Assay of antioxidant enzymesThe lea

Assay of antioxidant enzymes
The leaves were homogenized in 100 mMpotassium phosphate buffer (pH 7.0) to extract CAT activity (EC 1.11.1.6), while POD activity (EC 1.11.1.7) and SOD activity (EC 1.15.1.1) were extracted in 150 mM potassium phosphate buffer (pH 6.1) and 100 mM EDTA – phosphate buffer (pH 7.8), respectively.

CAT was determined polarographically at 25oC with a Clark type oxygen electrode (Rank Brothers, UK) as described by Sgherri et al. (2001).

Oxygen produced by enzymatic reaction was calculated after correction for auto production of O2 from H2O2.

One unit of CAT activity is the amount of enzyme producing 1 mM O2 min_1. POD activity was determined spectrophotometrically with guaiacol as the substrate following the method described by Zhang, 1992.

The reaction mixture contained 50 mM potassium phosphate buffer (pH 6.1), 1% guaiacol, 0.4% H2O2 and enzyme extract (150 mg
protein) in 3 ml volume, and an increase in the absorbance due to oxidation of guaicol (E = 25.5 mM_1 cm_1) was measured at 470 nm. One unit of POD activity is the amount of enzyme oxidizing 1 mM guaicol min_1.

SOD activity was assayed at 25 8C according to the method of Giannopolitis and Ries (1977) in a reaction mixture (3 ml) containing 1.3 mM riboflavin, 13 mM methionine, 63 mMp-nitroblue tetrazolium chloride (NBT), 0.05 M sodium carbonate (pH 10.2) and 0.1 ml crude extract. One unit of SOD activity is the amount of extract that gives 50% inhibition in enzyme activity.

The enzyme activity was represented as unit mg_1 protein. Protein content in each sample was determined according to Lowry et al.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทดสอบเอนไซม์สารต้านอนุมูลอิสระใบไม้มี homogenized เป็นกลุ่มใน 100 mMpotassium ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) แยกกิจกรรม CAT (EC 1.11.1.6), ในขณะที่กิจกรรม POD (EC 1.11.1.7) และกิจกรรมสด (EC 1.15.1.1) ถูกสกัดใน 150 มม.โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.1) และ 100 mM EDTA – ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.8), ตามลำดับ แมวถูกกำหนด polarographically ที่ 25oC มีคลาร์กชนิดออกซิเจนอิเล็กโทรด (พี่น้องอันดับ UK) อธิบายไว้โดย Sgherri et al. (2001) ผลิต โดยปฏิกิริยาเอนไซม์ในระบบออกซิเจนถูกคำนวณหลังจากการแก้ไขสำหรับการผลิตรถยนต์ของ O2 จาก H2O2 หนึ่งหน่วยกิจกรรม CAT คือ จำนวนของเอนไซม์ที่ผลิต O2 min_1 1 มม. กิจกรรมเท่านั้นที่ถูกกำหนด spectrophotometrically ด้วย guaiacol เป็นพื้นผิวต่อไปนี้อธิบายวิธีการ โดยเตียว 1992 ปฏิกิริยาผสมอยู่ 50 มม.โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.1), guaiacol 1%, 0.4% H2O2 และเอนไซม์สกัด (150 มิลลิกรัมโปรตีน) ในปริมาณ 3 ml และการเพิ่มขึ้นของ absorbance จากออกซิเดชันของ guaicol (E = 25.5 mM_1 cm_1) เป็นวัดที่ 470 nm POD กิจกรรมหนึ่งหน่วยคือ จำนวนของเอนไซม์ที่รับอิเล็กตรอน min_1 guaicol 1 มม. กิจกรรมสดถูก assayed ที่ 8C 25 ตามวิธีของ Giannopolitis และ Ries (1977) ส่วนผสมปฏิกิริยา (3 มล.) ที่ประกอบด้วยไรโบเฟลวิน 1.3 mM, methionine 13 mM, 63 mMp nitroblue tetrazolium คลอไรด์ (เอ็นบีที), 0.05 M โซเดียมคาร์บอเนต (pH 10.2) และ 0.1 มล.น้ำมันแยก สดกิจกรรมหนึ่งหน่วยเป็นปริมาณของสารสกัดที่ยับยั้งการ 50% ในเอนไซม์ เอนไซม์จะถูกแสดงเป็น mg_1 หน่วยโปรตีน โปรตีนในตัวอย่างแต่ละที่ถูกกำหนดตาม Lowry et al

