2. Materials and methods2.1. FishMo

2. Materials and methods
2.1. Fish
Mozambique tilapia (Oreochromis mossambicus) were
maintained in outdoor 5000L tanks supplied with a continuous
flow of FW (0ppt) under normal photoperiod (14h:10h, light :
dark) at 25±2 °C at the Hawaii Institute of Marine Biology,
University of Hawaii. Some fish were acclimated to SW
(35 ppt) for more than 4 weeks prior to the start of the
experiment. They were fed 2% body weight of Silver Cup Trout
Feed (Nelson and Sons, Murray, UT) once a day. All
experiments were conducted in accordance with the principles
and procedures approved by the Institutional Animal Care and
Use Committee, University of Hawaii.
2.2. Experimental protocols
Fifty-four fish of both sexes, weighing 50–100 g, were
divided into three salinities, FW, SW, and 200% SW. Each group
was further divided into three temperatures, 20, 28, and 35 °C
(n=6 for a total of 9 treatments). Thirty-six fish acclimated to
either FW or SW were transferred to 6 separate 75 L aquaria (3
for FW and 3 for SW) with aeration and filtration (Whisper
Power Filter, Tetra, Oakland, NJ, USA) and kept for 4 days. On
day 4, the temperature of each aquarium was adjusted to 20, 28
or 35 °C (±1 °C) over the course of 24 h. A 250W automatic
Ebo-Jäger heater was used to maintain the temperature at 28 and
35 °C.Water temperature was maintained at 20 °C by placing the
aquaria in a water bath kept at 20 °C by a recirculating cooler
(Isotemp Refrigerated Circulator, model 910, Fisher Scientific).
To acclimate to 200% SW, 18 SW-acclimated fish were
transferred to 100 L recirculating tank, and artificial sea salt
(Instant Ocean, Aquarium Systems) was added at a rate of 10%
every other day until the salinity reached 200% SW. Fish were
maintained in the same tank at 25±2 °C for additional 7 days.
They were transferred to 75 L tanks and kept for 4 days, and then
the temperature of each tank was adjusted to 20, 28 or 35 °C over
the course of 24 h. Fish acclimated to 35 °C suffered 100%
mortality at all salinities. Thus, the period over which the
temperature was increased was extended to 3 days, and no
mortality was observed. During the final acclimation for 7 days,
one fish died in FW at 28 °C and one in 200% SW at 28 °C.
Fish were maintained under experimental conditions for
7 days. Upon termination, they were anesthetized with 2-
phenoxyethanol (0.2 mL/L), and blood was collected from the
caudal vasculature by a needle and syringe treated with
ammonium heparin (200 U/mL, Sigma-Aldrich, St. Louis,
MO, USA). Animals were rapidly decapitated, and gill
filaments were removed for Na+, K+-ATPase assays. Brain,
kidney, skeletal muscle and liver samples were also excised and

