MATERIALS AND METHODSHuman B cell B

MATERIALS AND METHODS
Human B cell Burkit Lymphoma Raji cells (purchased from Pasteur Institute of Iran) were cultured in RPMI-1640 medium containing 10% calf serum. Then the cells were maintained at 37° C in a 5% CO2 air incubator and with passage every day. Cell culture was done under sterille conditions and below laminar-hood. With removal of Raji cells from flask stock through the use of trypan blue 0.4% in a suspension of Raji cells,viability was more than 97% (viability (%)= live cells/live cells and dead cells x 100).
The other steps were the removal of 75μl (15000 cell) from the suspension, transfering it to 96-well plates. Then 10μl of different Zn concentrations (10 nM -500μM) were added to all wells except the controls. Under below laminar-hood and sterille conditions, the plates were shaken and mixed well. Then the cells were maintained at 37° C in a 5% CO2 air incubator. At the end of incubation times (12- 72h), viability and cell proliferation were determined using both the trypan blue exclusion dye and MTT assay2. Also, cell morphology was evaluated by Wright-Gimsa staining.
Cytotoxic assay by MTT reduction
This was carried out using the MTTassay described by Mosmann et al (11). According to the test principles, the assay was based on the clevage of the tetrazolium salt (MTT), in the
presence of an electron coupling reagent,by active mitochondria.The water-insoluble formazan salt produced has to be solubilized in an additional step. Cells grown in a 96-well plate, were incubated with the MTT solution for approximately 4 hours. After the incubation period, a water-insoluble formazan dye was quantitaed using a spectorphotometer (ELISA reader).The revealed absorbance was directly correlated to the cell number.
Procedure
After the end-points of incubation time (12-72 hours) at 37° C and 5% CO2, the Raji cells were loaded with 10 freshly prepared and Millipore filtered MTT (5mg/ml PBS) and incubated for 4 hours at 25° C. After 4 hours of incubation to each well, 100 μl of isopropanol were added, and the O.D (optimal density) of product was evaluated in an ELISA reader at 540 nm wevelengh after 15 minutes (viability (%)=O.D. TESE/O.D. CONTROL X 100) (12,13).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการบีเซลล์ Raji คอลลา Burkit เซลล์มนุษย์ (ซื้อจากสถาบันปาสเตอร์ประเทศอิหร่าน) มีอ่างใน RPMI 1640 ปานกลางมีลูก 10% ซีรั่ม แล้ว เซลล์ได้รักษาที่ 37° C ในการบ่มเพาะวิสาหกิจใน 5% CO2 อากาศ และกาลทุกวัน เพาะเลี้ยงเซลล์สำเร็จภาย ใต้เงื่อนไข sterille และ ใต้ laminar ฮูด เอาเซลล์ Raji จากหนาวหุ้นโดยใช้ trypan blue 0.4% ระงับเซลล์ Raji ชีวิตมีมากกว่า 97% (ชีวิต (%) =สดเซลล์/สดเซลล์และเซลล์ตาย x 100)ขั้นตอนอื่น ๆ ถูกเอาของ 75μl (15000 เซลล์) จากการระงับ โอนให้แผ่น 96-ดี แล้ว 10μl ของความเข้มข้นแตกต่างกันของ Zn (10 nM-500μM) ถูกเพิ่มเข้ามาในบ่อทั้งหมดยกเว้นตัวควบคุม ภายใต้ด้านล่าง laminar