพแทสเซียมฟอสเฟต (pH 7.0), 50 มม.ลดกลูตาไธโอน 5 มม.dehydroascorbate และ L 100 ของเอนไซม์สกัด อัตราปฏิกิริยามีแก้ไขสำหรับการลดไม่ใช่เอนไซม์ในระบบของ dehydroascorbateโดยลดไธ [33]2.9.2. กำหนดสารต้านอนุมูลอิสระAsA และกลูตาไธโอนรวมถูกสกัดจาก 0.5 g ถึง 1.0 g ของใบไม้กับ 10 mL กรด trichloroacetic 5% และ 5% กรด sulfosalicylicตามลำดับ AsA เนื้อหาถูกวัดตามวิธีการอธิบายโดยอะระกะวะ et al. [34] กลูตาไธโอนรวมได้กำหนดโดยเอนไซม์ในระบบขี่ทดสอบวิธีโดยมหานคร Griffith [35] เป็น GSSGกำหนดหลังจาก GSH ถูกเอาออกผ่าน vinylpyridine derivatizationGSH ถูกกำหนด โดยการลบ GSSG จากผลรวมเนื้อหา GSH2.9.3 ใช้ออกซิเจนชนิดและไขมัน peroxidation กำหนดกำหนดอัตราการผลิตของ O2 ตาม Elstnerและ Heupel [36] โดยการตรวจสอบการก่อตัวของไนไตรต์จาก hydroxylamineในต่อหน้าของ O2 Absorbance ที่ถูกอ่านที่ 530 nmกำหนด โดยการตรวจสอบ A415 ของเนื้อหาของ H2O2คอมเพล็กซ์ไทเทเนียม – เพอร์ออกไซด์ตามเบรนแนนและ Frenkel[37]สำหรับวัดไขมัน peroxidation ในใบ thiobarbituricทดสอบกรด (TBA) ซึ่งกำหนด malonaldehyde (MDA)เป็นผลิตภัณฑ์สิ้นสุดของ peroxidation ของไขมัน ใช้ ใบวัสดุ(500 มิลลิกรัม) ถูก homogenated ในโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH7.8) homogenate ถูก centrifuged ที่ 12000×g สำหรับ 20 นาทีและ 1 mL ของ supernatant ถูก incubated ในน้ำเดือด30 นาที หยุดปฏิกิริยา โดยการใส่หลอดปฏิกิริยามี 1 mL ของ TBA ประกอบด้วย reagents บวก 0.65% ข้างต้นTBA ในอ่างอาบน้ำเป็นน้ำแข็ง ตัวอย่างถูก centrifuged 1500×g สำหรับ10 นาที และการดูดซึมของ supernatant ถูกอ่านที่ 532 nmค่าการดูดซึมไม่ใช่เฉพาะที่ 600 นาโนเมตรถูกลบจำนวน MDA ถูกคำนวณจากค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์155 mM−1 cm−1ข้อมูลได้วิเคราะห์โดยใช้ซอฟแวร์ 7.0 กำเนิด (OriginLabณ MA สหรัฐอเมริกา) ดำเนินการประเมินในตัวอย่างที่สุ่มเลือกจากสี่เหมือนกับ ของดันแคน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

APX วัดดังต่อไปนี้วิธีการของนากาโนะ และอาซาดะ
[ 29 ] โดยการตรวจสอบราคาจากปฏิกิริยาออกซิเดชันที่ 290 nm
( E = 2.8 mm cm − 1 ) มีปฏิกิริยาผสมฟอสเฟตบัฟเฟอร์
25 มม. ( pH 7.0 ) , 0.1 mM EDTA H2O2 , 100 มม. จาก 0.25 มม.
( ASA ) และเอนไซม์ส่วนลงตัว .
กรัมซีรั่มตามวิธีการของห้องโถง และ Halliwell
[ 30 ] ตามลดการดูดกลืนแสงที่ 340 nm
เกิดจาก nadph ออกซิเดชัน ( E = 6.2 mm cm − 1 ) ปฏิกิริยาผสม
จำนวน 25 มิลฮีเปสบัฟเฟอร์ pH 7.8 ) , กลูต้าไธโอน =
0.5 มม. ( gssg ) nadph 0.12 มม. และเอนไซม์ส่วนลงตัว .
ข่าวสดตกลงใจตาม
2 บรรยายโดยวิธี giannopolitis ries และ [ 31 ] หน่วยหนึ่งของ SOD กิจกรรม
ถูกกำหนดไว้เป็นปริมาณของเอนไซม์ ต้องจูง 50 %
การยับยั้งอัตรา p-nitro สีฟ้า tetrazolium คลอไรด์ลด
ที่ 560 nm .
กิจกรรมแมวซีรั่มในปฏิกิริยาผสมที่ประกอบด้วย
25 มม. ( ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) , แบตเตอรี่ 10 มม. และ
เอนไซม์ การสลายตัวของ H2O2 ตามที่ 240 nm
( E = 39.4 mm cm − 1 ) [ 32 ] .
กิจกรรมของเอนไซม์ได ( gpod ) ซีรั่มตามวิธีที่อธิบายไว้โดย cakmak

