The serial sections were rehydrated

The serial sections were rehydrated (100–50% EtOH) and
washed in PBS several times. Then the sections were treated with
proteinase K (10 lg/ml in 1X PBS) at room temperature for 8 or
10 min and washed with phosphate-buffered saline with Tween-
20 (PBST) and PBS. The sections were then prehybridized in the
prehybridization buffer for 1 h at 68 C and hybridized with the
sense or antisense digoxigenin-labeled RNA probes (1 lg/ml) in
the hybridization buffer (50% formamide, 5X SSC, 500 lg/ml tRNA,
50 lg/ml heparin, and 0.1% Tween-20) at 68 C overnight. The sections
were allowed to come to room temperature for 10 min,
rinsed twice with buffer containing 25% formamide, 1X SCC, and
0.1% Tween-20 at 60 C for 15 min, and blocked with 2% blocking
reagent (Roche, Mannheim, Germany), 2% normal goat serum and
PBST at room temperature for 1 h. Then the sections were incubated
with an alkaline phosphatase-conjugated sheep anti-digoxigenin
antibody (Roche, Penzberg, Germany) (dilution 1:2,000 in 2%
blocking reagent) overnight at 4 C. Afterwards, the sections of gill,
kidney and intestine were stained with NTMT (100 mM NaCl,
100 mM Tris–HCl, pH 9.5, 50 mM Mg2Cl and 0.1% Tween-20),
which was followed by NBT/BCIP staining. For the purpose of a
comparison, all the sections were stained with NBT/BCIP for exactly
2 h

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ส่วนพอร์ตอนุกรมถูก rehydrated (100 – 50% EtOH) และล้างหลายครั้งใน PBS แล้วส่วนได้รับการรักษาด้วยproteinase K (10 lg/ml ใน 1 X PBS) ที่อุณหภูมิห้องสำหรับ 8 หรือ10 นาที และล้าง ด้วยน้ำเกลือฟอสเฟต buffered กับ Tween -20 (PBST) และ PBS ส่วนที่ prehybridized แล้วในprehybridization บัฟเฟอร์สำหรับ 1 h ที่ 68 C และผสมพันธุ์ด้วยการความรู้สึกหรือ antisense digoxigenin ชื่ออาร์เอ็นเอคลิปปากตะเข้ (1 lg/ml) ในบัฟเฟอร์การ hybridization (50% formamide, 5 X SSC, lg 500 ml tRNA50 เฮพาริน lg/ml และ 0.1% Tween-20) ที่ 68 C นอน ส่วนได้รับอนุญาตให้มาที่อุณหภูมิห้องใน 10 นาทีrinsed ด้วยบัฟเฟอร์ประกอบด้วย formamide 25%, 1 X SCC สอง และ0.1% Tween-20 ที่ 60 C สำหรับ 15 นาที และบล็อกกับบล็อก 2%รีเอเจนต์ (โร มา เยอรมนี) เซรั่มครีมปกติ 2% และPBST ที่อุณหภูมิห้องใน 1 ชั่วโมง แล้วส่วนถูก incubatedมีการแกะอัลคาไลน์ฟอสฟาเตสกลวงต่อต้าน-digoxigeninแอนติบอดี (Roche, Penzberg เยอรมนี) (1:2,000 เจือจาง 2%รีเอเจนต์บล็อก) ค้างคืนที่ 4 ค.ภายหลัง ส่วนของเหงือกไตและลำไส้มีสี ด้วย NTMT (100 มม. NaClทริสเรทติ้ง – HCl 100 มม. pH 9.5, 50 มม. Mg2Cl และ 0.1% Tween-20),ที่ถูกตาม โดยเอ็นบี ที/BCIP ย้อมสี เพื่อเป็นการเปรียบเทียบ ทุกส่วนมีสีกับเอ็นบี ที/BCIP สำหรับทุกประการ2 h

