2.7. In situ hybridization Material

2.7. In situ hybridization
Materials for in situ hybridization were sampled and immediately fixed in RNase-free FAA solution (4% formaldehyde, 10% aceticacid and 50% ethanol). Paraffin sections were obtained according to the method of Ma et al. [27]. A 68-bp fragment of OsLTPL36 cDNA was amplified from the seeds of the wildtype with the ISH-F and ISH-R primer (Table S5). The PCR product was cloned into pGM-Tvector (TaKaRa), which was digested with Pst I and Apa I. Subsequently, the product was transcribed in vitro under the control ofT7 or SP6 promoter with RNA polymerase using the DIG RNA labeling kit (Roche). The digoxigenin labeled antisense or sense RNA probe hybridization and immunological detection of the hybridizedprobes were performed using the procedure of Kouchi and Hata Finally, sections were photographed under Olympus BX53microscope using SPOT color camera.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7 hybridization ในแหล่งกำเนิด วัสดุสำหรับการ hybridization ในแหล่งกำเนิดถูกตัวอย่าง และแก้ไขทันทีในโซลูชันฟรี RNase FAA (ฟอร์มาลดีไฮด์ 4%, 10% aceticacid และ 50% เอทานอล) พาราฟินได้รับตามวิธีการของ Ma et al. [27] ส่วน 68-bp ของ OsLTPL36 cDNA คือขยายจากเมล็ดของ wildtype อิช-F และ R อิชรองพื้น (โต๊ะ S5) ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกโคลนเป็น pGM-Tvector (TaKaRa), ซึ่งถูกย่อยสลายกับ Pst ผมและป้าฉัน ต่อมา ผลิตภัณฑ์ถูกทับศัพท์ในหลอดทดลองภายใต้การควบคุม ofT7 หรือโปรโมเตอร์ SP6 กับอาร์เอ็นเอพอลิเมอเรส RNA ที่ขุดติดฉลากชุด (Roche) ใช้ Digoxigenin ที่ชื่อ antisense หรือ hybridization รบรู้สึก RNA และการปรับภูมิคุ้มกันของ hybridizedprobes การดำเนินการโดยใช้กระบวนการของ Kouchi และ Hata สุดท้าย ส่วนที่ได้ถ่ายภาพภายใต้ BX53microscope ของ Olympus กล้องสีจุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7 ในการผสมพันธุ์แหล่งกำเนิด
วัตถุดิบในแหล่งกำเนิดพันธุ์เก็บตัวอย่างและการแก้ไขทันทีใน RNase ฟรีวิธีการแก้ปัญหาจอห์นฟา (ไฮด์ 4% aceticacid 10% และเอทานอล 50%) ส่วนพาราฟินที่ได้รับตามวิธีการของแม่ et al, [27] ส่วน 68 bp ของ OsLTPL36 cDNA ถูกขยายจากเมล็ดของ wildtype กับ ISH-F และ ISH-R ไพรเมอร์ (ตาราง S5) ผลิตภัณฑ์ PCR เป็นโคลนเข้าไปใน PGM-Tvector (Takara) ซึ่งถูกย่อยด้วย Pst I และ Apa I. ต่อจากนั้นผลิตภัณฑ์ที่ถูกคัดลอกในหลอดทดลองภายใต้ ofT7 ควบคุมหรือ SP6 ก่อการกับโพลิเมอร์อาร์เอ็นเอโดยใช้ชุดการติดฉลาก DIG อาร์เอ็นเอ (Roche) . digoxigenin ที่มีข้อความหรือความรู้สึกแอนตี้สอบสวน RNA การผสมพันธุ์และการตรวจสอบระบบภูมิคุ้มกันของ hybridizedprobes ถูกดำเนินการโดยใช้ขั้นตอนของการ Kouchi และตะสุดท้ายส่วนที่ถูกถ่ายภาพภายใต้โอลิมปั BX53microscope ใช้กล้องจุดสี