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. ปลาโมซัมบิกปลานิล (ปลาหมอเทศ) ได้รักษาในถัง 5000L กลางแจ้งที่ให้มาพร้อมกับตัวอย่างต่อเนื่องกระแสของ FW (0ppt) ภายใต้ช่วงแสงปกติ (14h: 10 h แสง:มืด) ที่ 25±2 ° C ที่ฮาวายสถาบันของชีววิทยาทางทะเลมหาวิทยาลัยฮาวาย ปลาถูก acclimated เพื่อ SW(35 ppt) มากกว่า 4 สัปดาห์ก่อนเริ่มการทดลอง พวกเขาได้เลี้ยงน้ำหนัก 2% ของเงินถ้วยเทราต์อาหาร (เนลสันและบุตร เมอร์เรย์ UT) วันละครั้ง ทั้งหมดได้ดำเนินการทดลองตามหลักการและขั้นตอนอนุมัติ โดยดูแลสัตว์สถาบัน และใช้กรรมการ มหาวิทยาลัยฮาวาย2.2 การทดลองการใช้โพรโทคอลได้ห้าสิบสี่ปลาของทั้งสองเพศ น้ำหนัก 50-100 gแบ่งออกเป็น 3 salinities, FW, SW และ 200% SW. แต่ละกลุ่มถูกแบ่งเป็น 3 อุณหภูมิ 20, 28 และ 35 ° C(n = 6 สำหรับรักษา 9) ปลาสามสิบหก acclimated เพื่อFW หรือ SW ถูกโอนย้ายไป 6 แยก 75 L อควาเรีย (3สำหรับ FW และ 3 สำหรับ SW) aeration และเครื่องกรอง (Whisperพลังงานตัวกรอง Tetra โอ๊คแลนด์ NJ สหรัฐอเมริกา) และเก็บไว้ 4 วัน บนวันที่ 4 อุณหภูมิของสัตว์แต่ละถูกปรับ 20, 28หรือ 35 ° C (±1 ° C) ในช่วง 24 ชม 250W แบบอัตโนมัติEbo Jäger ฮีตเตอร์ใช้ในการรักษาอุณหภูมิที่ 28 และ35 องศาเซลเซียส มีรักษาที่ 20 ° C อุณหภูมิน้ำ โดยทำการอควาเรียในห้องน้ำที่เก็บไว้ที่ 20 ° C โดยเย็น recirculating(Isotemp Refrigerated หมุนเวียน รุ่น 910 วิทยาศาสตร์ Fisher)การ acclimate 200% SW ปลา SW acclimated 18 ได้โอนย้ายไป 100 L recirculating ถัง และเกลือทะเลเทียม(มหาสมุทรทันที ระบบพิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำ) เพิ่มในอัตรา 10%ทุกวันจนเค็มที่ถึง 200% ปลา SW. ได้รักษาไว้ในถังเดียวกันที่ 25±2 ° C เพิ่มเติม 7 วันพวกเขาถูกโอนย้ายไปยังถัง 75 L และเก็บไว้ 4 วัน และอุณหภูมิของแต่ละถังถูกปรับ 20, 28 หรือ 35 ° C มากกว่าหลักสูตรของ 24 h. ปลา acclimated 35 ° C รับความเดือดร้อน 100%การตายที่ salinities ทั้งหมด ดังนั้น รอบระยะเวลาที่การอุณหภูมิเพิ่มขึ้นถูกขยาย 3 วัน และไม่การตายที่ถูกสังเกต ระหว่าง acclimation สุดท้าย 7 วันหนึ่งปลาตายใน FW ที่ 28 ° C และหนึ่งใน 200% SW ที่ 28 องศาเซลเซียสปลาถูกเก็บรักษาภายใต้เงื่อนไขทดลองวันที่ 7 เมื่อมีการเลิกจ้าง พวกเขามีด้วยกับ 2-phenoxyethanol (0.2 mL/L), และเลือดรวบรวมจากการรับ caudal vasculature เข็มและเข็มเฮพารินแอมโมเนีย (200 U/mL ซิก-Aldrich, St. Louisด สหรัฐอเมริกา) สัตว์ถูก decapitated อย่างรวดเร็ว และเหงือกfilaments ถูกเอาออกสำหรับ Na + K + -ATPase assays สมองไต กล้ามเนื้ออีก และตัวอย่างตับก็ยัง excised และ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 ปลา
โมซัมบิกปลานิล (ปลาหมอเทศ) ได้รับการ
เก็บรักษาไว้ในถังน้ำกลางแจ้ง 5000L มาพร้อมกับต่อเนื่อง
ไหลของ FW (0ppt) ภายใต้แสงปกติ (14h: 10h แสง:
เข้ม) ที่ 25 ± 2 ° C ที่ฮาวายสถาบันชีววิทยาทางทะเล
มหาวิทยาลัย ฮาวาย ปลาบางคนปรับตัว SW
(35 พีพีที) มานานกว่า 4 สัปดาห์ก่อนที่จะเริ่ม
การทดลอง พวกเขาได้รับการเลี้ยงดูน้ำหนักตัว 2% ของเงินถ้วยปลาเทราท์
ฟีด (เนลสันและบุตรเมอเรย์, ยูทาห์) วันละครั้ง ทั้งหมด
ทดลองดำเนินการตามหลักการ
และขั้นตอนการอนุมัติจากการดูแลสัตว์สถาบันและ
ใช้คณะกรรมการมหาวิทยาลัยฮาวาย.
