Chromatographic separation and isol

Chromatographic separation and isolation of the constituents

Based on the results obtained from NO inhibitory assay, CHCl3 soluble fraction was then chromatographed further to obtain 13 fractions (F1–13). Fraction F6 (IC50=2.8 µg/ml; 11.6 g) was chromatograped on silica gel (400 g) using a stepwise gradient of hexane, hexane- CHCl3 (9:1, 8:2, 6:4, 4:6, 2:8), CHCl3 and CHCl3-MeOH (9.5:0.5, 9:1) solvent system, to give four subfractions (A–D). Isolation of subfraction B by silica gel chromatography using hexane-CHCl3 (9:1) as eluent afforded compound 1 (26 mg) after recrystallized from hexane-MeOH as colorless needle. Moreover this fraction was repeated by column chromatography using similar eluting solvent system to afford mixture compounds of 2 and 3, which chromatographed on prep-TLC using hexane- CHCl3 (9:1, 4 elutions) to yield compounds 2 (5 mg) and 3 (4 mg) as colorless oil, respectively. Subfraction A (20 mg) was done by prep-TLC using hexane-CHCl3 (9:1, 4 elutions) to yield compounds 2 (6 mg) and 3 (5 mg) as colorless oil. Subfraction C of F6 was chromatographed on silica gel using the same solvent system as that of fraction 6 to give compound 4 (24 mg), together with compound 5 (32 mg). Subfraction D of F6 (12.7 mg) was chromatographed on prep-TLC using hexane-CHCl3 (1:1) as a developing solvent, to yield compound 7 (3 mg). Fraction F8 (IC50=1.7 µg/ml; 235 mg) was chromatographed using the same solvent system as that of fraction 6, finally afforded compound 6 (4 mg) and compound 8 (45 mg). In addition, this fraction was repeated by column chromatography using the same system to give two impure compounds, which chromatographed further on prep-TLC using hexane-CHCl3 (9:1, 4 elutions) to yield 9 (5 mg) and 10 (4 mg) as orange amorphous. Fraction F11 (IC50=1.6 µg/ml; 250 mg) was chromatographed by gel permeation chromatography on Sephadex LH-20 eluted with methanol. Subfraction F11/3 (11 mg) was chromatographed on prep-TLC using CHCl3-MeOH (95:5) as a developing solvent, to obtain compound 11 (4 mg). Subfraction F11 (96.2 mg) was chromatographed on silica gel using CHCl3 and CHCl3-MeOH (95:5) as eluent, to yield compound 12 (11 mg) and compound 13 (18 mg). Fraction F13 (IC50=21.5 µg/ml) was recrystallized from CHCl3-MeOH (9:1) as white powder of compound 14 (32.8 mg).