Prepare the carbol fuchsin stain by

Prepare the carbol fuchsin stain by mixing the following 2 solutions.

Solution A: 0.2 g basic fuchsin and 10 ml 95 % ethanol.

Solution B: 5 g phenol and 90 ml distilled water.

Procedure:

Select larvae and/or pupae showing signs of European foulbrood and place them on a microscope slide.
Using a swab or stick, pulp the larvae together and spread over the slide pushing any excess off one end, to leave a thin smear.
Allow the smears to dry before processing.
Heat fix by flaming the slide over a burner a few times
Flood with 0.2 % carbol fuchsin for 30 seconds.
Wash off the stain and either air dry or gently blot dry before microscopic examination at 1000 times magnification.

A diagnosis of European foulbrood is made if examination revealed M. plutonius-like organisms. Organisms are considered to be M. plutonius if they are lanceolate cocci, approximately 0.5 x 1.0 µm. E. faecalis is very like M. plutonius in appearance and has frequently been confused as being the causative agent (Bailey and Gibbs, 1962; Hornitzky and Wilson, 1989) (Figs 5 a, b, c).

An alternative to the 0.2 % carbol fuchsin stain is the Gram stain, useful mainly when the Gram positive feature of M. plutonius needs to be confirmed.

Fig. 5. a) Early infection: only Melissococcus plutonius. Arrow indicates a mass of coccoid/lanceolate M. plutonius organisms. b) Infiltration of secondary invader Paenibacillus alvei. Arrow indicates one of the many vegetative P. alvei cells. c) Proliferation of P. alvei spores to the virtual exclusion of M. plutonius. Arrow indicates one of the many P. alvei spores. Photos: Michael Hornitzky.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เตรียมคราบ carbol ฟุโดยการผสม 2 ต่อไปนี้การแก้ปัญหา. โซลูชั่น: 0.2 กรัมฟุขั้นพื้นฐานและ 10 มล. เอทานอล 95%. โซลูชั่น B: 5 กรัมและฟีนอล 90 มล. น้ำกลั่น. ขั้นตอน: เลือกตัวอ่อนและ / หรือดักแด้แสดงสัญญาณของยุโรป foulbrood และวางไว้บนภาพนิ่งกล้องจุลทรรศน์. การใช้ไม้กวาดหรือไม้เยื่ออ่อนเข้าด้วยกันและแผ่กระจายไปทั่วสไลด์ผลักดันส่วนเกินออกจากปลายด้านหนึ่งจะออกจาก smear บาง. อนุญาตให้รอยเปื้อนให้แห้งก่อนที่จะประมวลผล. แก้ไขความร้อนโดยการเผา เลื่อนไปเขียนไม่กี่ครั้งน้ำท่วมกับ 0.2% ฟุ carbol 30 วินาที. ล้างออกคราบและทั้งอากาศแห้งหรือค่อย ๆ ลบแห้งก่อนการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ที่กำลังขยาย 1000 ครั้ง. วินิจฉัย foulbrood ยุโรปจะทำหากตรวจสอบพบ M. plutonius ชีวิตเหมือน สิ่งมีชีวิตที่ได้รับการพิจารณาให้เป็นเอ็ม plutonius หากพวกเขาเป็นแบคทีเรียรูปใบหอกประมาณ 0.5 x 1.0 ไมโครเมตร E. faecalis เป็นอย่างมากเช่น M. plutonius ในลักษณะและได้รับมักสับสนว่าเป็นสาเหตุ (เบลีย์และกิ๊บส์, 1962; Hornitzky และวิลสัน, 1989) (มะเดื่อ 5, B, C). ทางเลือกที่ 0.2% carbol คราบฟุเป็นคราบแกรมที่มีประโยชน์ส่วนใหญ่เมื่อคุณลักษณะกรัมบวกเอ็ม plutonius ความต้องการที่จะได้รับการยืนยัน. รูป 5. ) การติดเชื้อในช่วงต้นเพียง Melissococcus plutonius ลูกศรชี้มวลของกลมจาก / หอก M. plutonius ชีวิต ข) การแทรกซึมของผู้รุกรานรอง Paenibacillus เชื้อ ลูกศรชี้ให้เห็นหนึ่งในหลายพืชเซลล์เชื้อ P. ค) การแพร่กระจายของเชื้อ P. สปอร์จะแยกเสมือนจริงของ M. plutonius ลูกศรบ่งชี้ว่าหนึ่งสปอร์จำนวนมาก P. เชื้อ รูปภาพ: ไมเคิล Hornitzky

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เตรียม carbol เท่าคราบ โดยผสม 2 โซลูชั่นต่อไปนี้

แก้ปัญหา : 0.2 กรัมและ 10 ml พื้นฐานเท่าเอทานอล 95%

5 g สารละลายฟีนอลและ 90 มล. น้ำกลั่น .

ขั้นตอน :

เลือกหนอนดักแด้และ / หรือแสดงอาการอยากให้และสถานที่ที่พวกเขาในยุโรป กล้องจุลทรรศน์สไลด์ .
ใช้ไม้กวาดหรือไม้เนื้ออ่อนด้วยกัน และแพร่กระจายผ่านสไลด์ดันส่วนเกินใด ๆ ออกแล้วที่จะออกภายในบาง
ให้ละเลงให้แห้งก่อนการประมวลผล โดยเพลิงความร้อนแก้ไข
สไลด์มาเผาหลายครั้ง
น้ำท่วมกับ 0.2% carbol เท่าเป็นเวลา 30 วินาที แล้วล้างออกคราบ
และ blot เบา ๆทั้งอากาศแห้งหรือแห้งก่อนกล้องจุลทรรศน์ที่ 1000 ครั้งขยาย

วินิจฉัยอยากให้ยุโรปทำถ้า การตรวจพบม. plutonius เหมือนสิ่งมีชีวิตสิ่งมีชีวิตจะถือว่าเป็น ม. plutonius ถ้าพวกเขา lanceolate แปลกหูแปลกตา ประมาณ 0.5 x 1.0 เมตร เช่นµออกซิเจนมาก เช่น ม. plutonius ในลักษณะที่ปรากฏและมักสับสนเป็นเหตุ ( และตัวแทนเบลีย์กิบบส์ , 1962 ; hornitzky วิลสัน , 1989 ) ( มะเดื่อ 5 A , B , C )

เป็น ทางเลือกที่ 0.2% carbol เท่าคราบเป็นคราบกรัม ,ประโยชน์เป็นหลัก เมื่อ แกรมบวก คุณสมบัติ ของ ม. plutonius ต้องยืนยัน

รูปที่ 5 การติดเชื้อในวัยเด็ก : ) เพียง melissococcus plutonius . ที่ลูกศรชี้มวลของผนังภายใน / lanceolate ม. plutonius สิ่งมีชีวิต ข ) การแทรกซึมของผู้รุกราน มัธยมศึกษา paenibacillus alvei . ที่ลูกศรชี้หนึ่งในหลายลักษณะหน้า alvei เซลล์ c ) การงอกของหน้า alvei สปอร์เพื่อการยกเว้นเสมือนของม.plutonius . ลูกศรแสดงหนึ่งของหลายหน้า alvei สปอร์ รูปถ่าย : ไมเคิล hornitzky .