Non-specific binding may be control

Non-specific binding may be controlled using any one of a number of known techniques such as, for example, blocking the membrane with protein containing solutions, additions of เฮเทอโรโลกัส RNA, DNA, and SOS to the การไฮบริไดซ์ buffer, and treatment with Rnase.
For non-homologous probes, a series of hybridizations may be performed by varying one of
(i) progressively lowering the annealing temperature (for example from 68°C to 42°C) or (ii) progressively lowering the ฟอร์มาไมด์ concentration (for example from 50% to 0%). The skilled artisan is aware of various parameters which may be altered during การไฮบริไดซ์ and which will either maintain or change the ความเข้มงวด conditions.
Besides the การไฮบริไดซ์ conditions, specificity of การไฮบริไดซ์ typically also depends on
the function of post-การไฮบริไดซ์ washes. To remove background resulting from non• specific การไฮบริไดซ์, samples are washed with dilute salt solutions. Critical factors of such washes include the ionic strength and temperature of the final wash solution: the lower the salt concentration and the higher the wash temperature, the higher the ความเข้มงวด of the wash. Wash conditions are typically performed at or below การไฮบริไดซ์ ความเข้มงวด. A
positive การไฮบริไดซ์ gives a signal that is at least twice of that of the background.
Generally, suitable stringent conditions for nucleic acid การไฮบริไดซ์ assays or gene amplification detection procedures are as set forth above. More or less stringent conditions may also be selected. The skilled artisan is aware of various parameters which may be altered during washing and which will either maintain or change the ความเข้มงวด conditions.
For example, typical high ความเข้มงวด การไฮบริไดซ์ conditions for DNA hybrids longer than 50 nucleotides encompass การไฮบริไดซ์ at 65°C in 1x SSC or at 42°C in 1x SSC and 50% ฟอร์มาไมด์, followed by washing at 65°C in 0.3x SSC. Examples of medium ความเข้มงวด การไฮบริไดซ์ conditions for DNA hybrids longer than 50 nucleotides encompass
การไฮบริไดซ์ at 50°C in 4x SSC or at 40°C in 6x SSC and 50% ฟอร์มาไมด์, followed by
washing at 50°C in 2x SSC. The length of the hybrid is the anticipated length for the hybridising nucleic acid. When nucleic acids of known sequence are ไฮบริไดซ์d, the hybrid length may be determined by aligning the sequences and identifying the conserved regions described herein. 1 is 0.15M NaCl 15mM sodium citrate; the การไฮบริไดซ์
solution and wash solutions may additionally include 5x Denhardt's reagent, 0.5-1.0% SOS,
100 µ g/ml denatured, fragmented salmon sperm 0.5% sodium pyrophosphate.
the purposes of defining the level of ความเข้มงวด, reference can be made to Sambrook et
al. (2001) Molecular Cloning: a laboratory manual, 3rct Edition, Cold Spring Harbor
Laboratory Press, , New York or to Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley
& Sons, N.Y. (1989 and yearly updates).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไม่ใช่เฉพาะที่มีผลผูกพันอาจจะควบคุมการใช้คนใดคนหนึ่งของจำนวนของเทคนิคที่รู้จักกันเช่นตัวอย่างเช่นการปิดกั้นเมมเบรนที่มีโปรตีนที่มีการแก้ปัญหาการเพิ่มของเฮเทอโรโลกัสอาร์เอ็นเอดีเอ็นเอและ SOS เพื่อการไฮบ ริไดซ์บัฟเฟอร์และการรักษาด้วย RNase.
สำหรับยานสำรวจที่ไม่คล้ายคลึงกันชุดของ hybridizations อาจจะดำเนินการที่แตกต่างกันโดยหนึ่ง
(i) ความก้าวหน้าลดอุณหภูมิการหลอม (เช่นจาก 68 ° C ถึง 42 ° C) หรือ (ii ) มีความก้าวหน้าลดฟอร์มาไมด์เข้มข้น (เช่นจาก 50% ถึง 0%) ช่างฝีมือที่มีทักษะตระหนักถึงพารามิเตอร์ต่างๆซึ่งอาจจะมีการเปลี่ยนแปลงในช่วงการไฮบริไดซ์และอาจจะรักษาหรือเปลี่ยนแปลงเงื่อนไขความเข้มงวด.
