High concentrations of microorganis

High concentrations of microorganisms can have a substantial inhibiting effect on growth of pathogens in pork meat and in other muscle foods (Cornu et al., 2011; Vermeiren et al., 2006). In relation to exposure and risk assessments it is important to take into account the quantitative effect of these microbial interactions at the same time as the quantitative effect of relevant product charac- teristics and storage conditions (Pouillot et al., 2007; Ross et al., 2009). Several mathematical models have been developed to quantitatively describe the effect of microbial interaction in foods e.g. the inhibiting effect of lactic acid bacteria (LAB) on growth of Listeria monocytogenes (Cornu et al., 2011; Giménez and Dalgaard, 2004). A simple model relies on the assumption of the Jameson effect i.e. that the dominating microbiota quantitatively inhibits growth of the pathogen in the same way that they inhibits their own growth and that the pathogen therefore stops growing at the time when the dominating microbiota reach their maximum pop- ulation density (MPD). This simple growth pattern can be predicted without interaction parameters that have to be estimated from mixed-culture experiments and this facilitates predictions at different storage temperatures (Giménez and Dalgaard, 2004). A modified version of this interaction model allows a microbiota concentration lower than their MPD to dampen and stop growth of the pathogen (Le Marc et al., 2009). The more general Lotkae Volterra model of predatoreprey interaction can also be used for groups of microorganisms in food when values of interaction parameters have been estimated (Cornu et al., 2011; Lotka, 1956; Volterra, 1931). Studies concerning the effect of natural microflora on growth of Salmonella Typhimurium DT104 have been done in ground chicken (Oscar, 2006, 2007). However, interaction models appropriate for the inhibiting effect of the natural microbiota on growth of Salmonella in raw pork meat remain to be suggested and evaluated.
The objectives of the present study were to model and predict growth of Salmonella, growth of the dominating natural microbiota and their interaction in ground raw pork. Growth of Salmonella in sterile ground raw pork between 4 C and 38 C was quantified and used for development of a predictive model. Data from the litera- ture were used for development of a natural microbiota growth model at different temperatures. Challenge tests at various temperatures and with Salmonella inoculated in ground raw pork were used for evaluation of growth and interaction models.
2. Materials and methods
2.1. Challenge tests and Salmonella growth models
Primary and secondary Salmonella growth models were devel- oped based on experimental data generated from inoculation of sterile ground pork meat.
Packages of approx. 500 g of modified atmosphere packaged (MAP) ground lean pork were obtained from a local retailer. The packages used for preparing sterile meat were mixed manually in a sterile bag for 10 min. Portions of 100 ` 3 g were vacuum pack- aged and frozen at 18 C. Sterilization of volumes of 5 times 100 g of frozen samples was done by irradiation at a dose of 5 kGy for 523 min, followed by freezing at 18 C. Prior to challenge tests 100 g portions of vacuum packed sterilized ground meat were defrosted in water at a temperature of approx. 40 C for 30 min.
Three Salmonella strains, previously isolated from pigs and characterized by the National Food Institute at the Technical University of Denmark, were studied. Salmonella Typhimurium DT104 (77-20547) carried resistance to ampicillin, chloramphen- icol, florfenicol, streptomycin and sulfa. Salmonella Typhimurium DT12 (R77) was resistant to rifampicin and Salmonella Derby (77- 20390) carried resistance to gentamycin, streptomycin, sulfa and
spectinomycin. The strains were maintained as frozen (80 C) stock cultures.
For each Salmonella isolate, one loop of the frozen stock culture was transferred to a test tube containing 10 ml of Lysogeny Broth (OXOID A/S e Thermo Fisher Scientific Inc., Greve, DK) and incu- bated at 37 C overnight with shaking (200 rpm). Subsequently, these stationary phase cultures were kept at 5 C for 3 days. Prior to inoculation of the sterile meat samples, the three cultures were diluted in maximum recovery diluent (OXOID) to obtain a concentration of approx. 106 CFU ml1. A Salmonella cocktail was prepared by mixing equal volumes of the three cultures in a sterile tube.
Each of the 100-g-meat samples was aseptically transferred to separate sterile stomacher bags (Seward, Worthing, UK) and inoculated with 1 ml of the Salmonella cocktail. To distribute the added cells, each inoculated minced sample (with ca. 104 CFU g1) was mixed two-times during one minutes in a stomacher (Seward).
Inoculated meat samples with initial pH of 5.8e5.9 were stored in stomacher bags at 4, 8, 10, 11, 15, 19, 24.5, 30, 33, 37 and 38  C. The pH was measured by using a Thermo Scientific Orion 3-star ph benchtop meter (Thermo Fischer Scientific Inc., Slangerup, Denmark) and storage temperature recorded by Verdict! data- loggers (Verdict Systems BV, Aalten, the Netherlands). At appro- priate time intervals, the whole meat sample was mixed in a stomacher for two times one minute. Subsequently, 5.0 ` 0.2 g of meat was aseptically transferred to a sterile filter bag (Seward) and the stomacher bag with the remaining amount of meat was placed back in the incubator within 5 min. The 5-g samples were diluted in 45 ml of maximum recovery diluent and mixed in a stomacher for two minutes. Further 10-fold dilutions were performed using maximum recovery diluent and appropriate dilutions were plated onto XLD agar (OXOID) using a drop plate method (Swanson et al., 1992) with three drops of 10 ml for each dilution. The plates were incubated at 37 C for 16e24 h. Growth curves from two independent samples were generated at four of the 11 studied temperatures, resulting in a total of 15 growth curves.