2.2 โปรโตคอลการทดลอง
ปลาห้าสิบสี่ของทั้งสองเพศมีน้ำหนัก 50-100 กรัมถูก
แบ่งออกเป็นสามความเค็ม, FW, SW และ 200% SW แต่ละกลุ่มจะ
ถูกแบ่งออกเป็นสามอุณหภูมิ, 20, 28 และ 35 ° C
(n = 6 รวมเป็น 9 การรักษา) ปลาสามสิบหกปรับตัวได้
อย่างใดอย่างหนึ่งหรือ FW SW ถูกย้ายไปตู้ 6 แยก 75 L (3
สำหรับ FW และ 3 สำหรับ SW) กับอากาศและการกรอง (กระซิบ
กรองพาวเวอร์, Tetra, โอ๊คแลนด์, นิวเจอร์ซีย์สหรัฐอเมริกา) และเก็บไว้เป็นเวลา 4 วัน เมื่อวันที่
4 วันที่อุณหภูมิของแต่ละพิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำที่มีการปรับถึง 20, 28
หรือ 35 ° C (± 1 ° C) ในช่วง 24 ชั่วโมง 250W อัตโนมัติ
เครื่องทำ Ebo-Jägerถูกใช้ในการรักษาอุณหภูมิของวันที่ 28 และ
35 °อุณหภูมิ C.Water ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 20 ° C โดยการวาง
ตู้ปลาในอ่างน้ำเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียสโดยเย็นหมุนเวียน
(Isotemp เย็นปั่น, รุ่น 910, ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์).
เพื่อปรับถึง 200% SW, 18 ปลา SW-acclimated ถูก
ถ่ายโอนไปยัง 100 L ถังหมุนเวียนและเกลือทะเลเทียม
(มหาสมุทรทันทีพิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำระบบ) ถูกเพิ่มเข้ามาในอัตรา 10%
ทุกวัน ๆ จน ความเค็มถึง 200% SW ปลาที่ถูก
เก็บรักษาไว้ในถังเดียวกันใน 25 ± 2 ° C เป็นเวลา 7 วันเพิ่มเติม.
พวกเขาจะถูกโอนไปยังถัง 75 ลิตรและเก็บไว้เป็นเวลา 4 วันและจากนั้น
อุณหภูมิของแต่ละถังมีการปรับถึง 20, 28 หรือ 35 องศาเซลเซียสในช่วง
หลักสูตรของ 24 ชั่วโมง ปลาปรับตัวถึง 35 ° C ได้รับความเดือดร้อน 100%
อัตราการตายที่ความเค็มทั้งหมด ดังนั้นระยะเวลามากกว่าที่
อุณหภูมิเพิ่มขึ้นก็ขยายไปถึง 3 วันและไม่มี
การตายพบว่า ในระหว่างการปรับตัวครั้งสุดท้ายเป็นเวลา 7 วัน,
ปลาเสียชีวิตในวันที่ 28 FW องศาเซลเซียสและเป็นหนึ่งใน SW 200% วันที่ 28 ° C.
