2.8. Fatty acid compositionThe fatt

2.8. Fatty acid composition

The fatty acid profile was determined by fatty acid methyl ester (FAME)/gas chromatography using acetyl chloride as a reagent for transesterification according to the method of Christie (1993). The lipid sample (5 mg) was treated with 1 ml methanol:benzene (3:2, v/v) and 1 ml acetyl chloride: methanol (1:20, v/v). Then 50 μl magaric acid (0.5 μg/μl), used as internal standard, were added. The mixture was heated in a waterbath at 100 °C for 1 h in a nitrogen atmosphere. After cooling to room temperature, 1 ml of hexane and 1 ml of distilled water were added to extract the fatty acid methyl ester. The hexane phase was collected into a vial. All FAMEs were separated and quantified using a gas chromatograph equipped with autosampler and on-flame ionization detector (Shimadzu Model GC-17A, Japan). Separations were accomplished on a 25 m BPx70i capillary column (SGE Australia, Ltd., Australia) with 0.25 mm i.d. and 0.25 μm phase thickness. Column oven temperature was programmed from 150 to 220 °C. The injector and detector were maintained at 250 and 260 °C, respectively. Carrier gas was helium and the make-up gas was nitrogen. Identification of fatty acids was achieved by comparing the relative retention times of FAME peaks from samples with standards from Supelco (Bellefonte, PA, USA).

2.9. Peroxide value

The formation of primary products of lipid oxidation (peroxides) was evaluated on an aliquot of the fat extract according to the method of Low and Ng (1987). Extracted lipid was dissolved in 10 ml chloroform–acetic acid mixture (2:3, v/v), treated with 1 ml of saturated potassium iodide (KI) solution, and kept in the dark for 5 min. The mixture was treated with 20 ml of distilled water and shaken. One ml of starch solution (1.5% w/v) was added as an indicator. The peroxide value (PV) was determined by titrating iodine liberated from potassium iodide with sodium thiosulphate solution. The PV was defined as the reactive oxygen content, expressed as millimoles of free iodine per kg of lipid.

2.10. Determination of thiobarbituric acid-reacive substances

Thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS) assay was performed as described by Buege and Aust (1978). Nham sample (5 g) were homogenised with 25 ml of 0.0375% TBA, 15% TCA, and 0.25 N HCl stock solution. The mixture was heated in boiling water for 10 min, followed by cooling with running water. The mixture was centrifuged at 5500 rpm for 25 min using a centrifuge (Hitachi, Tokyo, Japan). The supernatant was collected and absorbance was read at 532 nm using a spectrophotometer (Cary model, Japan). TBARS was calculated from the standard curve of malondialdehyde and expressed as μg malondialdehyde (MDA)/g sample dry matter.