The primary log-transformed Logistic model with delay was fitted to Salmonella growth curves obtained at each storage temperature to estimate lag phase duration (l, h), maximum specific growth rate (mmax, h1) and maximum population density (Nmax, log10 CFU g1) (Dalgaard, 2009). The obtained mmax evalues were modeled as a function of temperature using the simple square root model of Ratkowsky et al. (1982) (Equation (1)):
pffiffiffiffiffiffiffiffiffiffi
mmax 1⁄4 b$ðT  TminÞ (1)
where T is the temperature in C, Tmin the theoretical minimum temperature of growth in C and b a constant.
In order to model the influence of temperature on l (h), a one parameter model (Equation (2)), derived from the mmax model, was applied (Ross and Dalgaard, 2004; Zwietering et al., 1994):
l 1⁄4 RLT$lnð2Þ=mmax (2)
where RLT is the relative lag time which is assumed to be inde- pendent of storage temperature. When fitted to experimental lag time data mmax in Equation (2) was replaced by Equation (1) i.e. (b$(T  Tmin))2 with fitted values of the parameters b and Tmin.
The performance of the developed Salmonella growth models for the effect of storage temperature on mmax and l were evaluated by comparison with data collected from the literature (Table 1). Bias and accuracy factors were calculated as suggested by Ross (1996). The bias factor measures the average relative deviation between predictions and observations, whereas the accuracy factor

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ความเข้มข้นสูงของจุลินทรีย์ได้เจริญเติบโตของโรคผล inhibiting พบ ในเนื้อหมู และอาหารอื่น ๆ กล้ามเนื้อ (Cornu et al., 2011 Vermeiren และ al., 2006) เกี่ยวกับการประเมินความเสี่ยงและความเสี่ยง จะต้องคำนึงถึงผลเชิงปริมาณของการโต้ตอบที่จุลินทรีย์เหล่านี้ในเวลาเดียวกันเป็นผลเชิงปริมาณของผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้องเงื่อนไข charac-teristics และการจัดเก็บ (Pouillot et al., 2007 รอสส์และ al., 2009) ได้รับการพัฒนาแบบจำลองทางคณิตศาสตร์หลาย quantitatively อธิบายผลของการโต้ตอบที่จุลินทรีย์ในอาหารเช่นผล inhibiting ของแบคทีเรียกรดแลกติก (LAB) ในการเจริญเติบโตของออลิ monocytogenes (Cornu et al., 2011 Giménez และ Dalgaard, 2004) แบบง่าย ๆ อาศัยสมมติฐานของผลเจมสันเช่นว่า microbiota พลังอำนาจเหนือ quantitatively ยับยั้งการเจริญเติบโตของการศึกษาแบบเดียวกับที่จะยับยั้งการเจริญเติบโตของตนเอง และให้การศึกษาจึงหยุดเวลาเมื่อ microbiota พลังอำนาจเหนือถึงความหนาแน่นสูงสุดป๊อป-ulation ของพวกเขา (MPD) การเติบโต รูปแบบการเจริญเติบโตอย่างนี้สามารถคาดการณ์โดยไม่โต้ตอบพารามิเตอร์ที่ต้องจะประเมินจากการทดลองผสมวัฒนธรรม และนี้ช่วยคาดคะเนในอุณหภูมิการเก็บที่แตกต่างกัน (Giménez และ Dalgaard, 2004) ปรับเปลี่ยนรูปแบบการโต้ตอบนี้ให้เข้มข้น microbiota ต่ำกว่าของ MPD ชุ่ม และหยุดการเจริญเติบโตของการศึกษา (เลอมาร์ค et al., 2009) ทั่วไปเพิ่มเติมรุ่น Lotkae Volterra predatoreprey โต้ตอบยังสามารถใช้สำหรับกลุ่มของจุลินทรีย์ในอาหารเมื่อค่าพารามิเตอร์โต้ตอบได้โดยประมาณ (Cornu et al., 2011 Lotka, 1956 Volterra, 1931) ได้ศึกษาเกี่ยวกับผลของ microflora ธรรมชาติเจริญเติบโตของ Typhimurium DT104 สายในไก่สับ (Oscar, 2006, 2007) อย่างไรก็ตาม รูปแบบโต้ตอบที่เหมาะสมสำหรับผล inhibiting ของ microbiota ธรรมชาติเจริญเติบโตของสายในเนื้อหมูดิบยังคงแนะนำ และประเมินวัตถุประสงค์ของการศึกษานำเสนอแบบจำลอง