นอกจากการไฮบริไดซ์เงื่อนไขจำเพาะของการไฮบริไดซ์โดยทั่วไป ยังขึ้นอยู่กับ
การทำงานของการโพสต์การไฮบริไดซ์ล้าง ในการลบพื้นหลังที่เกิดจากการที่ไม่เฉพาะเจาะจง•การไฮบริไดซ์ตัวอย่างจะถูกล้างด้วยสารละลายเกลือเจือจาง ปัจจัยที่สำคัญของการล้างดังกล่าวรวมถึงความแรงของไอออนิกและอุณหภูมิของการแก้ปัญหาล้างสุดท้าย: ต่ำกว่าความเข้มข้นของเกลือและสูงกว่าอุณหภูมิล้างที่สูงกว่าความเข้มงวดของการล้าง เงื่อนไขล้างจะดำเนินการโดยทั่วไปที่หรือต่ำกว่าการไฮบริไดซ์ความเข้มงวด
บวกการไฮบริไดซ์ให้สัญญาณที่มีอย่างน้อยสองครั้งที่ของพื้นหลัง.
โดยทั่วไปเงื่อนไขที่เข้มงวดเหมาะสำหรับกรดนิวคลีอิกการไฮบริไดซ์หรือขั้นตอนการตรวจการตรวจสอบการขยายยีนมีการตั้งเป็นไว้ข้างต้น เงื่อนไขที่เข้มงวดมากหรือน้อยก็อาจได้รับการคัดเลือก ช่างฝีมือที่มีทักษะตระหนักถึงพารามิเตอร์ต่างๆซึ่งอาจจะมีการเปลี่ยนแปลงในช่วงซักผ้าและที่อาจจะรักษาหรือเปลี่ยนแปลงเงื่อนไขความเข้มงวด.
ยกตัวอย่างเช่นโดยทั่วไปสูงความเข้มงวดการไฮบริไดซ์เงื่อนไขสำหรับดีเอ็นเอลูกผสมนานกว่า 50 นิวคลีโอครอบคลุมการไฮ บริไดซ์ที่ 65 ° C ใน 1x หรือเอสเอสที่ 42 ° C ใน 1x SSC และ 50% ฟอร์มาไมด์ตามด้วยการซักผ้าที่ 65 ° C ใน SSC 0.3 เท่า ตัวอย่างของการสื่อความเข้มงวดการไฮบริไดซ์เงื่อนไขสำหรับดีเอ็นเอลูกผสมนานกว่า 50 นิวคลีโอครอบคลุม
การไฮบริไดซ์ที่ 50 ° C ใน SSC 4x หรือที่ 40 องศาเซลเซียสใน 6x SSC และ 50% ฟอร์มาไมด์ ตามด้วยการ
ซักผ้าที่ 50 ° C ใน 2x SSC ความยาวของไฮบริดเป็นระยะเวลาที่คาดการณ์ไว้สำหรับกรดนิวคลีอิก hybridising เมื่อกรดนิวคลีอิกของลำดับที่รู้จักกันเป็นไฮบริไดซ์ d ยาวไฮบริดอาจถูกกำหนดโดยจัดลำดับและระบุภูมิภาคอนุรักษ์อธิบายไว้ในที่นี้ 1 0.15M โซเดียมคลอไรด์ 15 มมโซเดียมซิเตรท; การไฮบริไดซ์
วิธีการแก้ปัญหาและการแก้ปัญหาล้างนอกจากนี้อาจรวมถึงสาร 5x Denhardt ของ 0.5-1.0% SOS,
100 μ g / ml เอทิลแอลกอฮอล์, อสุจิปลาแซลมอนแยกส่วน pyrophosphate โซเดียม 0.5%.
วัตถุประสงค์ของการกำหนดระดับของความเข้มงวดอ้างอิง สามารถทำ Sambrook et
al, (2001) โมเลกุลโคลน: คู่มือการตรวจทางห้องปฏิบัติการ, 3rct ฉบับฮาร์เบอร์หนาวฤดูใบไม้ผลิ
ห้องปฏิบัติการกดนิวยอร์กหรือโปรโตคอลปัจจุบันทางอณูชีววิทยา, John Wiley
& Sons, นิวยอร์ก (ปี 1989 และการปรับปรุงเป็นประจำทุกปี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไม่เฉพาะเจาะจงผูกอาจจะควบคุมการใช้ใด ๆของจำนวนของเทคนิคที่รู้จักเช่น , ตัวอย่างเช่น , ปิดกั้นเยื่อกับโปรตีนที่มีโซลูชั่นการเพิ่มของ RNA , DNA เฮเทอโรโลกัสและขอความช่วยเหลือไปยังการไฮบริไดซ์บัฟเฟอร์ และการรักษาด้วยเลส .