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ส่วนอนุกรมถูก rehydrated (100-50% EtOH) และ
ล้างในหลายครั้งพีบีเอส จากนั้นส่วนที่ได้รับการรักษาด้วย
โปร K (10 LG / ml ใน 1X พีบีเอส) ที่อุณหภูมิห้องเป็น 8 หรือ
10 นาทีและล้างด้วยน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์กับ Tween-
20 (PBST) และพีบีเอส ส่วนที่ถูก prehybridized แล้วใน
บัฟเฟอร์ prehybridization เวลา 1 ชั่วโมง 68 ซีและไฮบริดที่มี
ความรู้สึกหรือ antisense digoxigenin ที่มีข้อความโพรบอาร์เอ็นเอ (1 LG / ml) ใน
บัฟเฟอร์ผสมพันธุ์ (50% formamide, 5X เอสเอส 500 แอลจี / ml tRNA ,
LG 50 / เฮมล. และ 0.1% Tween-20) ที่ 68 C ในชั่วข้ามคืน ส่วนที่
ได้รับอนุญาตให้มาที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที
ล้างครั้งที่สองที่มีบัฟเฟอร์ที่มี formamide 25% 1X SCC และ
0.1% Tween-20 ที่ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาทีและถูกปิดกั้นด้วย 2% ปิดกั้น
สาร (โรชไฮม์ เยอรมนี), 2% เซรั่มแพะปกติและ
PBST ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง จากนั้นส่วนที่ถูกบ่ม
กับแกะอัลคาไลน์ฟอสฟา-ผันต่อต้าน digoxigenin
แอนติบอดี (Roche, Penzberg เยอรมนี) (เจือจาง 1: 2,000 ใน 2%
สารสกัดกั้น) ค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียสหลังจากนั้นในส่วนของเหงือก,
ไตและลำไส้ได้ ย้อมด้วยสี NTMT (100 มิลลิโซเดียมคลอไรด์,
100 มิลลิ Tris-HCl, พีเอช 9.5, 50 มิลลิ Mg2Cl และ 0.1% Tween-20)
ซึ่งตามมาด้วยการย้อมสี NBT / BCIP สำหรับวัตถุประสงค์ของ
การเปรียบเทียบทุกส่วนที่ถูกย้อมด้วยสี NBT / BCIP สำหรับตรง
2 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ต่อเนื่อง ส่วนยังได้ทำการ รีไฮเดรทม ( 100 – 50% แอลกอฮอล์ ) และ
ล้างใน PBS หลายครั้ง แล้วส่วนที่ได้รับการรักษาด้วยโปร
K ( 10 ) / ml ใน 1X PBS ) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 8
10 นาทีและล้างด้วยน้ำเกลือด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์น -
20 ( pbst ) และ PBS ส่วนที่เป็น prehybridized ใน
prehybridization บัฟเฟอร์เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่ 68 องศาเซลเซียส และโพร
ความรู้สึกหรือ antisense ติดป้าย RNA probes ( 1 ) / ml )
( บัฟเฟอร์ ( 50% Formamide , 5x SSC 500 มิลลิลิตรทีอาร์เอ็นเอ LG , LG
50 มิลลิลิตรเฮปารินและ 0.1% tween-20 ) 68 องศาเซลเซียส ในชั่วข้ามคืน ส่วน
อนุญาตให้มาที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที
ล้างสองครั้งกับบัฟเฟอร์ที่มี 25 % ฟอร์มาไมด์ , 1x SCC และ
0.1% tween-20 ที่ 60 C เป็นเวลา 15 นาที และถูกปิดกั้นด้วย 2% บล็อก
Reagent ( โรเช่ ,Mannheim , เยอรมัน ) , 2 % ปกติแพะซีรั่ม
pbst ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง จากนั้นส่วนที่ถูกบ่ม
กับ alkaline phosphatase conjugated แอนติบอดีต่อต้าน 368
แกะ ( โรเช่ , penzberg , เยอรมนี ) ( เจือจาง 1:2000 2 %
กั้นสารเคมี ) ค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจากนั้น ส่วนเหงือก
ไตและลำไส้ถูกย้อมด้วยสี ntmt ( 100 mM NaCl
100 มม. โดย– HCl , pH 9.5mg2cl 50 มม. และ 0.1% tween-20 )
ซึ่งตาม NBT / bcip staining สำหรับวัตถุประสงค์ของ
เปรียบเทียบทุกส่วนถูกย้อมด้วยสี bcip NBT /
2 H จริงๆ