[ 32 ] ด้วย และ มาร์ชเนอร์มีการปรับเปลี่ยน มีปฏิกิริยาผสมฟอสเฟตบัฟเฟอร์
25 มม. ( pH 7.0 ) , 0.05 % ค่า H2O2 10 มม. , และเอนไซม์
กิจกรรมตัดสินใจบนพื้นฐานเพิ่มขึ้นในค่า
ที่ 470 nm เกิดจากค่าออกซิเดชัน ( E = 15 mm cm − 1 ) .
Dh ā r ( ec1.8.5.1 ) กิจกรรมวัดด้วย การเพิ่มค่าการดูดกลืนแสงที่ 260 นาโนเมตร
( E = 14 มม. − 1 ซม. − 1 ) เกิดจาก
การก่อตัวของอาสาปฏิกิริยาผสมประกอบด้วยโพแทสเซียมฟอสเฟต 100 mm
( pH 7.0 ) , 50 มม. ลดลงกลูตาไธโอน , 5 mm
เกร็ดเล็กเกร็ดน้อย และ 100  L ของเอนไซม์สกัดเข้มข้น อัตราของปฏิกิริยาที่ได้รับการแก้ไขสำหรับ

โดยเอนไซม์ไม่ลด เกร็ดเล็กเกร็ดน้อยลดลงกลูตาไธโอน [ 33 ] .
2.9.2 . สารต้านอนุมูลอิสระปริมาณ
อาสาและรวมกลูต้าไธโอนสกัดจาก 0.5 กรัม 1.0 g
ใบที่ 10 ml 5 % และ 5 % sulfosalicylic กรดไตรคลอโรอะซิติกแอซิด
ตามลำดับ อาสาเนื้อหาได้ตามวิธีการ
อธิบายโดยคนบ้า et al . [ 34 ] กลูต้าไธโอน ทั้งหมดถูกกำหนดโดยวิธีเอนไซม์จักรยาน
วิธีกรีฟีส [ 35 ] gssg คือ
พิจารณาหลังจาก GSH ถูกลบออกผ่าน vinylpyridine ซัล .
GSH ถูกกําหนดโดยการลบ gssg จากรวม
กลุ่มเนื้อหา
2.9.3 . ชนิดออกซิเจนที่ใช้งานและการเกิด lipid peroxidation
อัตราการผลิตของ O2 ก็พิจารณาตาม elstner
heupel [ 36 ] และจากการไนไตรท์ก่อตัวจากมีน
ในการปรากฏตัวของออกซิเจน . นได้อ่านที่ 530 nm .
เนื้อหาของ H2O2 ถูกกำหนดโดยการตรวจสอบ a415 ของ
ไทเทเนียม–เปอร์ออกไซด์เชิงซ้อนตามงาน frenkel
[ 37 ] .
สำหรับการวัดการเกิด lipid peroxidation ในใบ , กรดเท่ากับ
( TBA ) ทดสอบที่กำหนดมาโลนัลดีไฮด์ ( MDA )
เป็นผลิตภัณฑ์สุดท้ายของการเกิด lipid peroxidation คือใช้
วัสดุใบ ( 500 มิลลิกรัม ) คือ homogenated ในโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH
7.8 ) โดยแยกเป็นระดับที่ 12 , 000
×
G 20 นาที
1 มิลลิลิตร และน่านถูกบ่มในน้ำเดือด
30 นาทีปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยการวางท่อกับปฏิกิริยา
1 มิลลิลิตรของสารละลายที่มีสารเคมีรักษาข้างต้นบวกกับ TBA 0.65 %
ในน้ำแข็ง อาบ จำนวนระดับ 1500
×
g
10 นาที และการดูดซึมของน่านคืออ่านที่ 532 nm .
ค่าการดูดซึมที่ไม่เฉพาะเจาะจง 600 nm ก็หักออก .
จํานวน 2 คำนวณจากค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์
155 มม. − 1 cm − 1
วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ ผลิตภัณฑ์ซอฟต์แวร์ ( originlab
7.0 , Northampton , MA , USA ) การวัดจำนวน
ตัวอย่างสุ่มจากสี่ ได้แก่ ดันแคน