Present experiment was couducted to

Present experiment was couducted to clone swamp bufalo and cattle embryos using i vitro matured swamp buffalo oocytes as recipient cytoplasts and swamp buffalo and cattle ear fibroblast cels (BEFC and CEFC) as door nuclei and examine the use of mouse fetal fibroblast cell as co-culture cell during embryos evelopment. Swamp buffalo ovaries were collected from slaughterhouse and cumulus oocyte complexes (COCs) were harvested by aspiration and then in vitro matured for 19-20 h. Matured oocytes were enucleatd by micromanipulation under an inverted microscope. Enucleation was confirmed by staiing the removed portion with Hoechst 33342. Individual donor cells of swamp buffalo or cattle ear fibroblast cells (diameter 14-16 micro m) were inserted into perivitelling space of reciient cytoplasts by micromanipulation. The couplets were fused with two DC pulses of 30 V/couplet for 15 micro sec each time in fusion medium. After fusion, reconstructed embryos were immediately activated with A23187 followed by culturing in SOFaa-10 which containing cycloheximide and cytochalasin D for 5 h, then cultured in SOFaa supplemented with 1 percent FCS (SOFaa-1) for 2 days. The embryos at 8-cell stage were harvested and assigned to co-cultured wit frozen-thawed buffalo oviductal epithelial cell (BOEC) or mouse embryonic fibroblast cell (MEFC) for another 2 days then replaced twice with SOFaa-10 every 2 days. The result from the experiment demonstrated that the embryos reconstructed by both BEFC and CEFC could developed nearly the same rate to 8 cell (53.1 vs 51.0 percent), morula (19.8 vs 17.0 percent), and blastocyst stage (15.6 vs 13.9 percent) when co-culture with BOEC. While MEFC could support the recostructed embryos developed to morula at the same rate (10.8 percent) and very low rate to blastocyst stage (2.8 vs. 1.3 percent). The cloned cattle embryos could be produced using swamp buffalo oocytes as recipient cytoplasts and co-culture with MEFC could support the development but not as good as BOEC. The development of the cloned cattle embryos in the recipiet cows will be further studied.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การทดลองในปัจจุบันได้รับการ couducted การโคลน Bufalo บึงและวัวควายตัวอ่อนหลอดทดลองโดยใช้ i สุกบึงไข่ควายเป็น cytoplasts ผู้รับและบึงโคกระบือและหู cels ลาสท์ (befc และ CEFC) เป็นนิวเคลียสประตูและตรวจสอบการใช้งานของเมาส์เซลล์ลาสท์ของทารกในครรภ์เป็นวัฒนธรรมร่วม เซลล์ตัวอ่อนในระหว่างการพัฒนาค้นคว้าบึงรังไข่ควายถูกเก็บมาจากโรงฆ่าสัตว์และไข่ซ้อนคอมเพล็กซ์ (cocs) มีการเก็บเกี่ยวโดยความทะเยอทะยานแล้วในหลอดทดลองครบ 19-20 ชั่วโมง ไข่สุกได้โดย enucleatd micromanipulation ภายใต้กล้องจุลทรรศน์คว่ำ enucleation