ฮูดและ sterille เงื่อนไข แผ่นถูกเขย่า และผสมกัน แล้ว เซลล์ได้รักษาที่ 37° C ในการบ่มเพาะวิสาหกิจอากาศ CO2 5% เมื่อสิ้นสุดเวลาบ่ม (12 - 72h), ชีวิตและการแพร่หลายของเซลล์ถูกกำหนดใช้ย้อมแยก trypan blue และ MTT assay2 ยัง สัณฐานวิทยาเซลล์ถูกประเมิน โดยย้อมสีไรท์-Gimsaทดสอบ cytotoxic โดยลด MTTนี้ถูกดำเนินโดยใช้ MTTassay ที่อธิบายไว้โดย Mosmann et al (11) ตามหลักการทดสอบ การวิเคราะห์เป็นไปตาม clevage เกลือ tetrazolium (MTT), ในการสถานะของการอิเล็กตรอนคลัปรีเอเจนต์ โดย mitochondria ที่ใช้งานอยู่ Formazan ไม่ละลายน้ำเกลือที่ผลิตได้จะ solubilized ในขั้นตอนเพิ่มเติม เซลล์ที่โตในจานดี 96 มี incubated ด้วยโซลูชัน MTT ประมาณ 4 ชั่วโมง หลังจากระยะฟักตัว ย้อม formazan ไม่ละลายน้ำถูก quantitaed โดยใช้ spectorphotometer (ELISA อ่าน) Absorbance เปิดเผยถูกตรง correlated กับจำนวนเซลล์ขั้นตอนการหลังจาก end-points (12-72 ชั่วโมง) เวลาบ่มที่ 37° C และ 5% CO2 เซลล์ Raji ถูกโหลด ด้วยสดเตรียม 10 และมากกรอง MTT (5mg/ml PBS) และ incubated ใน 4 ชั่วโมงที่ 25 องศาเซลเซียส หลังจาก 4 ชั่วโมงของคณะทันตแพทยศาสตร์ไปละดี 100 μl ของ isopropanol เพิ่ม และมีประเมินในการอ่าน ELISA ที่ 540 nm wevelengh O.D (ความหนาแน่นสูงสุด) ของผลิตภัณฑ์หลังจาก 15 นาที (ชีวิต (%) = O.D. TESE/O.D การควบคุม X 100) (12,13)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการของมนุษย์ B เซลล์มะเร็งต่อมน้ำเหลืองเซลล์ Burkit ราจี (ซื้อจากสถาบันปาสเตอร์อิหร่าน) เพาะเลี้ยงในอาหาร RPMI-1640 ซีรั่มที่มีลูกวัว 10%
จากนั้นเซลล์ถูกเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในศูนย์บ่มเพาะ CO2 อากาศ 5% และมีเนื้อเรื่องทุกวัน การเพาะเลี้ยงเซลล์ได้ทำภายใต้เงื่อนไขดังต่อไปนี้ sterille และเครื่องดูดควัน-ราบเรียบ กับการกำจัดของเซลล์ราจีจากสต็อกขวดผ่านการใช้ Trypan สีฟ้า 0.4% ในการระงับของเซลล์ราจีที่มีชีวิตเป็นมากกว่า 97% (มีชีวิต (%) = เซลล์สด / เซลล์ที่อยู่อาศัยและเซลล์ที่ตายแล้ว x 100).
ขั้นตอนอื่น ๆ มีการกำจัดของ75μl (15,000 เซลล์) จากการระงับการถ่ายโอนไปยังแผ่น 96 หลุม จากนั้น10μlความเข้มข้นของธาตุสังกะสีที่แตกต่างกัน (10 นาโนเมตร-500μM) ถูกเพิ่มเข้าไปในหลุมทั้งหมดยกเว้นการควบคุม ภายใต้ฝากระโปรงด้านล่าง-ราบเรียบและเงื่อนไข sterille แผ่นที่ถูกเขย่าและเข้ากันดี จากนั้นเซลล์ที่ถูกเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสใน 5% CO2 ศูนย์บ่มเพาะทางอากาศ ในตอนท้ายของเวลาการบ่ม (12 72H) ที่มีศักยภาพและเพิ่มจำนวนเซลล์ได้รับการพิจารณาโดยใช้สีย้อมยกเว้นสีฟ้า Trypan และ MTT assay2 นอกจากนี้ลักษณะทางสัณฐานวิทยาเซลล์ถูกประเมินโดยการย้อมสีไรท์ Gimsa.
การทดสอบพิษจากการลดลง MTT
นี้ได้รับการดำเนินการโดยใช้ MTTassay อธิบายโดย Mosmann et al, (11) ตามหลักการการทดสอบการทดสอบอยู่บนพื้นฐานของ clevage เกลือ tetrazolium ที่ (MTT)
ในการปรากฏตัวของสารอิเล็กตรอนมีเพศสัมพันธ์โดยformazan เกลือที่ไม่ละลายน้ำ mitochondria.The ผลิตที่ใช้งานจะต้องมีการละลายในขั้นตอนเพิ่มเติม เซลล์ที่ปลูกในแผ่น 96 ดีถูกบ่มกับการแก้ปัญหา MTT ประมาณ 4 ชั่วโมง หลังจากระยะฟักตัวเป็นสีย้อม formazan ไม่ละลายน้ำได้ quantitaed ใช้ spectorphotometer (อ่านวิธี ELISA) เปิดเผยการดูดกลืนแสงได้โดยเริ่มต้นมีความสัมพันธ์โดยตรงกับจำนวนเซลล์.
