In an attempt to elucidate the mech

In an attempt to elucidate the mechanism of
induction of lipase expression, we have set up a search method for genes controlling lipase
expression by use of a cosmid library containing fragments of P. alcaligenes genomic DNA.
A screen for lipase hyperproduction resulted in the selection of multiple transformants, of
which the best-producing strains comprised cosmids that shared an overlapping genomic
fragment. Within this fragment, two previously unidentified genes were found and named
lipQ and lipR. Their encoded proteins belong to the NtrBC family of regulators that
regulate gene expression via binding to a specific upstream activator sequence (UAS).
Such an NtrC-like UAS was identified in a previous study in the P. alcaligenes lipase
promoter, strongly suggesting that LipR acts as a positive regulator of lipase expression.
The regulating role could be confirmed by a down-regulated lipase expression in a strain
with an inactivated lipR gene and a threefold increase in lipase yield in a large-scale
fermentation when expressing the lipQR operon from the multicopy plasmid pLAFR3.
Finally, cell-free protein extracts of a LipR-overexpressing strain caused a retardation of
the lipase promoter fragment in a band shift assay. Our results indicate that lipase
expression in P. alcaligenes is under the control of the LipQR two-component system.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในความพยายามที่จะอธิบายกลไกของ
การเหนี่ยวนำการแสดงออกของเอนไซม์ไลเปส, เราได้ตั้งค่าการค้นหายีนที่ควบคุมเอนไซม์ไลเปส
แสดงออกโดยการใช้ห้องสมุด cosmid ที่มีชิ้นส่วนของดีเอ็นเอจีโนมพี Alcaligenes.
หน้าจอสำหรับการ hyperproduction เอนไซม์ไลเปสส่งผลในการเลือก transformants หลายแห่ง
ซึ่งสายพันธุ์ที่ดีที่สุดที่ผลิตประกอบด้วย cosmids ที่ใช้ร่วมกันจีโนมที่ทับซ้อนกัน
ส่วน ภายในส่วนนี้สองยีนที่ไม่ได้ระบุก่อนหน้านี้ถูกค้นพบและตั้งชื่อ
lipQ และ lipR โปรตีนเข้ารหัสของพวกเขาอยู่ในครอบครัวของ NtrBC หน่วยงานกำกับดูแลที่
ควบคุมการแสดงออกของยีนผ่านผูกพันกับลำดับกระตุ้นต้นน้ำเฉพาะ (UAS).
ดังกล่าว UAS NTRC เหมือนถูกระบุในการศึกษาก่อนหน้านี้ในพี Alcaligenes เอนไซม์ไลเปส
โปรโมเตอร์ขอบอกว่า LipR ทำหน้าที่เป็นผู้กำกับดูแลในเชิงบวกของการแสดงออกของเอนไซม์ไลเปส.
บทบาทควบคุมจะได้รับการยืนยันจากการแสดงออกของเอนไซม์ไลเปสควบคุมลงในสายพันธุ์
ที่มียีน lipR การใช้งานและเพิ่มขึ้นสามเท่าในอัตราผลตอบแทนเอนไซม์ไลเปสในขนาดใหญ่
หมักเมื่อแสดง operon lipQR จาก พลาสมิด multicopy pLAFR3.
ในที่สุดสารสกัดจากโปรตีนของเซลล์ฟรีของความเครียด LipR-overexpressing ก่อให้เกิดการชะลอตัวของ
ส่วนก่อการเอนไซม์ไลเปสในการวิเคราะห์การเปลี่ยนแปลงวง ผลของเราแสดงให้เห็นว่าเอนไซม์ไลเปส
ในการแสดงออก Alcaligenes พีอยู่ภายใต้การควบคุมของระบบ LipQR สององค์ประกอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในความพยายามที่จะอธิบายกลไกของการเหนี่ยวนำเอนไซม์
การแสดงออก เราได้ตั้งค่า ค้นหาวิธีการสำหรับยีนที่ควบคุมการแสดงออกของเอนไซม์
โดยใช้ cosmid ห้องสมุดที่มีชิ้นส่วนของหน้า Alcaligenes genomic DNA .
หน้าจอสำหรับเอนไซม์ hyperproduction ให้เลือกหลายพลาสมิดของ
,ซึ่งดีที่สุดผลิตสายพันธุ์ ประกอบด้วย คอสมิดที่แบ่งปันกันจีโนม
เศษ . ในส่วนนี้ ทั้งสองได้พบก่อนหน้านี้ ยีนชื่อ
lipq และ lipr . ของโปรตีนเข้ารหัสเป็นของ ntrbc ครอบครัวของหน่วยงานที่ควบคุมการแสดงออกของยีนผ่าน
แสดงลำดับกิจกรรมโดยเฉพาะ
( UAS )เช่น ntrc เหมือนน้ำแข็งถูกระบุในการศึกษาก่อนหน้านี้ในหน้า Alcaligenes ไลเปส
โปรโมเตอร์ ขอแนะนำว่า lipr ทำหน้าที่ควบคุมการแสดงออกของเอนไซม์ในเชิงบวก .
ควบคุมบทบาทอาจจะได้รับการยืนยันโดยการควบคุมเอนไซม์ไลเปสลงการแสดงออกในสายพันธุ์
ด้วยซึ่ง lipr ยีนและเพิ่มขึ้นสามเท่า ในถั่วเหลืองมีขนาดใหญ่
หมักเมื่อแสดง lipqr โอเปอรอนจาก plafr3 พลาส multicopy .
ในที่สุด การสังเคราะห์โปรตีนสารสกัดจาก lipr overexpressing ความเครียดที่เกิดขึ้น
เอนไซม์จำเพาะในการตั้งวงกะแบคทีเรีย ผลของเราระบุว่าไลเปส
การแสดงออกในหน้า Alcaligenes อยู่ภายใต้การควบคุมของระบบแบบ lipqr .