ได้รับการยืนยันโดย staiing ส่วนออกด้วย Hoechst 33342เซลล์ของผู้บริจาคแต่ละควายหรือวัวบึงหูเซลล์ลาสท์ (เส้นผ่าศูนย์กลาง 14-16 ไมโครเมตร) มีแทรกลงในพื้นที่ของ perivitelling cytoplasts reciient โดย micromanipulation กลอนที่ถูกหลอมรวมกับสองพั dc 30 v / คู่ 15 ไมโครวินาทีในแต่ละครั้งในสื่อฟิวชั่น หลังจากฟิวชั่นตัวอ่อนที่ถูกสร้างขึ้นใหม่ใช้งานได้ทันทีด้วย a23187 ตามด้วยเลี้ยงใน sofaa-10 ซึ่งมี cycloheximide และ cytochalasin งเป็นเวลา 5 ชั่​​วโมงจากนั้นเลี้ยงใน sofaa เสริมด้วย 1 FCS ร้อยละ (sofaa-1) เป็นเวลา 2 วันตัวอ่อนในระยะ 8 เซลล์ถูกเก็บเกี่ยวและได้รับมอบหมายให้ปัญญาร่วมเลี้ยงแช่แข็งละลาย-ควายเซลล์เยื่อบุผิวท่อนำไข่ (boec) หรือเมาส์เซลล์ตัวอ่อนลาสท์ (mefc) อีก 2 วันแล้วแทนที่ด้วยสอง sofaa-10 ทุก 2 วัน ผลจากการทดลองแสดงให้เห็นว่าตัวอ่อนสร้างขึ้นใหม่โดยทั้งสอง befc CEFC และสามารถพัฒนาเกือบอัตราเดียวกันถึง 8 เซลล์ (53.1 เทียบกับ 510 เปอร์เซ็นต์) มอรูล่า, (19.8 เทียบกับร้อยละ 17.0) และตัวอ่อนของเวที (15.6 เทียบกับ 13.9 เปอร์เซ็นต์) เมื่อวัฒนธรรมร่วมกับ boec ในขณะที่ mefc จะสนับสนุนตัวอ่อน recostructed พัฒนาเพื่อมอรูล่าในอัตราเดียวกัน (ร้อยละ 10.8) และอัตราที่ต่ำมากที่จะ blastocyst เวที (2.8 เทียบกับร้อยละ 1.3)โคลนตัวอ่อนวัวสามารถผลิตโดยใช้ไข่หนองควายเป็น cytoplasts ผู้รับและร่วมวัฒนธรรมด้วย mefc สามารถสนับสนุนการพัฒนา แต่ไม่ดีเท่าที่ boec การพัฒนาของตัวอ่อนโคลนวัวในวัว recipiet จะต้องมีการศึกษาต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทดลองอยู่เป็น couducted การโคลนบึงโคลน bufalo และวัวผมใช้หลอด matured หนองควายแช่สารละลายเป็นผู้รับ cytoplasts และกระบือวัว ear cels fibroblast (BEFC และ CEFC) เป็นประตูแอลฟา และตรวจสอบการใช้เมาส์ครรภ์ fibroblast เซลล์เซลล์วัฒนธรรมร่วมระหว่าง evelopment โคลน รังไข่ควายบึงได้รวบรวมจากบิดา และคอมเพล็กซ์ oocyte ลัส (COCs) เก็บเกี่ยวตามความใฝ่ฝันแล้วเพาะเลี้ยง matured สำหรับ 19-20 h. Matured แช่สารละลายถูก enucleatd โดย micromanipulation ภายใต้กล้องจุลทรรศน์การกลับหัว Enucleation ได้รับการยืนยัน โดย staiing ส่วนเอากับอย่างไร Hoechst 33342 ผู้บริจาคแต่ละเซลล์ของหนองควายหรือวัวหู fibroblast เซลล์ (14-16 เมตรขนาดเล็กเส้นผ่าศูนย์กลาง) ถูกใส่เข้าไปในพื้นที่ perivitelling reciient cytoplasts โดย micromanipulation Couplets ถูก fused กับสอง DC พัลส์ของ V 30 couplet สำหรับ 15 ไมโครวินาทีแต่ละครั้งในฟิวชั่น หลังจากหลอม โคลนที่สร้างขึ้นใหม่ได้ทันทีใช้ตาม SOFaa 10 culturing cycloheximide ซึ่งมี A23187 และ cytochalasin D สำหรับ h 5, cultured ใน SOFaa แล้ว เสริม ด้วย 1 เปอร์เซ็นต์ FCS (SOFaa-1) 2 วัน โคลนในระยะ 8 เซลล์เก็บเกี่ยว และให้ปัญญาร่วมอ่างแช่แข็ง-thawed ควาย oviductal epithelial เซลล์ (BOEC) หรือเซลล์ตัวอ่อน fibroblast เมาส์ (MEFC) อีก 2 วัน แล้วแทนที่ ด้วย SOFaa-10 ครั้งทุก 2 วัน ผลจากการทดลองแสดงว่า โคลนเชิดทั้ง BEFC และ CEFC สามารถพัฒนาเกือบอัตราเดียว 8 เซลล์ (53.1 กับ 510 เปอร์เซ็นต์), ระยะ morula (19.8 เทียบกับ 17.0 เปอร์เซ็นต์), และอดีต (ไม่เกิน 15.6 13.9 เทียบกับร้อยละ) เมื่อร่วมวัฒนธรรมกับ BOEC ในขณะที่ MEFC อาจสนับสนุนโคลน recostructed พัฒนาให้ morula ในอัตราเดียวกัน (ร้อยละ 10.8) และอัตราต่ำมากระยะบลาสโตซิสท์ (2.8 เทียบกับร้อยละ 1.3) โคลนโคลนวัวอาจผลิตโดยใช้หนองควายแช่สารละลายเป็นวัฒนธรรมร่วมกับ MEFC และ cytoplasts ผู้รับได้สนับสนุนการพัฒนา แต่ไม่ดีเท่า BOEC การพัฒนาของโคลนโคลนวัวในวัว recipiet จะศึกษาเพิ่มเติม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในปัจจุบันมีการทดลองในการถอดแบบข้อมูล( Clone ) couducted bufalo หนองน้ำและสัตว์น( gene )โดยใช้ผมเองครบกำหนดหนองควาย oocytes เป็นผู้รับ cytoplasts และหนองควายและวัวควายหู fibroblast cels ( befc และ cefc )เป็นประตูเป็นแกนกลางและตรวจสอบการใช้เมาส์เฝ้าระวังและติดตามสัญญาณชีพทารก fibroblast เซลล์เป็นความร่วมมือทางวัฒนธรรมระหว่างเซลล์ evelopment น( gene ).รังไข่ควายหนองน้ำจะถูกรวบรวมจากโรงฆ่าสัตว์และคอมเพล็กซ์ oocyte cumulus ( cocs )ได้เก็บเกี่ยวโดยความใฝ่ฝันถึงแล้วใน Vitro ครบกำหนดสำหรับ 19-20 19-20 19-20 H oocytes ครบกำหนดเป็น enucleatd โดย micromanipulation ภายใต้ กล้องจุลทรรศน์ที่ติดตั้งแบบกลับด้าน enucleation เป็นการยืนยันโดย staiing บางส่วนถูกลบออกไปแล้วด้วย hoechst 33342เซลล์ผู้บริจาครายบุคคลของควายหนองน้ำหรือเซลล์ fibroblast หูสัตว์(เส้นผ่านศูนย์กลาง 14-16 14-16 14-16 ม. micro )ก็ใส่เข้าไปยังพื้นที่ perivitelling ของ cytoplasts reciient โดย micromanipulation couplets ที่ถูกคำสั่งย่อยถูกรวมเข้าด้วยกันพร้อมด้วยสองจะแสดงไฟกะพริบไฟ DC 30 โคลงบทละสองบรรทัด V /สำหรับวันที่ 15 ก.ล.ต. Micro ในแต่ละครั้งในขนาดกลางแบบผสมผสาน หลังจากการผสมผสานน( gene )ก่อสร้างขึ้นใหม่เมื่อพ.ศ.ได้ทันทีที่เปิดใช้งาน ด้วย 23187 ตามด้วยเปรียบใน sofaa - 10 ซึ่งประกอบด้วย cycloheximide และ cytochalasin D 5 H ,จากนั้นมีวัฒนธรรมใน sofaa เพิ่มเติมพร้อมด้วย 1% FCS ( sofaa - 1 )สำหรับ 2 วัน.ที่น( gene )ที่ 8 - เซลล์เวทีได้เก็บเกี่ยวและถูกกำหนดให้กับเพื่อนร่วมทางวัฒนธรรมปัญญาแช่แข็ง - ละลายควาย oviductal epithelial เซลล์( boec )หรือเมาส์ก่อหวอด fibroblast เซลล์( mefc )อีก 2 วันแล้วจึงเปลี่ยนสองครั้งด้วย sofaa - 10 ทุก 2 วัน. ผลที่ได้จากการทดลองที่แสดงให้เห็นว่าน( gene )ที่ก่อสร้างขึ้นใหม่เมื่อพ.ศ.โดย befc และ cefc ทั้งสองไม่สามารถพัฒนาขึ้นเกือบจะเท่ากับอัตราค่า 8 เซลล์( 53.1 เมื่อเทียบกับ 510% ) morula ( 19.8 เมื่อเทียบกับ 17.0% )และ blastocyst เวที( 15.6 เมื่อเทียบกับร้อยละ 13.9 )เมื่อเพื่อนร่วมทางวัฒนธรรมพร้อมด้วย boec . ในขณะที่ mefc ไม่สามารถสนับสนุน recostructed น( gene )ที่ได้รับการพัฒนาขึ้นมาเพื่อ morula ในอัตราเดียวกันกับที่( 10.8% )และอัตราค่าบริการระดับต่ำเป็นอย่างมากถึงขั้น blastocyst ( 2.8 เมื่อเทียบกับ 1.3 เปอร์เซ็นต์)น( gene )สัตว์ที่ถูกโคลนไม่ได้โดยใช้ควายหนองน้ำ oocytes cytoplasts เป็นผู้รับและความร่วมมือทางวัฒนธรรมพร้อมด้วย mefc ไม่สามารถสนับสนุนการพัฒนาแต่ไม่ได้ดีเท่ากับ boec การพัฒนาของน( gene )สัตว์ที่ถูกโคลนในวัว recipiet จะศึกษาเพิ่มเติม