และทำนายการเจริญเติบโตของสาย การเจริญเติบโตของ microbiota ธรรมชาติพลังอำนาจเหนือและการโต้ตอบในหมูดิบดินได้ เจริญเติบโตของสายในหมูดิบดินใส่ระหว่าง 4 C และ 38 C quantified และใช้สำหรับการพัฒนาแบบจำลองการคาดการณ์ ข้อมูลจาก litera ture ถูกใช้สำหรับการพัฒนาแบบจำลองการเจริญเติบโต microbiota ธรรมชาติที่อุณหภูมิแตกต่างกัน ความท้าทายที่ทดสอบ ที่อุณหภูมิต่าง ๆ และระดับ inoculated ในพื้นที่หมูดิบใช้สำหรับการประเมินการเจริญเติบโตและการโต้ตอบ2. วัสดุและวิธีการ2.1 การทดสอบและรูปแบบการเจริญเติบโตระดับท้าทายสายหลัก และรองที่แบบจำลองการเจริญเติบโตได้ devel-oped ตามข้อมูลทดลองที่สร้างขึ้นจาก inoculation ใส่หมูสับแพคเกจของปรับเปลี่ยนบรรยากาศประมาณ 500 กรัมบรรจุหมูแบบ lean ได้รับมาจากผู้ค้าปลีกท้องถิ่นดิน (แผนที่) แพคเกจที่ใช้เตรียมเนื้อใส่รวมในถุงใส่สำหรับ 10 นาทีส่วนของ 100 ' 3 g ถูกดูดชุด aged และน้ำแข็งที่ 18 ฆ่าเชื้อ C. ของจำนวน 5 ครั้ง 100 กรัมแช่แข็งอย่างทำ โดยวิธีการฉายรังสีที่ปริมาณ 5 kGy ใน 523 นาที ตาม ด้วยการแช่แข็งที่ C. 18 ก่อนทดสอบท้าทาย 100 กรัมส่วนของสุญญากาศบรรจุเนื้อดิน sterilized ถูก defrosted ในน้ำที่มี อุณหภูมิประมาณ 40 C สำหรับ 30 นาทีสามสายสายพันธุ์ แยกต่างหากจากสุกร และโดย สถาบันอาหารแห่งชาติที่การเทคนิคมหาวิทยาลัยเดนมาร์ก ก่อนหน้านี้ได้ศึกษา Typhimurium DT104 สาย (77-20547) ดำเนินการต้านทานแอมพิซิลลิน chloramphen icol, florfenicol, streptomycin และ sulfa สาย Typhimurium DT12 (R77) ถูกทนต่อ rifampicin และซัลเดอร์บี้ (77 - 20390) ดำเนินการเพื่อ gentamycin, streptomycin, sulfa และspectinomycin สายพันธุ์ถูกรักษาไว้เป็นวัฒนธรรมหุ้น (80 C) แช่แข็งสำหรับแต่ละสายแยก วงหนึ่งของวัฒนธรรมหุ้นแช่แข็งถูกถ่ายโอนไปหลอดทดสอบประกอบด้วย 10 ml ของซุป Lysogeny (OXOID a/s e เทอร์โม Fisher วิทยาศาสตร์ Inc., Greve, DK) และ incu - bated ที่ 37 C นอนกับสั่น (200 รอบต่อนาที) ในเวลาต่อมา วัฒนธรรมระยะเครื่องเขียนเหล่านี้ถูกเก็บที่ 5 C วัน 3 ก่อน inoculation อย่างใส่เนื้อ สามวัฒนธรรมถูกผสมในสูงกู้คืน diluent (OXOID) เพื่อให้ได้ความเข้มข้นของประมาณ 106 CFU ml 1 สายที่ค็อกเทลถูกเตรียม โดยผสมวัฒนธรรมสามในหลอดใส่ปริมาณเท่านอกจากนี้แต่ละตัวอย่าง 100 กรัมเนื้อ aseptically ถูกโอนย้ายไปยังแผงประดับหน้าอกกระบอกแยกถุง (เวิร์ด Worthing สหราชอาณาจักร) และ inoculated มี 1 ml ของซัลค็อกเทล เพื่อกระจายเซลล์เพิ่ม แต่ละตัวอย่างสับ inoculated (กับ ca 104 CFU กรัม 1) ผสม two-times ระหว่างหนึ่งนาทีในแผงประดับหน้าอก (เวิร์ด)ตัวอย่างเนื้อ inoculated กับ 5.8e5.9 pH เริ่มต้นถูกเก็บไว้ในกระเป๋าแผงประดับหน้าอกที่ 4, 8, 10, 11, 15, 19, 24.5, 30, 33, 37 และ 38 ค มีวัด pH โดยใช้เทอร์โมวิทยาศาสตร์กลุ่มดาวนายพรานดาว 3 ph benchtop เมตร (เทอร์โมตื่นวิทยาศาสตร์ Inc., Slangerup เดนมาร์ก) และอุณหภูมิในการเก็บบันทึก โดยพิพากษา -เครื่องบันทึกข้อมูล (ระบบพิพากษา BV, Aalten เนเธอร์แลนด์) ที่ช่วงเวลา appro priate ตัวอย่างเนื้อสัตว์ทั้งหมดถูกจัดผสมในแผงประดับหน้าอกเป็นสองครั้งหนึ่งนาที ต่อมา 5.0 ' 0.2 g เนื้อถูกถ่ายโอนไปกรองใส่ถุง (เวิร์ด) aseptically และกระเป๋าแผงประดับหน้าอก มียอดคงเหลือของเนื้อถูกวางไว้ใน incubator ภายใน 5 นาที ตัวอย่าง 5 g ถูกทำให้เจือจางใน 45 ml ของ diluent กู้คืนสูงสุด และผสมในแผงประดับหน้าอกเป็นสองนาที เพิ่มเติม 10-fold dilutions ดำเนินใช้ diluent กู้คืนสูงสุด และเหมาะสม dilutions ถูกชุบบน XLD agar (OXOID) การใช้วิธีจานหล่น (Swanson et al., 1992) กับสามหยด 10 ml เจือจางแต่ละ แผ่นก็ incubated ที่ 37 C สำหรับ h. 16e24 เจริญเติบโตสร้างเส้นโค้งจากสองตัวอย่างที่อิสระขึ้นที่ 4 อุณหภูมิ studied 11 