2.11. Statistical analyses

Data were subjected to analysis of variance (ANOVA). Mean comparison was carried out by Duncan’s multiple range test (Steel & Torrie, 1980).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.8 องค์ประกอบกรดไขมันกำหนดโพรไฟล์ของกรดไขมัน โดยเอส methyl กรดไขมัน (เฟม) / chromatography ก๊าซใช้ acetyl คลอไรด์เป็นรีเอเจนต์เพิ่มตามวิธีของคริสตี้ (1993) ตัวอย่างไขมัน (5 มิลลิกรัม) ถูกรักษา ด้วยเมทานอล: เบนซีนจาก 1 ml (3:2, v/v) และคลอไรด์ acetyl 1 ml: เมทานอล (1:20, v/v) จาก นั้นกรด magaric μl 50 (0.5 μg/μl), ใช้เป็นมาตรฐานภายใน เพิ่ม ส่วนผสมที่ร้อนใน waterbath ที่ 100 ° C สำหรับ h 1 ในบรรยากาศไนโตรเจน หลังจากระบายความร้อนกับอุณหภูมิห้อง 1 ml ของเฮกเซนและ 1 ml ของน้ำกลั่นได้เพิ่มแยกเอส methyl กรดไขมัน โพลีเฟสถูกรวบรวมเข้าเป็นคอนแทค FAMEs ทั้งหมดถูกแยก และ quantified ใช้ chromatograph ก๊าซที่มี autosampler และบนเปลวไฟ ionization จับ (Shimadzu รุ่น GC-17A ญี่ปุ่น) ประโยชน์ที่ได้ 25 m BPx70i คอลัมน์เส้นเลือดฝอย (เป็นโปรแกรมแบบขนานในออสเตรเลีย จำกัด ออสเตรเลีย) ประชาชน 0.25 มม.และความหนาระยะ μm 0.25 อุณหภูมิเตาอบคอลัมน์โปรแกรมจาก 150 ไป 220 องศาเซลเซียส หัวฉีดและเครื่องตรวจจับได้คงที่ 250 และ 260 ° C ตามลำดับ ผู้ขนส่งก๊าซฮีเลียม และไนโตรเจนเป็นแก๊สแต่งหน้า รหัสของกรดไขมันตั้งสำเร็จ โดยการเปรียบเทียบเวลารักษาญาติของยอดชื่อเสียงจากตัวอย่างมาตรฐานจาก Supelco (Bellefonte, PA สหรัฐอเมริกา)2.9 ค่าเปอร์ออกไซด์มีประเมินการก่อตัวของผลิตภัณฑ์หลักของการเกิดออกซิเดชันของไขมัน (peroxides) บนเป็นส่วนลงตัวของสารสกัดไขมันตามวิธีการต่ำและ Ng (1987) แยกไขมันถูกละลายใน 10 ml คลอโรฟอร์มอะซิติกผสมกรด (2:3, v/v), รับ 1 ml ของอิ่มตัวโพแทสเซียมไอโอไดด์ (KI) และก้นครัวสำหรับ 5 นาที ส่วนผสมได้รับน้ำกลั่น 20 ml และเขย่า มีเพิ่มมลหนึ่งของแป้ง (1.5% w/v) เป็นตัวบ่งชี้ ค่าเปอร์ออกไซด์ (PV) ถูกกำหนด โดยไอโอดีน titrating พ้นโพแทสเซียมไอโอไดด์กับโซเดียม thiosulphate โซลูชัน PV ถูกกำหนดเป็นออกซิเจนปฏิกิริยาเนื้อหา แสดงเป็น millimoles ของไอโอดีนฟรีต่อกิโลกรัมของไขมัน2.10 การกำหนด thiobarbituric reacive กรดสารThiobarbituric assay สารปฏิกิริยากรด (TBARS) ที่ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ โดย Buege และบริษัท (1978) ตัวอย่าง Nham (5 กรัม) มี homogenised กับ 25 ml ของ TBA 0.0375%, 15% TCA และ 0.25 N HCl หุ้นโซลูชัน ส่วนผสมมีความร้อนในการต้มน้ำ 10 นาที ตาม ด้วยการระบายความร้อนด้วยน้ำวิ่ง ส่วนผสมถูก centrifuged ที่ 5500 รอบต่อนาทีในนาทีที่ 25 ใช้เครื่องหมุนเหวี่ยง (ฮิตาชิ โตเกียว ญี่ปุ่น) Supernatant ถูกรวบรวม และ absorbance ถูกอ่านที่ 532 nm โดยใช้เครื่องทดสอบกรดด่าง (รุ่นแครีแกรนต์ ญี่ปุ่น) TBARS คำนวณจากเส้นโค้งมาตรฐานของ malondialdehyde และแสดงเป็น μg malondialdehyde (MDA) /g ตัวอย่างแห้งเรื่อง2.11. สถิติวิเคราะห์ข้อมูลถูกต้องวิเคราะห์ผลต่างของ (การวิเคราะห์ความแปรปรวน) เปรียบเทียบหมายถึงถูกดำเนิน โดยของดันแคนหลายช่วงทดสอบ (เหล็กและ Torrie, 1980)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.8 องค์ประกอบของกรดไขมันกรดไขมันที่ถูกกำหนดโดยกรดไขมันเมทิลเอสเตอร์ (FAME) / โคคลอไรด์โดยใช้ก๊าซ acetyl เป็นน้ำยาสำหรับ transesterification ตามวิธีการของคริสตี้ (1993) ตัวอย่างไขมัน (5 มก.) ได้รับการรักษาด้วยเมทานอล 1 มิลลิลิตร: เบนซิน (3: 2, v / v) และ 1 มิลลิลิตร acetyl คลอไรด์: เมทานอล (1:20, v / v) จากนั้น 50 ไมโครลิตรกรด magaric (0.5 ไมโครกรัม / ไมโครลิตร) ใช้เป็นมาตรฐานภายในถูกเพิ่ม ส่วนผสมที่ถูกความร้อนใน Waterbath ที่ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงในบรรยากาศไนโตรเจน หลังจากที่การระบายความร้อนที่อุณหภูมิห้อง 1 มิลลิลิตรของเฮกเซนและ 1 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นที่ถูกเพิ่มเข้าสารสกัดจากกรดไขมันเมทิลเอสเตอร์ เฟสเฮกเซนที่ถูกเก็บรวบรวมลงในขวด FAMEs ทั้งหมดถูกแยกออกและปริมาณการใช้ก๊าซ Chromatograph พร้อมกับฉีดตัวอย่างอัตโนมัติและเปลวไฟตรวจจับไอออนไนซ์ (Shimadzu รุ่น GC-17A, ญี่ปุ่น) แยกสำเร็จใน 25 เมตรคอลัมน์ฝอย BPx70i (SGE ออสเตรเลีย จำกัด , ออสเตรเลีย) 0.25 มมรหัสและ 0.25 ไมโครเมตรความหนาขั้นตอน อุณหภูมิเตาอบคอลัมน์เป็นโปรแกรม 150-220 องศาเซลเซียส หัวฉีดเครื่องตรวจจับและถูกเก็บรักษาไว้ที่ 250 และ 260 องศาเซลเซียสตามลำดับ ก๊าซฮีเลียมเป็นก๊าซและการแต่งหน้าเป็นไนโตรเจน บัตรประจำตัวของกรดไขมันก็ประสบความสำเร็จโดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาญาติของยอดเขา FAME จากตัวอย่างที่มีมาตรฐานจาก Supelco (เบลลาฟอน, PA, สหรัฐอเมริกา). 2.9 ค่าเปอร์ออกไซด์ก่อตัวของผลิตภัณฑ์หลักของการเกิดออกซิเดชันของไขมัน (เปอร์ออกไซด์) ได้รับการประเมินใน aliquot ของสารสกัดจากไขมันตามวิธีการของต่ำและ Ng (1987) ไขมันที่สกัดได้เลือนหายไปใน 10 มล. ผสมกรดอะซิติกคลอโรฟอร์ม (2: 3, v / v), การรักษาด้วย 1 มิลลิลิตรของโพแทสเซียมไอโอไดด์อิ่มตัว (KI) วิธีการแก้ปัญหาและเก็บไว้ในที่มืดเป็นเวลา 5 นาที ส่วนผสมที่ได้รับการรักษาที่มี 20 มล. ของน้ำกลั่นและเขย่า หนึ่งของการแก้ปัญหามล. แป้ง (1.5% w / v) ถูกบันทึกเป็นตัวบ่งชี้ ค่าเปอร์ออกไซด์ (PV) ถูกกำหนดโดยไอโอดีนวิเคราะห์การปลดปล่อยจากไอโอไดด์โพแทสเซียมด้วยสารละลายโซเดียมไซโอ PV ถูกกำหนดเป็นปริมาณออกซิเจนปฏิกิริยาแสดงเป็น millimoles ของไอโอดีนฟรีต่อกิโลกรัมของไขมัน. 2.10 การกำหนด thiobarbituric สารกรด reacive Thiobarbituric สารกรดปฏิกิริยา (TBARS) ทดสอบได้ดำเนินการตามที่อธิบาย Buege และ Aust (1978) ตัวอย่างแหนม (5 กรัม) ถูก homogenised 25 มิลลิลิตร 0.0375% TBA, TCA 15% และ 0.25 N HCl แก้ปัญหาสต็อก ส่วนผสมที่ถูกความร้อนในน้ำเดือด 10 นาทีตามด้วยการระบายความร้อนด้วยน้ำไหล ส่วนผสมที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 5500 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 25 นาทีโดยใช้การหมุนเหวี่ยง (ฮิตาชิกรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) ใสถูกเก็บรวบรวมและการดูดกลืนแสงได้อ่านที่ 532 นาโนเมตรโดยใช้ spectrophotometer (แครีรุ่นญี่ปุ่น) TBARS ที่คำนวณได้จากกราฟมาตรฐานของ Malondialdehyde และแสดงความเป็นไมโครกรัม Malondialdehyde (MDA) / กรัมตัวอย่างแห้ง. 2.11 การวิเคราะห์ทางสถิติข้อมูลภายใต้การวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) การเปรียบเทียบค่าเฉลี่ยได้ดำเนินการโดยดันแคนทดสอบช่วงหลาย ๆ (เหล็กและ Torrie, 1980)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.8 . กรดไขมัน

