Store protected from light.Protein

Store protected from light.
Protein Phosphatase Assay: The PNPP phosphatase activity assay is very simple, non-expensive, and routinely used for the unit determination of all NEB protein phosphatases. PNPP has apparent Km values for protein phosphatases in the range of 0.5 -10 mM (2-5).

The PNPP phosphatase activity is assayed in a reaction mixture (50 μl) containing 50 mM PNPP and a protein phosphatase buffer supplemented with additional components when required. The reaction is initiated by addition of enzyme and quenched after 5-10 minutes by addition of 1 ml of 1 N NaOH (or 1 ml of 0.5 M EDTA for Mn2+-dependent protein phosphatases, Lambda PP and PP1). The amount of product, p-nitrophenol, is determined by reading the absorbance at 405 nm and using a molar extinction coefficient of 18,000 M-1 cm-1 (16,000 M-1cm-1 for 0.5 M EDTA) (1, 3).

One unit of the protein phosphatase activity is defined as the amount of enzyme that hydrolyzes 1 nanomole of PNPP in one minute at 30°C in a total reaction volume of 50 μl under standard reaction condition.

To estimate the protein phosphatase activity accurately it is essential to ensure linear kinetics of dephosphorylation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ร้านค้าที่ได้รับการป้องกันจากแสงทดสอบโปรตีนฟอสฟาเตส: PNPP ฟอสฟาเตสกิจกรรมวิเคราะห์ได้ง่ายมาก ไม่แพง และใช้เป็นประจำสำหรับกำหนดหน่วยของ phosphatases โปรตีน NEB ทั้งหมด PNPP มีค่า Km ชัดเจน phosphatases โปรตีนในช่วง 0.5-10 mM (2-5)กิจกรรม PNPP ฟอสฟาเตสเป็น assayed ในผสมปฏิกิริยา (50 μl) 50 มม. PNPP และบัฟเฟอร์ฟอสฟาเตสโปรตีนเสริม ด้วยคอมโพเนนต์เพิ่มเติมเมื่อจำเป็น เริ่มต้น ด้วยการเพิ่มเอนไซม์ และ quenched หลัง 5-10 นาที โดยเพิ่มเติม 1 มิลลิลิตรของ 1 N NaOH ปฏิกิริยา (1 ml ของ 0.5 M EDTA สำหรับ Mn2 + หรือ -ขึ้นโปรตีน phosphatases, PP แลมบ์ดาและ PP1) ยอดผลิตภัณฑ์ p-nitrophenol เป็นไปตามอ่าน absorbance ที่ 405 nm และใช้สัมประสิทธิ์สูญพันธุ์สบ 18000 M 1 ซม. 1 (16000 M-1 ซ.ม.-1 สำหรับ 0.5 M EDTA) (1, 3) หนึ่งหน่วยของโปรตีนฟอสฟาเตสกิจกรรมถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่ hydrolyzes nanomole 1 ของ PNPP ในหนึ่งนาทีที่ 30° C ปริมาณปฏิกิริยารวมของ μl 50 ภายใต้เงื่อนไขมาตรฐานปฏิกิริยา การประเมินกิจกรรมฟอสฟาเตสโปรตีนอย่างถูกต้อง ได้ให้จลนพลศาสตร์เชิงเส้นของ dephosphorylation

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ร้านค้าที่มีการป้องกันจากแสง.
โปรตีนฟอสฟา Assay: การวิเคราะห์กิจกรรม phosphatase PNPP ง่ายมากที่ไม่ได้มีราคาแพงและใช้เป็นประจำสำหรับความมุ่งมั่นของทุกหน่วย phosphatases โปรตีน NEB PNPP มีค่าชัดเจนกิโลเมตรสำหรับ phosphatases โปรตีนในช่วงของ 0.5 -10 มิลลินี้ (2-5). กิจกรรม phosphatase PNPP เป็น assayed ในผสมปฏิกิริยา (50 ไมโครลิตร) ที่มี 50 มิลลิ PNPP และบัฟเฟอร์ phosphatase โปรตีนเสริมที่มีส่วนประกอบเพิ่มเติมเมื่อ จำเป็นต้องใช้ ปฏิกิริยาจะเริ่มโดยการเพิ่มขึ้นของเอนไซม์และดับหลังจาก 5-10 นาทีโดยนอกเหนือจาก 1 มิลลิลิตร 1 N NaOH (หรือ 1 มล. 0.5 M EDTA สำหรับ MN2 + -dependent phosphatases โปรตีนแลมบ์ดา PP และ PP1) จำนวนของผลิตภัณฑ์, p-nitrophenol จะถูกกำหนดโดยการอ่านการดูดกลืนแสงที่ 405 นาโนเมตรและใช้ค่าสัมประสิทธิ์การสูญเสียฟันกราม 18,000 M-1 ซม-1 (16,000 M-1 ซม-1 0.5 M EDTA) (1, 3) หนึ่งหน่วยของโปรตีนกิจกรรม phosphatase ถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ไฮโดรไลซ์ 1 nanomole ของ PNPP ในหนึ่งนาทีที่ 30 ° C ในปริมาณปฏิกิริยารวม 50 ไมโครลิตรภายใต้เงื่อนไขปฏิกิริยามาตรฐาน. เพื่อประเมินกิจกรรม phosphatase โปรตีนอย่างถูกต้องก็เป็นสิ่งจำเป็น เพื่อให้แน่ใจว่าจลนศาสตร์เชิงเส้นของ dephosphorylation

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ร้านป้องกันแสง โปรตีน phosphatase )
: pnpp ใบกิจกรรมทดสอบง่ายมาก ไม่แพง และใช้สำหรับหน่วยตรวจปริมาณโปรตีนทั้งหมด เอ็นดิ . pnpp ได้ชัดเจน km ค่าลาร์โปรตีนในช่วง 0.5 - 10 มม

( 2-5 )ใบกิจกรรมที่ pnpp เอนไซม์ในปฏิกิริยาผสม ( 50 μ L ) บรรจุ 50 mm pnpp และโปรตีน phosphatase กันชนเสริมด้วยส่วนประกอบเพิ่มเติมเมื่อจำเป็น ปฏิกิริยาที่ริเริ่มโดยเติมเอนไซม์และดับหลัง 5-10 นาที โดยเพิ่ม 1 มิลลิลิตร 1 N NaOH ( หรือ 1 มิลลิลิตร 0.5 M EDTA สำหรับ mn2 - ขึ้นอยู่กับโปรตีนลาร์ , PP และแลมบ์ดา pp1 )จำนวนสินค้า p-nitrophenol ถูกกําหนดโดยการอ่านค่าการดูดกลืนแสงที่ 405 nm และใช้ค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์โมล 18000 m-1 cm-1 ( 16 , 000 m-1cm-1 0.5 M EDTA ) ( 1 , 3 )

หนึ่งหน่วยของโปรตีน phosphatase กิจกรรม หมายถึง ปริมาณของเอนไซม์ที่พบใน hydrolyzes 1 pnpp ใน 1 นาทีที่ 30 ° C ในปริมาตรปฏิกิริยารวม 50 μ L ภายใต้เงื่อนไขของมาตรฐาน

ประมาณโปรตีน phosphatase กิจกรรมได้อย่างถูกต้องมันเป็นสิ่งสำคัญเพื่อให้แน่ใจว่าจลนศาสตร์ของดีฟอ ฟริเลชันเชิงเส้น .