ผลรวมของเส้นโค้งการเติบโต 15หลักเปลี่ยนล็อกโลจิสติกแบบหน่วงเวลาได้พอดีกับสายเส้นโค้งการเจริญเติบโตได้ที่อุณหภูมิในการเก็บแต่ละการประเมินช่วงห่างระยะเวลาของระยะ (l, h), อัตราการเติบโตสูงสุดที่ระบุ (mmax, h 1) และความหนาแน่นของประชากรสูงสุด (Nmax, log10 CFU g 1) (Dalgaard, 2009) Evalues mmax ได้รับถูกจำลองเป็นฟังก์ชันของอุณหภูมิที่ใช้แบบง่ายรากของ Ratkowsky et al. (1982) (สมการ (1)):pffiffiffiffiffiffiffiffiffiffimmax 1⁄4 b ðT $ TminÞ (1)ที่ T เป็นอุณหภูมิใน C, Tmin อุณหภูมิต่ำสุดทฤษฎีของการเติบโตใน C และ b เป็นค่าคงการจำลองอิทธิพลของอุณหภูมิบน l (h), รูปแบบพารามิเตอร์หนึ่ง (สมการ (2)), มาแบบ mmax ใช้ (รอสส์และ Dalgaard, 2004 Zwietering et al., 1994):l 1⁄4 RLT$ lnð2Þ = mmax (2)ซึ่ง RLT เป็นญาติช้าซึ่งจะถือ inde แขวนของอุณหภูมิในการเก็บ เมื่อติดตั้งกับ mmax ข้อมูลเวลาทดลองความล่าช้าในสมการ (2) ถูกแทนที่ ด้วยสมการ (1) เช่น (b$ (T Tmin)) 2 มีค่าผ่อนของพารามิเตอร์ b และ Tminมีประเมินประสิทธิภาพของรูปแบบการเจริญเติบโตระดับพัฒนาสำหรับผลของอุณหภูมิในการเก็บ mmax และ l by comparison with ข้อมูลที่รวบรวมจากเอกสารประกอบการ (ตารางที่ 1) มีคำนวณปัจจัยความโน้มเอียงและความถูกต้องตามที่แนะนำ โดยรอสส์ (1996) ตัวตั้งวัดความแตกต่างสัมพัทธ์เฉลี่ยระหว่างการคาดคะเนและการสังเกตการณ์ ในขณะที่ตัวถูกต้อง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความเข้มข้นสูงของจุลินทรีย์ที่สามารถมีผลยับยั้งการเจริญเติบโตอย่างมีนัยสำคัญในของเชื้อโรคในเนื้อสัตว์เนื้อหมูและกล้ามเนื้อในอาหารอื่น ๆ (Cornu et al, 2011;.. Vermeiren et al, 2006) ในความสัมพันธ์กับการเปิดรับและการประเมินความเสี่ยงเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องคำนึงถึงผลกระทบของการมีปฏิสัมพันธ์เชิงปริมาณจุลินทรีย์เหล่านี้ในเวลาเดียวกันเป็นผลเชิงปริมาณของผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้อง teristics อักษรและสภาพการเก็บรักษา (Pouillot et al, 2007;. รอสส์และอัล 2009) แบบจำลองทางคณิตศาสตร์หลายคนได้รับการพัฒนาให้ปริมาณอธิบายผลของการทำงานร่วมกันของจุลินทรีย์ในอาหารเช่นผลยับยั้งแบคทีเรียกรดแลคติก (LAB) การเจริญเติบโตของเชื้อ Listeria monocytogenes (Cornu et al, 2011;. Giménezและ Dalgaard, 2004) รูปแบบที่เรียบง่ายอาศัยบนสมมติฐานของผลกระทบที่เจมสันอาทิว่า microbiota ครอบครองปริมาณยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อโรคในลักษณะเดียวกับที่พวกเขายับยั้งการเจริญเติบโตของตัวเองและว่าเชื้อโรคจึงหยุดการเจริญเติบโตในขณะที่ถึง microbiota ครอบครองป๊อปสูงสุดของพวกเขา - ความหนาแน่น ulation (MPD) รูปแบบการเติบโตนี้ง่ายสามารถคาดการณ์โดยไม่มีพารามิเตอร์การทำงานร่วมกันที่จะต้องมีการประเมินจากการทดลองผสมวัฒนธรรมและการคาดการณ์ที่อำนวยความสะดวกในการจัดเก็บที่อุณหภูมิที่แตกต่างกัน (Giménezและ Dalgaard, 2004) รุ่นที่มีการปรับเปลี่ยนรูปแบบการปฏิสัมพันธ์นี้จะช่วยให้มีความเข้มข้นต่ำกว่า microbiota MPD ของพวกเขาเพื่อรองรับและหยุดการเจริญเติบโตของเชื้อโรค (Le มาร์ค et al., 2009) รุ่นทั่วไปมากขึ้น Lotkae Volterra ของการปฏิสัมพันธ์ predatoreprey ยังสามารถใช้สำหรับกลุ่มของจุลินทรีย์ในอาหารเมื่อค่าของพารามิเตอร์การทำงานร่วมกันได้รับการประเมิน (Cornu et al, 2011;. Lotka 1956; Volterra, 1931) การศึกษาเกี่ยวกับผลกระทบของจุลินทรีย์ธรรมชาติต่อการเจริญเติบโตของเชื้อ Salmonella Typhimurium DT104 ได้รับการทำในไก่พื้นดิน (ออสการ์ 2006, 2007) อย่างไรก็ตามการทำงานร่วมกันแบบที่เหมาะสมสำหรับผลการยับยั้งของ microbiota ธรรมชาติต่อการเจริญเติบโตของเชื้อ Salmonella ในเนื้อหมูดิบยังคงที่จะแนะนำและประเมินผล.