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Chromatographic แยกและแยก constituentsขึ้นอยู่กับผลได้รับจากการทดสอบไม่ลิปกลอสไข CHCl3 ละลายเศษได้แล้ว chromatographed เพิ่มเติมรับเศษ 13 (F1 – 13) เศษ F6 (IC50 = 2.8 ไมโครกรัมเป็น เครื่อง/ml; 11.6 g) ถูก chromatograped ในซิลิก้าเจล (400 กรัม) การใช้การไล่ระดับโพลี โพลี-CHCl3 (9:1, 8:2, 6:4, 4:6, 2:8), CHCl3 และ CHCl3 ทานอ stepwise (9.5:0.5, 9:1) ตัวทำละลายระบบ ให้สี่ subfractions (A – D) แยกของ subfraction B โดยใช้เฮกเซน-CHCl3 (9:1) เป็น eluent chromatography เจลนี่ผสม 1 (26 มิลลิกรัม) หลังจาก recrystallized จากเฮกเซนทานอเป็นเข็มไม่มีสี นอกจากนี้ เศษนี้ถูกทำซ้ำ โดย chromatography คอลัมน์โดยใช้ระบบตัวทำละลาย eluting คล้ายสารผสมของ 2 และ 3 ที่ chromatographed ใน TLC เตรียมซื้อได้ใช้เฮกเซน-CHCl3 (9:1, 4 elutions) พบสารประกอบ 2 (5 มิลลิกรัม) และ 3 (4 มิลลิกรัม) เป็นน้ำมันไม่มีสี ตามลำดับ Subfraction (20 mg) ทำ โดยเตรียม TLC โดยใช้เฮกเซน-CHCl3 (9:1, 4 elutions) ให้ผลผลิตน้ำมันไม่มีสีเป็นสาร 2 (6 มิลลิกรัม) และ 3 (5 มิลลิกรัม) Subfraction C F6 มี chromatographed บนเจลใช้ระบบตัวทำละลายเดียวกันเป็นที่เศษ 6 ให้ผสม 4 (24 มิลลิกรัม), พร้อมผสม 5 (32 มิลลิกรัม) Subfraction D ของ F6 (12.7 มิลลิกรัม) มี chromatographed บน TLC เตรียมใช้เฮกเซน-CHCl3 (1:1) เป็นตัวทำละลายพัฒนา ให้ผสม (3 มิลลิกรัม) 7 เศษส่วน F8 (IC50 = 1.7 ไมโครกรัมเป็น เครื่อง/ml; 235 มิลลิกรัม) ถูก chromatographed โดยใช้ระบบตัวทำละลายเดียวกันที่เศษ 6 สุดท้าย นี่ผสม 6 (4 มิลลิกรัม) และ 8 (45 มิลลิกรัม) ผสมกัน เศษนี้ถูกทำซ้ำ โดยใช้ระบบเดียวกันเพื่อให้สอง impure สารประกอบ ที่ chromatographed เพิ่มเติม chromatography คอลัมน์บน TLC เตรียมใช้เฮกเซน-CHCl3 (9:1, 4 elutions) ให้ผลผลิต 9 (5 มิลลิกรัม) และ 10 (4 มิลลิกรัม) เป็นสีส้มไป เศษ F11 (IC50 = 1.6 ไมโครกรัมเป็น เครื่อง/ml; 250 มิลลิกรัม) ถูก chromatographed โดยเจลซึม chromatography บน Sephadex LH-20 eluted กับเมทานอล Subfraction F11/3 (11 มิลลิกรัม) มี chromatographed บน TLC เตรียมใช้ทานอ CHCl3 (95:5) เป็นตัวทำละลายพัฒนา รับผสม (4 มิลลิกรัม) 11 Subfraction F11 (96.2 มิลลิกรัม) มี chromatographed บนเจลใช้ CHCl3 และทานอ CHCl3 (95:5) เป็น eluent ผลตอบแทนผสม 12 (11 มิลลิกรัม) และ 13 (18 มิลลิกรัม) ผสมกัน F13 เศษ (IC50 = 21.5 ไมโครกรัมเป็น เครื่อง/ml) เป็น recrystallized จาก CHCl3-ทานอ (9:1) เป็นผงสีขาวของผสม 14 (32.8 มิลลิกรัม)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแยกสารและการแยกของสารจากผลที่ได้จากการทดสอบโดยไม่มีการยับยั้ง, CHCl3 