โปรไฟล์ถูกกำหนดโดยกรดไขมันเมทิลเอสเทอร์ของกรดไขมัน ( ชื่อเสียง ) / แก๊สโครมาโตกราฟีโดยใช้อะเซติลคลอไรด์เป็นสารเคมีสำหรับกระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่นเป็นตามวิธีการของคริสตี้ ( 1993 ) การเก็บตัวอย่าง ( 5 มิลลิกรัม ) เปรียบเทียบกับ 1 มิลลิลิตรเมธานอล : เบนซิน ( 3 : 2 , v / v ) และคลอไรด์อะ 1 ml : เมทานอล ( 1 V / V ) แล้ว 50 μผม magaric acid ( 0.5 g / l μμ )ที่ใช้เป็นมาตรฐาน ภายในมีการเพิ่ม ส่วนผสมจะถูกให้ความร้อนใน waterbath ที่ 100 องศา C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ในบรรยากาศไนโตรเจน หลังจากเย็นเพื่ออุณหภูมิห้อง 1 มิลลิลิตรของน้ำและ 1 มล. ของน้ำเพิ่มเพื่อสกัดเมทิลเอสเทอร์ของกรดไขมัน . ส่วนเฮกเซนระยะคือ เก็บลงในขวด .สารทั้งหมดถูกแยกและปริมาณการใช้ก๊าซโครมาโตกราฟพร้อมกับ autosampler บนเครื่องตรวจจับเปลวไฟและไอออไนเซชัน ( Shimadzu แบบ gc-17a , ญี่ปุ่น ) แยกได้สำเร็จเมื่อ 25 ม. bpx70i แคพิลลารีคอลัมน์ ( SGE ออสเตรเลีย ( ออสเตรเลีย ) 0.25 มม. และความหนา 0.25 เมตร ระยะที่ระบุμ . อุณหภูมิเตาอบคอลัมน์ถูกโปรแกรม 150 - 220 องศาหัวฉีดและเครื่องตรวจจับถูกเก็บรักษาไว้ที่ 250 260 องศาองศาเซลเซียส ตามลำดับ บริษัทขนส่งแก๊สฮีเลียมและแต่งหน้าแก๊สไนโตรเจน การจำแนกชนิดของกรดไขมันพบว่าโดยการเปรียบเทียบเทียบเวลากักยอดชื่อเสียงจากตัวอย่างที่มีมาตรฐานจาก supelco ( bellefonte , PA , USA ) .