โดยมีวัตถุประสงค์ของการศึกษาในปัจจุบันมีรูปแบบและคาดการณ์การเจริญเติบโตของเชื้อ Salmonella, การเจริญเติบโตของ microbiota ธรรมชาติมีอำนาจเหนือและ ปฏิสัมพันธ์ในพื้นดินเนื้อหมูดิบ การเจริญเติบโตของเชื้อ Salmonella ในพื้นดินที่ผ่านการฆ่าเชื้อหมูดิบระหว่างวันที่ 4 องศาเซลเซียสและ 38 องศาเซลเซียสได้รับการวัดและใช้ในการพัฒนารูปแบบการทำนาย ข้อมูลจาก ture litera- ถูกนำมาใช้สำหรับการพัฒนาของ microbiota ธรรมชาติรูปแบบการเจริญเติบโตที่อุณหภูมิที่แตกต่างกัน การทดสอบความท้าทายที่อุณหภูมิต่างๆและ Salmonella เชื้อในดินเนื้อหมูดิบถูกนำมาใช้สำหรับการประเมินผลของการเจริญเติบโตและรูปแบบการทำงานร่วมกัน.
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 การทดสอบความท้าทายและรูปแบบการเจริญเติบโตของเชื้อ Salmonella
ประถมศึกษาและมัธยมศึกษารุ่นการเจริญเติบโตของเชื้อ Salmonella ได้พัฒนาแล้วอยู่บนพื้นฐานของข้อมูลการทดลองที่เกิดจากการฉีดวัคซีนของเนื้อหมูสับหมัน.
แพคเกจประมาณ 500 กรัมบรรจุดัดแปลงบรรยากาศ (MAP) พื้นดินเนื้อหมูติดมันที่ได้รับจากร้านค้าปลีกท้องถิ่น แพคเกจที่ใช้สำหรับการเตรียมเนื้อหมันถูกผสมด้วยตนเองในถุงปลอดเชื้อเป็นเวลา 10 นาที บางส่วนของ 100 `3 กรัมเป็นสูญญากาศเกจสูงอายุและแช่แข็งที่? 18? C การฆ่าเชื้อของเล่ม 5 ครั้ง 100 กรัมของตัวอย่างแช่แข็งทำโดยการฉายรังสีในขนาด 5 กิโลเกรย์สำหรับ 523 นาทีตามด้วยการแช่แข็งที่? 18? C ก่อนที่จะท้าทายการทดสอบ 100 กรัมส่วนของสูญญากาศบรรจุเนื้อดินฆ่าเชื้อถูกละลายในน้ำที่อุณหภูมิประมาณ 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที.
สามสายพันธุ์เชื้อ Salmonella ที่แยกได้ก่อนหน้านี้จากหมูและโดดเด่นด้วยการสถาบันอาหารที่มหาวิทยาลัยเทคนิคแห่งเดนมาร์กได้รับการศึกษา Salmonella Typhimurium DT104 (77-20547) ดำเนินการต้านทานต่อ ampicillin, chloramphen- icol, florfenicol, streptomycin และซัลฟา Salmonella Typhimurium DT12 (R77) เป็นทนต่อ rifampicin และ Salmonella ดาร์บี้ (77- 20390) ความต้านทานดำเนินการ Gentamycin, streptomycin ซัลฟาและ
spectinomycin สายพันธุ์ที่ได้รับการดูแลเป็นแช่แข็ง (? 80? C) หุ้นวัฒนธรรม.
สำหรับ Salmonella แต่ละแยกวงหนึ่งของวัฒนธรรมหุ้นแช่แข็งถูกโอนไปยังหลอดทดลองที่มี 10 มล Lysogeny น้ำซุป (OXOID A / S อีเทอร์โมฟิชเชอร์อิงค์วิทยาศาสตร์ , Greve, DK) และ incu- ซึ้งน้อยลงที่ 37? C ค้างคืนกับสั่น (200 รอบต่อนาที) ต่อมาเหล่านี้วัฒนธรรมเฟสถูกเก็บไว้ที่ 5 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 วัน ก่อนที่จะมีการฉีดวัคซีนของตัวอย่างเนื้อสัตว์ผ่านการฆ่าเชื้อทั้งสามวัฒนธรรมที่ถูกเจือจางในการกู้คืนเจือจางสูงสุด (OXOID) เพื่อให้ได้ความเข้มข้นของประมาณ 106 CFU มล. 1 ค๊อกเทล Salmonella ถูกจัดทำขึ้นโดยการผสมปริมาณที่เท่ากันของสามวัฒนธรรมในหลอดหมัน.
แต่ละกลุ่มตัวอย่าง 100 กรัมเนื้อถูกย้ายปลอดเชื้อที่จะแยกถุง Stomacher หมัน (เอิร์ด, Worthing สหราชอาณาจักร) และเชื้อด้วย 1 มิลลิลิตรของเชื้อ Salmonella ค็อกเทล เพื่อกระจายเซลล์เพิ่มแต่ละตัวอย่างสับเชื้อ (กับแคลิฟอร์เนียได้ 104 CFU กรัม 1) เป็นผสมสองครั้งในช่วงหนึ่งนาทีใน Stomacher (เอิร์ด).