ส่วนที่ละลายน้ำแล้วก็ chromatographed ต่อไปที่จะได้รับ 13 เศษส่วน (F1-13) F6 ส่วน (IC50 = 2.8 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร; 11.6 กรัม) ถูก chromatograped บนซิลิกาเจล (400 กรัม) โดยใช้การไล่ระดับสีแบบขั้นตอนของเฮกเซนเฮกเซน CHCl3 (9: 1, 8: 2, 6: 4, 4: 6, 2 : 8) CHCl3 และ CHCl3-เมธานอล (9.5: 0.5, 9: 1) ระบบตัวทำละลายเพื่อให้สี่ subfractions (-D) แยก B subfraction โดยซิลิกาเจลโคโดยใช้เฮกเซน CHCl3 (9: 1) เป็นตัวชะ afforded สารประกอบที่ 1 (26 มก.) หลังจาก recrystallized จากเมธานอลเฮกเซนเข็มไม่มีสีเป็น นอกจากนี้ส่วนนี้ซ้ำโดยคอลัมน์โดยใช้ระบบตัวทำละลาย eluting คล้ายกับที่มีส่วนผสมของสารที่ 2 และ 3 ซึ่ง chromatographed ที่เตรียม TLC โดยใช้เฮกเซน CHCl3 (9: 1, 4 elutions) เพื่อให้สาร 2 (5 มก.) และ 3 (4 มก.) เป็นน้ำมันไม่มีสีตามลำดับ subfraction (20 มก.) ทำโดยเตรียม TLC โดยใช้เฮกเซน CHCl3 (9: 1, 4 elutions) เพื่อให้สาร 2 (6 มก.) และ 3 (5 มก.) เป็นน้ำมันไม่มีสี subfraction ซี F6 ถูก chromatographed บนซิลิกาเจลโดยใช้ระบบตัวทำละลายเช่นเดียวกับที่ 6 ส่วนที่จะให้สาร 4 (24 มก.) ร่วมกับสารประกอบที่ 5 (32 มก.) subfraction D ของ F6 (12.7 มก.) ได้รับการ chromatographed ที่เตรียม TLC โดยใช้เฮกเซน CHCl3 (1: 1) เป็นตัวทำละลายพัฒนาเพื่อให้ได้สาร 7 (3 มก.) ส่วน F8 (IC50 = 1.7 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร; 235 มก.) ได้รับการ chromatographed โดยใช้ระบบตัวทำละลายเช่นเดียวกับส่วนที่ 6 อึดที่สุดสารประกอบ 6 (4 มก.) และสารประกอบที่ 8 (45 มก.) นอกจากนี้ในส่วนนี้ซ้ำโดยคอลัมน์ที่ใช้ระบบเดียวกันเพื่อให้สองสารประกอบไม่บริสุทธิ์ซึ่ง chromatographed เพิ่มเติมเกี่ยวกับการเตรียม TLC โดยใช้เฮกเซน CHCl3 (9: 1, 4 elutions) ให้ผลผลิต 9 (5 มก.) และ 10 (4 มก.) เป็นสีส้มสัณฐาน F11 ส่วน (IC50 = 1.6 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร 250 มิลลิกรัม) ถูก chromatographed โดยโคเจลที่ซึมผ่านเอนไซม์ LH-20 ชะด้วยเมทานอล F11 subfraction / 3 (11 มก.) ได้รับการ chromatographed ที่เตรียม TLC ใช้ CHCl3-เมธานอล (95: 5) เป็นตัวทำละลายในการพัฒนาเพื่อให้ได้สาร 11 (4 มก.) F11 subfraction (96.2 มก.) ได้รับการ chromatographed บนซิลิกาเจลโดยใช้ CHCl3 และ CHCl3-เมธานอล (95: 5) เป็นตัวชะ, ให้ผลผลิตสาร 12 (11 มก.) และสารประกอบที่ 13 (18 มก.) ส่วน F13 (IC50 = 21.5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) ถูก recrystallized จาก CHCl3-เมธานอล (9: 1) เป็นผงสีขาวของสารประกอบ 14 (32.8 มก.)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

