For TEM, the cell pellets were mixe

For TEM, the cell pellets were mixed 1:1 with molten 2% low
gelling temperature agarose (Type VII, A-4018, Sigma), which was
solidified by chilling, then chopped into small pieces (approximately
1 mm3). The sample pieces were post-fixed in 1% aqueous
osmium tetroxide for 2 h then, after buffer washes, dehydrated
through a series of ethanol solutions (10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80,
90, 3  100%). After the third change of 100% ethanol, the ethanol
was replaced with a 1:1 mix of 100% ethanol to LR White medium
grade resin and put on a rotator for 1 h. This was followed by a 1:2
and a 1:3 mix of 100% ethanol to LR White resin and finally 100%
resin, with at least 1 h between each change. The resinwas changed
twice more with fresh 100% resin with periods of at least
8 h between changes. The sample pieces were each transferred into
BEEM embedding capsules with fresh resin and polymerised
overnight at 60
C. Sections approximately 90 nm thick were cut
using an ultra-microtome (Ultracut E, Reichert-Jung) with a glass
knife, collected on formvar/carbon coated copper grids, and stained
sequentially with uranyl acetate and lead citrate. The sections were
examined and imaged in a FEI Tecnai G2 20 Twin transmission
electron microscope at 200 kV.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สำหรับยการ ขี้เซลล์ถูกผสม 1:1 หลอมเหลว 2% ต่ำสุดagarose อุณหภูมิ gelling (ชนิด VII, A-4018 ซิก), ซึ่งเป็นหล่อ โดยถือ แล้ว สับเป็นชิ้นเล็ก ๆ (ประมาณ1 mm3) ชิ้นส่วนตัวอย่างถูกหลังคงอควี% 1ออสเมียมเทโตรไซด์สำหรับ 2 h แล้ว หลังจากบัฟเฟอร์ต่อผิวหน้า อบแห้งผ่านชุดของเอทานอลโซลูชั่น (10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 8090, 3 100%) หลังจากการเปลี่ยนแปลง 100% เอทานอล เอทานอลสามถูกแทนที่ ด้วยเอทานอล 100% LR ขาวปานกลางผสม 1:1เกรดยาง และใส่ในตัวหมุนสำหรับ 1 h นี้ถูกตาม ด้วย 1:2และ 1:3 ผสมเอทานอล 100% ยางขาว LR และสุดท้าย 100%เรซิ่น มีอย่างน้อย 1 ชั่วโมงระหว่างการเปลี่ยนแปลง Resinwas ที่เปลี่ยนแปลงสองสด 100% เพิ่มเติม resin ด้วยเวลาน้อยh 8 ระหว่างการเปลี่ยนแปลง ชิ้นตัวอย่างแต่ละโอนเข้าBEEM ฝังแคปซูล ด้วยเรซินสด และ polymerisedค้างคืนที่ 60 C. ส่วนประมาณ 90 nm หนาถูกตัดมีอัลตร้า-microtome (Ultracut E, Reichert Jung) ด้วยแก้วมีด รวบรวมบนกริดทองแดง formvar/คาร์บอน เคลือบ และสีตามลำดับ ด้วย uranyl acetate และตะกั่วซิเต ส่วนถูกตรวจสอบ และ imaged ในส่งหุย Tecnai G2 20 คู่กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนที่ 200 kV