ไม่ใช่โฮโมโลกัส ฟิวส์ ชุด hybridizations อาจจะดำเนินการโดยแปรหนึ่ง ของ
( ผม ) เพื่อลดอุณหภูมิการอบอ่อน ( เช่นจาก 68 ° C ถึง 42 ° C ) หรือ ( 2 ) โดยการลดฟอร์มาไมด์สมาธิ ( ตัวอย่างเช่น จาก 50% เป็น 0% ) โดยช่างฝีมือที่มีทักษะจะทราบตัวแปรต่างๆ ซึ่งอาจมีการเปลี่ยนแปลงในช่วงการไฮบริไดซ์ซึ่งอาจจะรักษาหรือเปลี่ยนแปลงเงื่อนไขความเข้มงวด .
นอกจากนี้เงื่อนไขการไฮบริไดซ์ ความจำเพาะของการไฮบริไดซ์มักจะขึ้นอยู่กับ
ฟังก์ชั่นของโพสต์ - การไฮบริไดซ์ถล่ม . การลบพื้นหลังที่ไม่เฉพาะเจาะจงการไฮบริไดซ์ที่เกิดจากแต่ละตัวอย่างจะถูกล้างด้วยสารละลายเกลือเจือจาง . ปัจจัยสําคัญ เช่น ถล่ม รวมถึงความแรงไอออนและอุณหภูมิของสารละลายล้างสุดท้าย :การลดความเข้มข้นของเกลือ และสูงกว่าล้างอุณหภูมิ สูงกว่าความเข้มงวดของล้าง สภาพล้างมักจะแสดงที่ด้านล่าง การไฮบริไดซ์หรือความเข้มงวด . a
การไฮบริไดซ์บวกให้สัญญาณว่ามีอย่างน้อยสองของที่ของพื้นหลัง
โดยทั่วไปเงื่อนไขที่เข้มงวด เหมาะสำหรับใช้การไฮบริไดซ์กรดนิวคลีอิกกรดหรือขั้นตอนการตรวจหายีน ( ตามที่ระบุไว้ข้างต้น มากกว่าหรือน้อยกว่าเงื่อนไขที่เข้มงวดอาจจะเลือก โดยช่างฝีมือที่มีทักษะจะทราบค่าพารามิเตอร์ต่าง ๆ ซึ่งอาจจะมีการเปลี่ยนแปลงระหว่างการซักและซึ่งจะรักษาหรือเปลี่ยนแปลงเงื่อนไขความเข้มงวด .
ตัวอย่างเช่นโดยทั่วไปสูงความเข้มงวดการไฮบริไดซ์เงื่อนไขสำหรับดีเอ็นเอลูกผสมมากกว่า 50 คู่ที่ 65 ° C ในความการไฮบริไดซ์ 1x SSC หรือ 42 °องศาเซลเซียสใน SSC 1x และ 50% ฟอร์มาไมด์ตามล้างที่อุณหภูมิ 65 องศา C ใน 0.3x SSC . ตัวอย่างของสื่อความเข้มงวดการไฮบริไดซ์เงื่อนไขสำหรับดีเอ็นเอลูกผสมนานกว่า 50 นิวคลีโอไทด์ห้อมล้อม
การไฮบริไดซ์ 50 ° C ใน SSC ที่ 40 ° C หรือ 4x ใน SSC 6x และ 50% ฟอร์มาไมด์ลงมาซัก 50 ° C
2x SSC . ความยาวของไฮบริดจะคาดความยาวสำหรับ hybridising กรดนิวคลีอิก เมื่อรู้จักลำดับกรดนิวคลีอิกเป็นไฮบริไดซ์ D ความยาวไฮบริดอาจจะกำหนดโดยการจัดเรียงลำดับและการระบุบริเวณอนุรักษ์ไว้ ณที่นี้1 0.15m ขนาด 15mm โซเดียมซิเตรต ; การไฮบริไดซ์
โซลูชั่นและล้างโซลูชั่นอาจนอกจากนี้รวมถึง 5x denhardt รีเอเจนต์ คาดว่า % SOS ,
100 µ g / ml ใช้ , การแยกส่วนสเปิร์มของแซลมอน 0.5 % โซเดียมไพโร .
วัตถุประสงค์ของการกำหนดระดับของความเข้มงวดอ้างอิง สามารถทำให้ sambrook et
อัล ( 2001 ) การโคลน : ห้องปฏิบัติการ 3rct Edition , คู่มือเจ้าท่าหนาวฤดูใบไม้ผลิ
ปฏิบัติการกด , New York หรือโปรโตคอลในปัจจุบันอณูชีววิทยา , จอห์นนิ่ง
&บุตรชาย , นิวยอร์ก ( 1989 และรายปี
การปรับปรุง )