ปลาได้รับการดูแลภายใต้เงื่อนไขการทดลองสำหรับ
7 วัน เมื่อมีการยกเลิกพวกเขาถูกอสัญญีกับ 2
Phenoxyethanol (0.2 มิลลิลิตร / ลิตร) และเลือดที่เก็บมาจาก
เส้นเลือดหางโดยเข็มและเข็มฉีดยารับการรักษาด้วย
ยา heparin แอมโมเนียม (200 U / มิลลิลิตร Sigma-Aldrich, เซนต์หลุยส์,
มิสซูรี่, สหรัฐอเมริกา) สัตว์ที่ถูกประหารชีวิตอย่างรวดเร็วและเหงือก
เส้นใยถูกลบออก Na + K + ATPase นาการตรวจ สมอง
ไตกล้ามเนื้อโครงร่างและตัวอย่างตับก็พอและ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . ปลา
โมซัมบิกปลานิลปลาหมอเทศ )
รักษาในถัง 5000l สระพร้อมกับการไหลอย่างต่อเนื่อง
ของ FW ( 0ppt ) ภายใต้แสงปกติ ( 14h : 10h แสง :
มืด ) ที่ 25 ± 2 ° C ที่สถาบันชีววิทยาทางทะเล
, มหาวิทยาลัยฮาวาย บางปลาได้รับ acclimated SW
( 35 ppt ) มากกว่า 4 สัปดาห์ก่อนที่จะเริ่มต้นของ
ทดลองพวกเขาได้รับ 2% น้ำหนักเงินถ้วยปลาเทราท์
อาหาร ( เนลสัน และบุตรชาย เมอร์เรย์ , UT ) วันละครั้ง ทั้งหมด
การทดลองสอดคล้องกับหลักการและขั้นตอนการอนุมัติจากสถาบัน

ใช้และดูแลสัตว์คณะกรรมการมหาวิทยาลัย ฮาวาย
2.2 . ทดลองระบบ
ห้าสิบสี่ปลาทั้งสองเพศ หนัก 50 – 100 g ,
แบ่งออกเป็นสามระดับความเค็ม FW , SW , และ 200% SW .แต่ละกลุ่ม
ยังแบ่งออกเป็น 3 อุณหภูมิ , 20 , 28 และ 35 ° C
( n = 6 รวม 9 การรักษา ) สามสิบหกปลา acclimated
ให้ FW หรือ SW ถูกย้าย 6 แยก 75 ลิตร วาเรีย ( 3
สำหรับ FW 3 สำหรับ SW ) กับอากาศและการกรอง ( กระซิบ
พลังกรอง , Tetra , โอ๊คแลนด์ , NJ , USA ) และเก็บไว้เป็นเวลา 4 วัน บน
4 วัน อุณหภูมิของแต่ละพิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำ ปรับ 20 , 28
หรือ 35 ° C ( ± 1 ° C ) ในช่วงเวลา 24 ชั่วโมง แบบอัตโนมัติ และ เยอรมัน ebo-j 250W
ฮีตเตอร์ที่ใช้ในการรักษาอุณหภูมิที่ 28 และ 35 องศา
c.water อุณหภูมิไว้ที่ 20 องศา C โดยการวาง
สัตว์น้ำในอ่างน้ำไว้ที่ 20 องศา C โดยหมุนเวียนเย็น
( isotemp เย็นปั่น รุ่น 910 ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ ) .
เพื่อ acclimate 200% SW 18 SW ให้ปลา
ย้ายถัง 100 ลิตรหมุนเวียน และเกลือทะเลเทียม
( ระบบตู้ปลาทะเล , Instant ) คือเพิ่มในอัตรา 10 %
วันเว้นวันจนความเค็มถึง 200% SW . ปลา
รักษาในถังเดียวกันที่ 25 ± 2 ° C เป็นเวลา 7 วัน เพิ่มเติม พวกเขาย้ายไป 75 L
รถถังและเก็บไว้ 4 วันแล้ว
อุณหภูมิของถังแต่ละปรับ 20 , 28 หรือ 35 ° C มากกว่า
หลักสูตร 24 ชั่วโมง ปลา 35 ° C ได้รับ acclimated อัตราการตาย 100%
ในทุกระดับความเค็ม . ดังนั้น ช่วงที่
อุณหภูมิเพิ่มขึ้นระยะเวลา 3 วัน และไม่มี
ตาย ) ใน acclimation สุดท้ายเป็นเวลา 7 วัน
ปลาหนึ่งตายใน FW ที่ 28 ° C และหนึ่งใน 200 % SW ที่ 28 องศา C .
ปลายังคงภายใต้เงื่อนไขการทดลอง
7 วัน เมื่อนายจ้างพวกเขาถูกวางยาสลบด้วย 2 -
phenoxyethanol ( 0.2 ml / l ) และเลือดที่เก็บจาก
vasculature หาง โดยเข็มและกระบอกฉีดยา ( รักษาด้วย
แอมโมเนีย 200 U / ml ซิกม่า Aldrich เซนต์หลุยส์ ,
โม , USA ) สัตว์อย่างรวดเร็ว ตัดหัว และเหงือก
ไส้ออกสำหรับ Na , K - ATPase ยีน . สมอง
ไตกล้ามเนื้อลายและตัวอย่างตับก็ตัดและ