Isolation procedure for all plasmid

Isolation procedure for all plasmid sizes from all bacteria (Crosa et al., 1994)
- Centrifuge 2 ml of a culture and wash pellet in 2 ml of the following TE buffer: 0.05 M Tris,
pH 8.0, 0.01 M EDTA. Resuspend in 40 µl of the same TE buffer
- Fill 0.6 ml of freshly prepared lysis buffer (TE buffer used above with 4%SDS, pH adjusted to
12.45) into Eppendorf tube and add the cell suspension to the lysis buffer, mix gently
- Complete lysis by incubating at 37°C for 20-30 min
- Add 30 µl of 2 M Tris, pH 7.0 for neutralization, mix gently
- Add 024 ml of 5 M NaCl for precipitation of chromosomal DNA and protein and incubate on
ice for 4 hrs
- Centrifuge for 10 min and transfer supernatant into new tube for ethanol precipitation (as
usual) or for previous extraction with phenol/chloroform (see Method 2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กระบวนการแยกสำหรับขนาดทั้งหมดของ plasmid จากแบคทีเรีย (Crosa et al. 1994) -เครื่องหมุนเหวี่ยงวัฒนธรรมและล้างเม็ดใน 2 มล.ของบัฟเฟอร์ TE ต่อ 2 มล.: ทริ 0.05 M ค่า pH 8.0, 0.01 M EDTA Resuspend ใน µl 40 ของบัฟเฟอร์ TE เดียว -เติม 0.6 ml ของบัฟเฟอร์ lysis แสนอร่อย (TE บัฟเฟอร์ใช้ข้างต้น 4% SDS ปรับค่า pH 12.45) ใน Eppendorf ท่อ และเพิ่มระงับเซลล์ lysis บัฟเฟอร์ ผสมเบา ๆ -Lysis สมบูรณ์ โดย incubating ที่ 37° C สำหรับ 20-30 นาที -เพิ่ม 30 µl ของทริสเรทติ้ง M 2 ค่า pH 7.0 สำหรับปฏิกิริยาสะเทิน ผสมเบา ๆ -เพิ่ม 5 M NaCl ฝนเปลี่ยนของโครโมโซมดีเอ็นเอและโปรตีน 024 มิลลิลิตร และฟักใน น้ำแข็ง 4 ชั่วโมง -เหวี่ยงสำหรับ 10 นาทีและโอน supernatant เป็นฝนเอทานอล (เป็นหลอดใหม่ ปกติ) หรือ สำหรับสกัดก่อนหน้ากับฟีนอล/คลอโรฟอร์ม (ดูวิธีที่ 2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแยกขั้นตอนสำหรับพลาสมิดขนาดจากแบคทีเรียทั้งหมด ( crosa et al . , 1994 )- เครื่อง 2 ml ของวัฒนธรรมและล้างเม็ด 2 ml ของ TE buffer ต่อไปนี้ : 0.05 M ทริสpH 8.0 , 0.01 M EDTA resuspend 40 µ L ของบัฟเฟอร์เตเหมือนกัน- เติม 0.6 มิลลิลิตรเตรียมสดการสลายบัฟเฟอร์ ( TE buffer ที่ใช้ข้างต้น 4 % SDS , ปรับ pH12.45 ) เป็นหลอดเพนดอร์ฟและเพิ่มเซลล์แขวนลอยเพื่อการสลายบัฟเฟอร์ผสมเบา ๆ- ให้คุณภาพโดยการแช่ที่ 37 องศาซี ประมาณ 20-30 นาที- เพิ่ม 30 µ L 2 เมตรโดย , pH 7.0 สำหรับการผสมเบา ๆ- เพิ่ม 024 ml 5 M NaCl สำหรับการตกตะกอนของโครโมโซมอลดีเอ็นเอและโปรตีน และบ่มเพาะในน้ำแข็ง 4 ชม.- เครื่องปั่นเหวี่ยงสำหรับ 10 นาทีและโอนเข้าใหม่ นำหลอดตกตะกอนเอทานอล ( เป็นปกติ ) หรือก่อนหน้าที่สกัดด้วยคลอโรฟอร์ม ( ดูวิธีฟีนอล / 2 )