เชื้อตัวอย่างเนื้อสัตว์ที่มีค่า pH เริ่มต้นของ 5.8e5.9 ถูกเก็บไว้ใน Stomacher ถุงที่ 4, 8, 10, 11, 15, 19, 24.5, 30, 33, 37 และ 38? ซีพีเอชได้รับการวัดโดยใช้เทอร์โมวิทยาศาสตร์ Orion 3 ดาวพีเอช benchtop เมตร (เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์อิงค์ Slangerup, เดนมาร์ก) และอุณหภูมิการเก็บรักษาบันทึกโดยคำตัดสิน! ตัดไม้ DATA- (คำตัดสิน Systems BV, Aalten, เนเธอร์แลนด์) ในช่วงเวลาที่จัดสรรที่โชคร้าย, ตัวอย่างเนื้อสัตว์ทั้งหมดถูกผสมใน Stomacher สำหรับสองครั้งเป็นเวลาหนึ่งนาที ต่อมา 5.0 `0.2 กรัมของเนื้อสัตว์ที่ถูกย้ายไปที่ปลอดเชื้อถุงกรองผ่านการฆ่าเชื้อ (เอิร์ด) และถุง Stomacher กับเงินส่วนที่เหลือของเนื้อถูกวางไว้กลับมาอยู่ในศูนย์บ่มเพาะภายใน 5 นาที กลุ่มตัวอย่าง 5 กรัมเจือจางใน 45 มิลลิลิตรเจือจางกู้คืนสูงสุดและผสมใน Stomacher สำหรับสองนาที นอกจากเจือจาง 10 เท่าได้รับการดำเนินการโดยใช้เจือจางกู้คืนสูงสุดและเจือจางที่เหมาะสมถูกชุบลงบนอาหารเลี้ยงเชื้อ XLD (OXOID) โดยใช้วิธีการลดลงจาน (สเวนสัน et al., 1992) ที่มีสามหยด 10 มล. สำหรับการลดสัดส่วนในแต่ละ แผ่นถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสสำหรับ 16e24 ชั่วโมง เส้นโค้งการเจริญเติบโตจากสองกลุ่มที่เป็นอิสระถูกสร้างขึ้นที่สี่ของ 11 การศึกษาอุณหภูมิที่ส่งผลให้จำนวน 15 เส้นโค้งการเจริญเติบโต.
ล็อก-เปลี่ยนรูปแบบการโลจิสติกหลักที่มีความล่าช้าได้รับการติดตั้งกับเส้นโค้งการเจริญเติบโตของเชื้อ Salmonella ได้ที่อุณหภูมิการเก็บรักษาในแต่ละที่จะประเมินระยะเวลาขั้นตอนล่าช้า (ลิตรต่อชั่วโมง) อัตราการเจริญเติบโตจำเพาะสูงสุด (mmax เอช 1) และความหนาแน่นของประชากรสูงสุด (nMax, log10 CFU กรัม 1) (Dalgaard 2009) evalues ​​mmax ที่ได้มาย่อมเป็นหน้าที่ของอุณหภูมิใช้รูปแบบรากที่สองที่เรียบง่ายของ Ratkowsky et al, (1982) (สมการ (1)):
pffiffiffiffiffiffiffiffiffiffi
mmax 1/4 ข $ DT? TminÞ (1)
ที่ T คืออุณหภูมิในองศาที่ Tmin อุณหภูมิต่ำสุดทางทฤษฎีของการเจริญเติบโตในองศาเซลเซียสและบริติชแอร์เวย์อย่างต่อเนื่อง.
เพื่อที่จะจำลองอิทธิพลของอุณหภูมิต่อลิตร (เอช) รูปแบบพารามิเตอร์หนึ่ง (สมการ (2) ) ที่ได้มาจากรูปแบบการ mmax ที่ถูกนำมาใช้ (รอสส์และ Dalgaard 2004; Zwietering, et al, 1994).
ลิตร 1/4 RLT $ lnð2Þ = mmax (2)
ที่ RLT เป็นเวลาที่ล่าช้าญาติซึ่งจะถือว่าเป็นดัชนีคำศัพท์ - จี้ของอุณหภูมิการเก็บรักษา เมื่อติดตั้งกับข้อมูลเวลาล่าช้าทดลอง mmax ในสมการ (2) ก็ถูกแทนที่ด้วยสมการ (1) คือ (ข $ (T? Tmin)) 2 มีค่าติดตั้งของพารามิเตอร์ขและ Tmin ได้.
การปฏิบัติงานของการพัฒนารูปแบบการเจริญเติบโตของเชื้อ Salmonella สำหรับ ผลของอุณหภูมิการเก็บรักษาใน mmax ลิตรและได้รับการประเมินโดยเปรียบเทียบกับข้อมูลที่รวบรวมจากวรรณกรรม (ตารางที่ 1) ปัจจัยที่มีอคติและความถูกต้องจะถูกคำนวณตามที่แนะนำโดยรอสส์ (1996) ปัจจัยที่มีอคติวัดค่าเบี่ยงเบนญาติเฉลี่ยระหว่างการคาดการณ์และข้อสังเกตในขณะที่ปัจจัยความถูกต้อง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ความเข้มข้นสูงของจุลินทรีย์ได้เป็นกอบเป็นกํายับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อโรคในอาหารหมูและอาหารของกล้ามเนื้ออื่น ๆ ( กิ่ง et al . , 2011 ; vermeiren et al . , 2006 )ในความสัมพันธ์กับความเสี่ยงและการประเมินความเสี่ยง มันเป็นสิ่งสำคัญที่ต้องคำนึงถึงผลเชิงปริมาณของจุลินทรีย์เหล่านี้ในเวลาเดียวกับผลเชิงปริมาณของ charac - ผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้อง teristics และการเก็บรักษาสภาพ ( pouillot et al . , 2007 ; Ross