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Assay ของสารต้านอนุมูลอิสระเอนไซม์
ใบถูกหดหายใน 100 mMpotassium ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) เพื่อดึงกิจกรรม CAT (อีซี 1.11.1.6) ในขณะที่กิจกรรม POD (อีซี 1.11.1.7) และกิจกรรม SOD (อีซี 1.15.1.1) ถูกสกัดใน 150 โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์มิลลิ (pH 6.1) และ 100 มิลลิ EDTA -. ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.8) ตามลำดับCAT ถูกกำหนด polarographically ที่ 25oC กับชนิดของคลาร์กอิเล็กโทรออกซิเจน (บราเดอร์อันดับสหราชอาณาจักร) ตามที่อธิบายไว้โดย Sgherri และคณะ (2001). ออกซิเจนผลิตโดยปฏิกิริยาของเอนไซม์ที่คำนวณได้หลังจากการแก้ไขสำหรับการผลิตรถยนต์ของ O2 จาก H2O2. หน่วยหนึ่งของกิจกรรม CAT คือปริมาณของเอนไซม์ที่ผลิต 1 มิลลิ O2 min_1 กิจกรรม POD ถูกกำหนด spectrophotometrically กับ guaiacol เป็นสารตั้งต้นดังต่อไปนี้วิธีการที่อธิบายโดย Zhang, 1992. ผสมปฏิกิริยาที่มีอยู่ 50 มิลลิเมตรโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.1) guaiacol 1%, 0.4% H2O2 และสารสกัดจากเอนไซม์ (150 มิลลิกรัมโปรตีน) ใน 3 ปริมาณมลและการเพิ่มขึ้นของการดูดกลืนแสงเนื่องจากการเกิดออกซิเดชันของ guaicol (E = 25.5 mM_1 cm_1) วัดที่ 470 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของกิจกรรม POD เป็นจำนวนเงินของเอนไซม์ออกซิไดซ์ 1 มิลลิ guaicol min_1. กิจกรรม SOD ได้รับการวิเคราะห์ที่ 25 8C ตามวิธีการของ Giannopolitis และ Ries (1977) ในผสมปฏิกิริยา (3 มล.) ที่มี 1.3 มิลลิ riboflavin, methionine 13 มิลลิเมตร 63 MMP-nitroblue tetrazolium คลอไรด์ (NBT), 0.05 M โซเดียมคาร์บอเนต (pH 10.2) และ 0.1 มลสารสกัดหยาบ หนึ่งหน่วยของกิจกรรม SOD คือปริมาณของสารสกัดที่ช่วยให้การยับยั้ง 50% ในกิจกรรมของเอนไซม์. เอนไซม์เป็นตัวแทนเป็นหน่วย mg_1 โปรตีน ปริมาณโปรตีนในกลุ่มตัวอย่างแต่ละคนถูกกำหนดตามโลว์รีย์และคณะ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การทดสอบของ antioxidant enzymes
ใบที่ถูกบดใน 100 mmpotassium ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) เพื่อแยกกิจกรรมแมว ( EC 1.11.1.6 ) ในขณะที่กิจกรรมฝัก ( EC 1.11.1.7 ) และกิจกรรม SOD ( EC 1.15.1.1 ) ถูกสกัดใน 150 มม. โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.1 ) และ 100 mM EDTA และฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.8 ) ตามลำดับ

แมวที่ถูกกำหนด polarographically 25oc กับคลาร์กชนิดออกซิเจนไฟฟ้า ( พี่น้องอันดับ UK ) ตามที่อธิบายไว้โดย sgherri et al . ( 2001 ) ออกซิเจน

ที่ผลิตโดยปฏิกิริยาเอนไซม์มีค่าหลังจากการแก้ไขสำหรับการผลิตรถยนต์ของ O2 จากแบตเตอรี่ .

หนึ่งหน่วยของปริมาณของเอนไซม์แมวกิจกรรมการผลิต 1 มม. O2 min_1 .กิจกรรมนี้เป็นฝักถูกกำหนดด้วยค่า ( ตามวิธีที่อธิบายไว้โดย Zhang , 1992

มีปฏิกิริยาผสม 50 มิลลิโมลาร์โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.1 ) 1 % ค่า H2O2 , 0.4% และเอนไซม์สกัด ( 150 มก.
โปรตีน ) ใน 3 มิลลิลิตร ปริมาณ และเพิ่มขึ้นในการดูดกลืนแสงเนื่องจากการเกิดออกซิเดชันของ guaicol ( E = 25.5 mm_1 cm_1 ) คือวัดที่ 470 นาโนเมตรหน่วยหนึ่งของกิจกรรมฝักเป็นปริมาณของเอนไซม์ออกซิไดซ์ min_1 guaicol 1 mm .

สดกิจกรรมซีรั่ม 25 8C ตามวิธีการและ giannopolitis ries ( 1977 ) ในปฏิกิริยาผสม ( 3 ml . ) ที่มีเมทไธโอนีน Riboflavin 1.3 มม. 13 มม. 63 MMP nitroblue tetrazolium คลอไรด์ ( NBT ) 0.05 เมตร โซเดียม คาร์บอเนต ( pH 10.2 ) และ 0.1 ml สารสกัด .หน่วยหนึ่งของกิจกรรมสดจะมีปริมาณสารสกัดที่ให้ 50 % ยับยั้งกิจกรรมของเอนไซม์

กิจกรรมเอนไซม์ซึ่งเป็นโปรตีน mg_1 หน่วย โปรตีนในแต่ละตัวอย่างถูกกำหนดตามเบส et al .