และการแยกและการแยกองค์ประกอบ

ตามผลลัพธ์ที่ได้จากการไม่สามารถตรวจสอบได้ chcl3 เศษส่วนแล้ว chromatographed เพิ่มเติมเพื่อให้ได้ 13 เศษส่วน ( F1 ( 13 ) ส่วน F6 ( ic50 = 2.8 µ g / ml ; 11.6 กรัม ) คือ chromatograped บนซิลิกาเจล ( 400 กรัม ) โดยใช้การไล่ระดับสีแบบสารเฮกเซน - chcl3 ( 9 : 1 , 4 : 6 , 8 : 2 , 6 : 4 , , , และ 2 : 8 ) chcl3 chcl3 เมทิลแอลกอฮอล์ ( 9.5:0.5 9 :1 ) ระบบตัวทำละลายเพื่อให้สี่ subfractions ( - D ) การแยกโดยโครมาโตกราฟี subfraction B ซิลิกาเจลที่ใช้ hexane-chcl3 ( 9 : 1 ) นี้ช่วยให้สารประกอบ 1 ( 25 มิลลิกรัม ) หลังจาก recrystallized จากปริมาณเฮกเซนเป็นเข็มไม่มีสี นอกจากนี้ส่วนนี้กันโดยวิธีคอลัมน์โครมาโตกราฟฟีโดยใช้ hexane เป็นตัวทำละลาย คล้ายระบบจ่ายสารผสมของ 2 และ 3ซึ่ง chromatographed บน TLC โดยใช้เฮกเซน - เตรียม chcl3 ( 9 : 1 , 4 elutions ) เพื่อผลิตสารประกอบ 2 ( 5 มิลลิกรัม ) และ 3 ( 4 มิลลิกรัม ) เช่น สี น้ำมัน ตามลำดับ subfraction ( 20 มิลลิกรัม ) ทำโดยเตรียม TLC โดยใช้ hexane-chcl3 ( 9 : 1 , 4 elutions ) เพื่อผลิตสารประกอบ 2 ( 6 มก. ) และ 3 ( 5 มิลลิกรัม ) เช่น น้ำมันไม่มีสีsubfraction C ของ F6 คือ chromatographed บนซิลิกาเจลโดยใช้ระบบตัวทำละลายเดียวกันกับของเศษส่วน 6 เพื่อให้สารประกอบ 4 ( 25 มิลลิกรัม ) ร่วมกับสาร 5 ( 32 มิลลิกรัม subfraction D F6 ( 12.7 มิลลิกรัม ) คือ chromatographed บน TLC เตรียมใช้ hexane-chcl3 ( 1 : 1 ) เป็นการพัฒนาเพื่อผลิตสารตัวทำละลาย , 7 ( 3 มก. ) ส่วน F8 ( ic50 = 1.7 µ g / ml ;235 มก. ) คือ chromatographed โดยใช้ระบบตัวทำละลายเดียวกันกับของเศษส่วน 6 ในที่สุดเจ้าตัวสาร 6 ( 4 มิลลิกรัม ) และสารประกอบ 8 ( 45 มก. ) นอกจากนี้ในส่วนนี้กันโดยวิธีคอลัมน์โครมาโตกราฟฟีโดยใช้ระบบเดียวกันเพื่อให้สองเจือสาร ซึ่ง chromatographed ต่อไปเตรียม TLC โดยใช้ hexane-chcl3 ( 9 : 1 , 4 elutions ) ผลผลิต 9 ( 5 มิลลิกรัม ) และ 10 ( 4 มิลลิกรัม ) เช่น ส้มไป .ส่วน F11 ( ic50 = 1.6 µ g / ml ; 250 มก. ) คือ chromatographed เจลซึม โดยสามารถแยก lh-20 ตัวอย่างกับเมทานอล subfraction F11 / 3 ( 10 mg ) คือ chromatographed บน TLC โดยใช้ chcl3 เตรียมเมทิลแอลกอฮอล์ ( 95:5 ) เป็นการพัฒนาตัวทำละลายเพื่อให้ได้สารประกอบ 11 ( 4 มิลลิกรัม ) subfraction F11 ยังคงมิลลิกรัม ) คือ chromatographed บนซิลิกาเจลและปริมาณการใช้ chcl3 chcl3 ( เป็นอี 95:5 ) ,เพื่อผลิตสารประกอบ 12 ( 10 มิลลิกรัม ) และสารประกอบ 13 ( 18 มิลลิกรัม ส่วน f13 ( ic50 = 21.5 µ g / ml ) คือ recrystallized จาก chcl3 เมทิลแอลกอฮอล์ ( 9 : 1 ) ผงสีขาวผสม 14 ( 32.8 มก. )