et al . , 2009 )แบบจำลองทางคณิตศาสตร์จำนวนมากได้รับการพัฒนาเพื่อใช้อธิบายผลของจุลินทรีย์ในอาหาร เช่น การยับยั้งผลของแบคทีเรียกรดแล็กติก ( Lab ) ต่อการเจริญเติบโตของวงแหวนแวนอัลเลน ( กิ่ง et al . , 2011 ; GIME และ́เนซ dalgaard , 2004 ) รูปแบบที่เรียบง่ายอาศัยสมมติฐานของเจมิสัน ผลคือที่ควบคุมโดยไมโครไบโ ้า ยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อโรค ในลักษณะเดียวกับที่พวกเขาจะช่วยยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อโรค นั้นเอง จึงหยุดการเติบโต ในเวลาเมื่อมีไมโครไบโ ้าถึงป๊อปความหนาแน่นสูงสุดของพวกเขา ulation ( MPD )แบบแผนการเจริญเติบโตนี้ง่ายสามารถทำนายได้โดยไม่ต้องพารามิเตอร์การปฏิสัมพันธ์ที่ต้องถูกประเมินจากการทดลองผสมวัฒนธรรมและทำให้การคาดการณ์ที่อุณหภูมิที่เก็บที่แตกต่างกัน ( GIME ́เนซ และ dalgaard , 2004 ) เป็นรุ่นที่แก้ไขของรูปแบบการโต้ตอบนี้ช่วยให้ไมโครไบโ ้าความเข้มข้นต่ำกว่าของกรมตำรวจให้ชุ่ม และหยุดการเจริญเติบโตของเชื้อโรค ( เลอมาร์ค et al . , 2009 )lotkae ทั่วไปวอลแตร์รา รูปแบบของปฏิสัมพันธ์ predatoreprey ยังสามารถใช้สำหรับกลุ่มของจุลินทรีย์ในอาหาร เมื่อค่าพารามิเตอร์ของการปฏิสัมพันธ์มีประมาณ ( กิ่ง et al . , 2011 ; lotka 1956 ; Volterra , 1931 ) การศึกษาเกี่ยวกับผลของจุลินทรีย์ธรรมชาติการเจริญเติบโตของ Salmonella Typhimurium dt104 ได้กระทำในไก่พื้น ( ออสการ์ , 2006 , 2007 ) อย่างไรก็ตามรูปแบบปฏิสัมพันธ์ที่เหมาะสมเพื่อยับยั้งผลของไมโครไบโ ้าธรรมชาติการเจริญเติบโตของ Salmonella ในเนื้อหมูดิบยังคงสามารถสรุปและประเมินผล .
วัตถุประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้ คือ แบบและคาดการณ์การเจริญเติบโตของ Salmonella , การเจริญเติบโตของการเป็นธรรมชาติไมโครไบโ ้าและปฏิสัมพันธ์ในดินดิบ หมูการเจริญเติบโตของ Salmonella ในดินดิบเป็นหมันหมูระหว่าง 4  C และ 38  C วัดและใช้สำหรับการพัฒนาแบบจำลอง . ข้อมูลจาก litera - ture ถูกใช้เพื่อการพัฒนาของไมโครไบโ ้าธรรมชาติรูปแบบการเจริญเติบโตที่อุณหภูมิต่าง ๆความท้าทายแบบทดสอบที่อุณหภูมิต่าง ๆ และด้วยเชื้อ เชื้อในดินดิบ หมูมีการประเมินรูปแบบการปฏิสัมพันธ์ .
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . ความท้าทายแบบทดสอบและแบบการเจริญเติบโตของ Salmonella
ประถมศึกษาและมัธยมศึกษาการ devel oped เชื้อโมเดล - บนพื้นฐานของข้อมูลที่สร้างขึ้นจากการเป็นหมันของหมูบดเนื้อ
แพคเกจของประมาณบรรจุ 500 กรัมสภาพดัดแปลงบรรยากาศ ( MAP ) พื้นยันหมูได้จากร้านค้าปลีกท้องถิ่น แพคเกจที่ใช้สำหรับการเตรียมเนื้อเป็นหมันถูกผสมด้วยตนเองในถุงปลอดเชื้อ นาน 10 นาที ส่วน 100 ` 3 กรัมเป็นสูญญากาศแพ็ค - อายุและแช่แข็งที่  18  C . การทำหมันเล่ม 5 ครั้งที่ 100 กรัมแช่แข็งตัวอย่าง ทำได้โดยการฉายรังสีในขนาด 5 กิโลเกรย์ สำหรับตอนนี้ มินตามด้วยการแช่แข็งที่  18  C ก่อนที่จะท้าทายทดสอบ 100 กรัม ส่วนของสูญญากาศบรรจุฆ่าเชื้อเนื้อดินถูกละลายในน้ำที่อุณหภูมิประมาณ 40 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 นาที 
3 ซาลโมเนลลาสายพันธุ์ ที่แยกได้จากสุกรและลักษณะ โดยก่อนหน้านี้สถาบันอาหารแห่งชาติที่มหาวิทยาลัยเทคนิคแห่งเดนมาร์ก , ศึกษาSalmonella Typhimurium dt104 ( 77-20547 ) การทนต่อ ampicillin chloramphen - , icol florfenicol , streptomycin , และ sulfa . Salmonella Typhimurium dt12 ( s699 ) คือป้องกัน rifampicin และ Salmonella derby ( 77 - 20390 ) นำความต้านทานสเตร็ปโตมัยซินเจนตาไมซิน , และ , ซัลฟา
สเปกติโนมัยซิน . สายพันธุ์ที่ถูกเก็บรักษาไว้เป็นแช่แข็ง (  80  C ) หุ้นวัฒนธรรม .
