2.5. Whole protein extraction Eight

2.5. Whole protein extraction
Eight millilitres of the enriched cultures of V. parahaemolyticus were inoculated in 792 mL of TSB with 3% NaCl at 37 C until the cultures reached an OD595 of 0.5 to 0.6, approximately 8–9 log CFU/mL. The bacterial cultures were centrifuged and re-suspended in PBS then treated with 10-fold volumes of AEW, SlAEW, NaOCl, and PBS solutions. The resulting suspensions were shaken for 180 s at room temperature. Next, 100 mL of 0.5% Na2S2O3 were added to stop the reaction. After centrifugation, the treated bacterial pellets were resuspended in a lysis buffer (8 M urea, 4% CHAPS and 65 mM DTT) for ultrasonication (Sonicator W-380; Heat Systems Ultrasonics, Farmingdale, NY) at 20 kHz and 145 W for 2 min by intermittent sonic oscillation in an ice bath. Subsequently, 0.1 mm glass beads were added to the suspensions, and cells were lysed twice by using a cell homogeniser (FastPrep-24; MP Biomedicals, LLC, Santa Ana, CA) for 30 s in an ice bath. After centrifugation, the supernatants were collected as whole protein extracts and stored at 80 C for further use. The whole protein extracts were concentrated and desalted using Amicon Ultra-0.5 centrifugal filters (Millipore, Billerica, MA) according to manufacturer instructions. The protein concentration in the extracts was determined using the Bradford method, and BSA was used as a standard.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 การสกัดโปรตีนทั้งแปดมิลลิลิตรของวัฒนธรรมที่อุดมของ V. parahaemolyticus ถูกเชื้อใน 792 มิลลิลิตร TSB มีโซเดียมคลอไรด์ 3% ที่ 37 C จนกระทั่งถึงวัฒนธรรมของ OD595 0.5-0.6 ประมาณ 8-9 log CFU / มิลลิลิตร
วัฒนธรรมแบคทีเรียถูกปั่นและอีกครั้งที่ลอยอยู่ในพีบีเอสได้รับการรักษาแล้วมีปริมาณ 10 เท่าของ AEW, SlAEW, NaOCl และการแก้ปัญหาพีบีเอส สนองผลถูกเขย่า 180 s ที่อุณหภูมิห้อง ถัดไป 100 มิลลิลิตร 0.5% Na2S2O3 ถูกเพิ่มเพื่อหยุดปฏิกิริยา หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ได้รับการรักษาเม็ดแบคทีเรียถูก resuspended ในบัฟเฟอร์สลาย (ที่ 8 M ยูเรีย, 4% CHAPS และ 65 มิลลิ DTT) สำหรับ ultrasonication (Sonicator W-380; ร้อนระบบ Ultrasonics, Farmingdale, นิวยอร์ก) ที่ 20 เฮิร์ทซ์และ 145 W 2 นาทีเสียงสั่นเนื่องในอ่างน้ำแข็ง ต่อมา 0.1 มมลูกปัดแก้วถูกเพิ่มเข้าไปในสารแขวนลอยและเซลล์ถูก lysed ครั้งที่สองโดยใช้เซลล์ homogeniser (ที่ FastPrep-24; MP Biomedicals, LLC ซานตาอานา, CA) สำหรับ 30 วินาทีในการอาบน้ำน้ำแข็ง หลังจากที่หมุนเหวี่ยง supernatants ถูกเก็บเป็นสารสกัดจากโปรตีนทั้งหมดและเก็บไว้ที่ 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลาใช้งานต่อไป สารสกัดโปรตีนทั้งมีความเข้มข้นและ desalted ใช้ Amicon พิเศษ 0.5 กรองแรงเหวี่ยง (คบิลเลริกา, MA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ความเข้มข้นของโปรตีนในสารสกัดถูกกำหนดโดยใช้วิธีแบรดฟอบีเอสเอและถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทรายเย็นทรายเย็นทรายเย็นทรายเย็น