ขั้นตอนหลังจากที่จุดสิ้นสุดของเวลาการบ่ม (12-72 ชั่วโมง) ที่ 37 ° ซีและ 5% CO2 เซลล์ราจีถูกเต็มไปด้วย 10 ที่เตรียมสดใหม่และคกรอง MTT (5mg / ml พีบีเอส) และบ่มเป็นเวลา 4 ชั่วโมง 25 องศาเซลเซียสหลังจาก 4 ชั่วโมงของการบ่มแต่ละดี 100 ไมโครลิตรของ isopropanol ถูกเพิ่ม และ OD (ความหนาแน่นดีที่สุด) ของผลิตภัณฑ์ได้รับการประเมินในการอ่านวิธี ELISA ที่ 540 นาโนเมตร wevelengh หลังจาก 15 นาที (มีชีวิต (%) = OD TESE / OD ควบคุม X 100) (12,13)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการของบี - เซลล์มะเร็งต่อมน้ำเหลือง
burkit ราจิเซลล์ ( ซื้อจากสถาบันปาสเตอร์ของอิหร่าน ) เพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มี rpmi-1640 10% คาล์ฟซีรั่ม จากนั้นเซลล์ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 37 ° C ใน 5% CO2 เครื่องฟักไข่ด้วยผ่านทุกวัน การเพาะเลี้ยงเซลล์กระทำภายใต้เงื่อนไข sterille ด้านล่างราบเรียบและเครื่องดูดควันกับการกำจัดราจิเซลล์จากขวดหุ้นผ่านการใช้ไตรแพนสีฟ้า 0.4% ในช่วงล่างของราจิเซลล์ของมากกว่า 97% ( ความมีชีวิต ( % ) = เซลล์มีชีวิตอยู่ / อาศัยอยู่ในเซลล์ และเซลล์ที่ตาย x 100 ) .
ขั้นตอนอื่น ๆ คือ การกำจัด 75 μ L ( 15 , 000 เซลล์ ) จาก การถ่ายโอนไปยัง 96 ด้วยแผ่นแล้ว 10 μลิตรความเข้มข้นสังกะสีที่แตกต่างกัน ( 10 nm - 500 μ M ) ถูกเพิ่มทุกบ่อ นอกจากการควบคุม ภายใต้เงื่อนไขด้านล่าง เครื่องดูดควันแบบ sterille , แผ่นสั่นสะเทือนและผสมดี จากนั้นเซลล์ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 37 ° C ใน 5% CO2 เครื่องตู้ฟักไข่ ในตอนท้ายของการบ่มครั้ง ( 12 - 72h )ความมีชีวิตและการใช้โทรศัพท์มือถือเป็นทั้งไตรแพนสีฟ้า ยกเว้นสีและ MTT assay2 . นอกจากนี้ รูปร่างของเซลล์ที่ประเมินโดยไรท์ gimsa staining

ลดพิษจากยาโดยการใช้ mttassay อธิบายโดย mosmann et al ( 11 ) ตามหลักการทดสอบ , การทดสอบบนพื้นฐานของ clevage ของ tetrazolium เกลือ ( MTT ) ใน
สถานะของอิเล็กตรอนคู่รีเอเจนต์ โดยงาน mitochondria ที่ไม่ละลายน้ำ เกลือที่ผลิตได้จะสร้างปฏิบัติการในขั้นตอนเพิ่มเติม เซลล์ที่ปลูกใน 96 ดีจานถูกบ่มกับวิธี MTT ประมาณ 4 ชั่วโมง หลังจากระยะเวลาย้อมปฏิบัติการไม่ละลายน้ำเป็น quantitaed ใช้ spectorphotometer ( ELISA Reader )พบการดูดกลืนแสงมีความสัมพันธ์โดยตรงกับเซลล์หมายเลข .

หลังจากสิ้นสุดขั้นตอน จุดของเวลาในการบ่ม ( 12-72 ชั่วโมง ) ที่อุณหภูมิ 37 ° C และคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์ ราจิเซลล์ถูกโหลด ด้วย 10 มิลลิกรองและเตรียมสด ( 5 mg / ml MTT PBS ) และบ่มเป็นเวลา 4 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 25 องศา หลังจาก 4 ชั่วโมง บ่มกัน 100 μ L ของไอโซโพรพานอลเพิ่มขึ้น และ OD ( ความหนาแน่นสูงสุด ) ของผลิตภัณฑ์ที่ประเมินในการอ่าน ) 540 nm wevelengh หลังจาก 15 นาที ( ความมีชีวิต ( % ) = OD เทเซ่ / OD ควบคุม x 100 ) ( 12 , 13 ‘ )