The lysozyme resistance assays were performed using the
method described by Zago et al. (2011). Enological strains grown
overnight in 10 ml MRS broth at 30 C were pelleted by centrifugation,
washed twice with phosphate buffer (0.1 M, pH 7.0), and
resuspended in 2 ml of Ringer solution (8.5 g/L NaCl, 0.4 g/L KCl,
0.34 g/L hydrated CaCl2, SigmaeAldrich). To simulate the in vivo
dilution by saliva, the bacterial suspensions (108
e109 colonies
forming units, CFU/mL (OD600 ¼ 1)) were inoculated in a sterile
electrolyte solution (SES) (0.22 g/L CaCl2, 6.2 g/L NaCl, 2.2 g/L KCl,
1.2 g/L NaHCO3) in the presence of 100 mg/L of lysozyme (SigmaeAldrich).
Bacterial suspensions in SES without lysozyme were
included as controls. Survival rate was calculated as the percentage
of the CFU/mL after 30 and 120 min compared to the CFU/mL at
time 0. CFU/mL was determined by cell counts in the appropriate
agar media were performed. Assays were carried out in triplicate.
Assays ต้านทาน lysozyme ถูกดำเนินการโดยใช้การวิธีที่อธิบายไว้โดย Zago et al. (2011) สายพันธุ์ enological โตค้างคืนใน 10 ml MRS ซุปที่ 30 C ได้ pelleted โดย centrifugationล้างสองครั้ง ด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (0.1 M ค่า pH 7.0), และresuspended ใน 2 ml ของ Ringer (8.5 g/L NaCl, KCl, 0.4 g/L0.34 บัญชี hydrated CaCl2, SigmaeAldrich) การจำลองแบบในสัตว์ทดลองเจือจาง ด้วยน้ำลาย ฟโรแบคทีเรีย (108e109 อาณานิคมขึ้นหน่วย CFU/mL (OD600 ¼ 1)) มี inoculated ในการฆ่าเชื้ออิเล็กโทรโซลูชั่น (SES) (0.22 g/L CaCl2, 6.2 g/L NaCl, KCl, 2.2 g/L1.2 g/L NaHCO3) ในต่อหน้าของ 100 mg/L ของ lysozyme (SigmaeAldrich)มีบริการแบคทีเรียใน SES ไม่ มี lysozymeรวมเป็นตัวควบคุม อัตราอยู่รอดถูกคำนวณเป็นเปอร์เซ็นต์ของ CFU/mL หลังจาก 30 และ 120 นาทีเมื่อเปรียบเทียบกับ CFU/mL ที่เวลา 0 CFU/mL ถูกกำหนด โดยการตรวจนับเซลล์ในที่เหมาะสมมีดำเนินการสื่อ agar Assays ถูกดำเนินใน triplicate
การแปล กรุณารอสักครู่..