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สำหรับ TEM เม็ดเซลล์ถูกผสม 1: 1 กับ 2%
หลอมละลายต่ำอุณหภูมิก่อเจลagarose (ชนิดปกเกล้าเจ้าอยู่หัว, A-4018, ซิก)
ซึ่งได้รับการเสริมความมั่นคงโดยหนาวแล้วสับเป็นชิ้นเล็กๆ (ประมาณ
1 mm3) ชิ้นตัวอย่างที่ได้รับการโพสต์การแก้ไขใน 1% น้ำ
tetroxide ออสเมียมเป็นเวลา 2
ชั่วโมงแล้วหลังจากที่ล้างบัฟเฟอร์แห้งผ่านชุดของการแก้ปัญหาเอทานอล(10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80,
90, 3 หรือไม่? 100%) หลังจากที่การเปลี่ยนแปลงในสามของเอทานอล 100%
เอทานอลถูกแทนที่ด้วย1: 1 ผสมเอทานอล 100% ถึงปานกลาง LR
สีขาวเม็ดพลาสติกเกรดและวางบนกระสวยสำหรับ1 ชั่วโมง นี้ตามมาด้วย 1: 2
และ 1: 3 ผสมเอทานอล 100% เป็นเรซิน LR สีขาวและในที่สุดก็ 100%
เรซินที่มีอย่างน้อย 1 ชั่วโมงระหว่างการเปลี่ยนแปลงในแต่ละ resinwas
มีการเปลี่ยนแปลงอีกครั้งกับเรซินสด100% มีระยะเวลาอย่างน้อย
8 ชั่วโมงระหว่างการเปลี่ยนแปลง ชิ้นตัวอย่างแต่ละคนโอนเข้า
BEEM แคปซูลฝังด้วยเรซินสดและ polymerised
ค้างคืนที่ 60 องศาเซลเซียส ส่วนประมาณ 90
นาโนเมตรหนาถูกตัดโดยใช้อัลตร้าmicrotome (Ultracut E, แชร์จัง)
กับแก้วมีดที่รวบรวมไว้ในformvar /
คาร์บอนเคลือบกริดทองแดงและสีตามลำดับด้วยอะซิเตทuranyl และนำซิเตรต ส่วนที่ได้รับการตรวจสอบและถ่ายภาพในเฟ Tecnai G2 20 คู่ส่งกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนที่200 กิโลโวลต์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สำหรับทีม เซล อัตราผสม 1 : 1 กับ 2 %
gelling หล่อต่ำ , อุณหภูมิ ( ประเภท vii , a-4018 , Sigma ) ซึ่ง
ก้อนหล่อแข็ง โดยถือ แล้วสับเป็นชิ้นเล็กๆ ( ประมาณ
1 มม. ) ตัวอย่างชิ้นถูกโพสต์คงที่ในสารละลาย 1 %
2 H tetroxide ออสเมียมแล้วหลังจากล้างบัฟเฟอร์แห้ง
ผ่านชุดของโซลูชั่นเอทานอล ( 10 , 20 , 30 , 40 , 50 , 60 , 70 , 80 , 90
3  100% )หลังจากเปลี่ยนสามของเอทานอล 100 เปอร์เซ็นต์ เอทานอล
ถูกแทนที่ด้วยอัตราส่วนผสมของเอทานอล 100 % ใน LR สีขาวขนาดกลาง
เกรดเรซิน และ ใส่ในเบ้า 1 ชั่วโมง นี้ตามด้วย 1 : 2 และ 1 : 3
ผสมเอทานอล 100 % ใน LR สีขาวเรซินและสุดท้าย 100%
เรซิ่น , กับ อย่างน้อย 1 ชั่วโมงในแต่ละช่วงการเปลี่ยนแปลง การ resinwas เปลี่ยน
อีกสองครั้งด้วยเรซิน 100% สดระยะเวลาอย่างน้อย
8 H ระหว่างการเปลี่ยนแปลงตัวอย่างชิ้นแต่ละคนโอนเข้ามา
9 การฝังแคปซูลด้วยเรซินสด และ polymerised
ค้างคืนที่ 60
C ส่วนประมาณ 90 nm หนาถูกตัด
ใช้ Ultra เครื่องตัดชิ้นเนื้อ ( ultracut E ไรเคิร์ตจอง ) กับมีดแก้ว
เก็บบนกริด formvar / คาร์บอนเคลือบทองแดงและคราบ
ตามลำดับด้วยแอซีเตตยูเรนิล และ นำซิเตรต . ส่วนที่เป็น
ตรวจสอบ และภาพลักษณ์ในเฟย tecnai G2
20 คู่ส่งกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนที่ 200 KV .