2.9 .

ค่าเปอร์ออกไซด์การก่อตัวของผลิตภัณฑ์หลักของปฏิกิริยาออกซิเดชันของลิพิด ( peroxides ) ประเมินในการเทศนาของตามวิธีการสกัดไขมันต่ำและ NG ( 1987 ) สกัดไขมันละลายในคลอโรฟอร์ม และ กรดผสม 10 ml ( 2 : 3 v / v ) , การรักษาด้วย 1 มิลลิลิตร และโพแทสเซียมไอโอไดด์ ( Ki ) โซลูชั่น และเก็บไว้ในที่มืดเป็นเวลา 5 นาทีส่วนผสมที่ได้รับการรักษาด้วย 20 มล. น้ำกลั่นและหวั่นไหว 1 มิลลิลิตรของสารละลายแป้ง ( 1.5 % w / v ) เข้ามาเป็นตัวบ่งชี้ ค่าเปอร์ออกไซด์ ( PV ) ถูกกำหนดโดย titrating ไอโอดีนอิสระจากโพแทสเซียมไอโอไดด์ด้วยสารละลายโซเดียมไธโอซัลเฟต . PV นี้ถูกกำหนดไว้เป็นรีแอกทีฟออกซิเจนเนื้อหา แสดงเป็น millimoles ไอโอดีนฟรีต่อกิโลกรัมของลิปิด

2.10 .การหาปริมาณเท่ากับกรด reacive สาร

เท่ากับกรดปฏิกิริยาสาร ( ปกติ ) โดยได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดยและ buege AUST ( 1978 ) แหนมตัวอย่าง ( 5 กรัม ) homogenised 25 มิลลิลิตร 0.0375 % TBA , 15 % TCA และ 0.25 N HCl หุ้นโซลูชั่น ส่วนผสมจะถูกให้ความร้อนในน้ำเดือด 10 นาที ตามด้วย ระบายความร้อนด้วยน้ำไหลส่วนผสม คือ ระดับที่ 5 , 500 รอบต่อนาที 25 นาทีใช้เครื่องหมุนเหวี่ยง ( Hitachi , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) การรวบรวมและนำค่ามาอ่านที่ 532 นาโนเมตรโดยใช้ Spectrophotometer ( แครี่ แบบญี่ปุ่น ) คำนวณได้จากเส้นโค้งปกติมาตรฐานของมาลอนไดอัลดีไฮด์และแสดงเป็นมาลอนไดอัลดีไฮด์ ( MDA ) μกรัม / กรัมน้ำหนักแห้งตัวอย่าง

2.11 . การวิเคราะห์สถิติ

ข้อมูลถูกวิเคราะห์ความแปรปรวน ( ANOVA ) หมายถึงการกระทำโดย Duncan ' s Multiple Range Test ( เหล็ก& torrie , 1980 )