สำหรับแต่ละเชื้อซัลโมเนลลาที่แยก ,หนึ่งของห่วงหุ้นแช่แข็งวัฒนธรรมถูกย้ายไปที่หลอดทดลองบรรจุ 10 ml ของ lysogeny broth ( oxoid S / E เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ ( กรีฟ DK ) และ incu - ลดอุณหภูมิ 37  C ค้างคืนกับเขย่า 200 รอบต่อนาที ) ดังนั้นจึงนิ่งระยะวัฒนธรรมไว้ที่ 5  C เป็นเวลา 3 วัน ก่อนการฉีดวัคซีนของตัวอย่างอาหารปลอดเชื้อสามวัฒนธรรมที่ถูกเจือจางเจือจางสูงสุดในการกู้คืน ( oxoid ) เพื่อให้ได้ความเข้มข้นประมาณ 106 cfu ml  1 เป็นค็อกเทลเตรียมโดยผสมเชื้อปริมาณเท่ากันของ 3 วัฒนธรรมในหลอดปราศจากเชื้อ
ของแต่ละ 100-g-meat จำนวน aseptically โอนแยกถุงแผงประดับหน้าอกที่เป็นหมัน ( ซีเวิร์ด Worthing , UK ) และเชื้อซาลโมเนลลา 1 มิลลิลิตรของค็อกเทลแจกเพิ่มเซลล์ แต่ละเชื้อตัวอย่าง ( CA 104 CFU สับกับ  1 กรัม ) ผสม 2 ครั้ง ใน 1 นาทีในแผงประดับหน้าอก ( ซีเวิร์ด ) .
จากตัวอย่างเนื้อกับค่าพีเอชเริ่มต้นของ 5.8e5.9 ถูกเก็บไว้ในถุงแผงประดับหน้าอกที่ 4 , 8 , 10 , 11 , 15 , 19 , 24.5 , 30 , 33 , 37 และ 38  C pH วัดโดยใช้เทอร์โมวิทยาศาสตร์เครื่องวัด pH แบบตั้งโต๊ะ 3 ดาวโอไรออน ( เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์สำหรับslangerup , เดนมาร์ก ) และอุณหภูมิที่บันทึกไว้ด้วยฟันธง ! ข้อมูลคนตัดไม้ ( ระบบตัดสิน BV , aalten , เนเธอร์แลนด์ ) ที่ขนาดประมาณ - จัดช่วงเวลา เนื้อทั้งหมดตัวอย่างผสมในแผงประดับหน้าอก 2 ครั้ง 1 นาที ต่อมา 5.0 ` 02 กรัม เนื้อ aseptically โอนไปยังเครื่องกรองแบบถุงปลอดเชื้อ ( ซีเวิร์ด ) และแผงประดับหน้าอกถุงที่เหลืออยู่ในตู้อบ เนื้อกลับภายใน 5 นาที 5-g จำนวน 45 มล. เจือจางในการกู้สูงสุดเจือจางและผสมในแผงประดับหน้าอกเป็นเวลาสองนาทีเพิ่มเติม 10 พับได้ใช้วิธีการกู้คืนสูงสุดเจือจางและวิธีการชุบลงบน xld เหมาะสมคือ ( oxoid ) โดยใช้วิธีวางจาน ( Swanson et al . , 1992 ) กับสามหยด 10 ml สำหรับแต่ละเจือจาง จานถูกบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส  16e24 . การเจริญเติบโตโค้งจากสองตัวอย่างอิสระขึ้นที่ 4 ของ 11 ศึกษาอุณหภูมิเป็นผลรวมของ 15 เส้นโค้งการเจริญเติบโต การเปลี่ยนรูปแบบ
เข้าสู่ระบบโลจิสติกกับการติดตั้งกับการได้รับเชื้อเส้นโค้งในแต่ละอุณหภูมิประมาณ lag phase ระยะเวลา ( L , H ) อัตราการเจริญเติบโตจำเพาะสูงสุด ( มแม็กซ์ , H  1 ) และความหนาแน่นของจำนวนประชากรสูงสุด ( nmax CFU / g  LN , 1 ) ( dalgaard , 2009 )มแม็กซ์ ได้ evalues เป็นฟังก์ชันของอุณหภูมิแบบใช้ง่ายๆ รูตรูปแบบ ratkowsky et al . ( 1982 ) ( สมการ ( 1 )

pffiffiffiffiffiffiffiffiffiffi มแม็กซ์ 1 ⁄ 4 B $ t ð  tmin Þ ( 1 )
เมื่อ t คืออุณหภูมิใน  C อุณหภูมิต่ำสุด tmin ทฤษฎีของการเจริญเติบโตใน  C และ B คงที่
เพื่อรูปแบบอิทธิพลของอุณหภูมิต่อลิตร ( H )โมเดล 1 พารามิเตอร์ ( สมการ ( 2 ) ) ที่ได้จากมแม็กซ์แบบประยุกต์ ( Ross และ dalgaard , 2004 ; zwietering et al . , 1994 ) :
4 L 1 ⁄ RLT $ ในð 2 Þ = มแม็กซ์ ( 2 )
ที่ RLT เป็นญาติเวลาความล่าช้าซึ่งถือว่าเป็นโรงเรียน - จี้ของอุณหภูมิการเก็บรักษา เมื่อติดตั้งเพื่อทดลองล่าช้าเวลาข้อมูลมแม็กซ์ ในสมการ ( 2 ) ถูกแทนด้วยสมการ ( 1 ) เช่น( B $ ( T  tmin ) 2 กับติดตั้งค่าพารามิเตอร์ B และ tmin .
ประสิทธิภาพของเชื้อ การพัฒนารูปแบบสำหรับผลของอุณหภูมิต่อมแม็กซ์ และประเมินโดยการเปรียบเทียบกับข้อมูลจากวรรณกรรม ( ตารางที่ 1 ) อคติและปัจจัยความถูกต้องได้ตามที่แนะนำโดย Ross ( 1996 )วัดค่าสัมพัทธ์เฉลี่ยระหว่างการคาดการณ์และสังเกตปัจจัยอคติ ส่วนปัจจัยด้านความถูกต้อง