separate ltration and degassing, ph

separate ltration and degassing, phosphate buer (970 ml.) and acetonitrile (30 ml.). Alternative buer:acetonitrile
eluent proportions were prepared as required.
2.3. Standard preparation
Stock pantothenic acid standard (500 mg/ml) Approximately 140 mg. calcium pantothenate was dried at 105_C for 2 h over silica gel in a vacuum oven. After cooling in dessicator, 108.8 mg was accurately weighed into a small beaker. It was dissolved in a small volume of water and transferred to a volumetric ¯ask (200 ml.),
rinsing beaker with ethanol:water (1:1 v/v) and made to volume, stoppered and mixed thoroughly. 4 ml aliquots
were dispensed into screw-capped vials and stored at ÿ18_C. Stock standard was stable for 6 months.
Working standards (5.0 and 10.0 mg/ml): Prepared by dilution of stock 1:100 and 1:50 respectively with water
in separate volumetric ¯asks (50 ml). These standards were prepared fresh daily and discarded after use.
2.4. Sample preparation
Sample powder (0.5 g.) was accurately weighed into a disposable, graduated centrifuge tube (10 ml). A sample
blank and control sample were included in each analytical schedule. Approximately 5 ml warm water (

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ltration ที่แยกต่างหากและ degassing ฟอสเฟต Buer (970 มล. .) และ acetonitrile (30 ml.) Buer ทางเลือก: สัดส่วน acetonitrile
ตัวชะเตรียมตามที่ต้องการ
2.3. เตรียม
หุ้นมาตรฐานกรด pantothenic มาตรฐาน (500 mg / ml) ประมาณ 140 มิลลิกรัม แคลเซียมแพนโทธีแห้งที่ 105_c เป็นเวลา 2 ชั่วโมงกว่าซิลิกาเจลในเตาอบสูญญากาศ หลังจากการทำความเย็นใน dessicator, 1088 มิลลิกรัมถูกชั่งน้ำหนักในถ้วยแก้วขนาดเล็กได้อย่างถูกต้อง มันจะถูกกลืนหายไปในปริมาณขนาดเล็กของน้ำและถ่ายโอนไปยังปริมาตร¯ถาม (200 มล. .)
ล้างถ้วยแก้วที่มีเอทานอล: น้ำ (1:1 v / v) และทำเพื่อให้ปริมาณ stoppered และผสม 4 มล. aliquots
ถูกจ่ายเข้าไปในขวดสกรูที่ปกคลุมและเก็บไว้ที่ÿ18_c มาตรฐานหุ้นมีเสถียรภาพเป็นเวลา 6 เดือน
มาตรฐาน (5.0 และ 10.0 mg / ml) ทำงาน.จัดทำขึ้นโดยการลดสัดส่วนหุ้นของ 1:100 และ 01:50 ตามลำดับด้วยน้ำ
แยก¯ปริมาตรถาม (50 มล. ) มาตรฐานเหล่านี้ถูกจัดทำสดใหม่ทุกวันและทิ้งหลังการใช้งาน.
2.4 ตัวอย่างการเตรียม
ตัวอย่างผง (0.5 กรัม.) ได้รับการชั่งน้ำหนักอย่างถูกต้องลงในทิ้งจบการศึกษาในหลอด centrifuge (10 มล. )
ตัวอย่างที่ว่างเปล่าและการควบคุมตัวอย่างถูกรวมอยู่ในตารางการวิเคราะห์แต่ละประมาณ 5 ml น้ำอุ่น (<40_c)
ถูกเพิ่มเข้ามาด้วยการผสมน้ำวนและได้รับอนุญาตที่จะยืนเป็นเวลา 20 นาที 0.5 มล. กรดอะซิติก (3% v / v) ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละ
ตัวอย่างการ vortex และได้รับอนุญาตที่จะยืนเป็นเวลา 20 นาที ตัวอย่างที่ทำแล้วปริมาณ (10.0 มล. ) และ cenrifuged ที่ 3500 รอบต่อนาที (1000 กรัม) เป็นเวลา 15 นาที หาร (1 ± 2 มล. .) ถูกถอนออกจากเฟสซีรั่มน้ำ (หลีกเลี่ยงไขมันและตะกอน)claried ผ่าน 0.45 202 ดีซี Woollard ตอัล / เคมีอาหาร 69 (2000) 201 ± 208 มม.
เยื่อ lter แนบมากับ 10 มล. เข็มฉีดยาที่ใช้แล้วทิ้ง Luer ปลายและ ltrate เก็บใน 1.8 มล. สกรูปกคลุม autosampler ขว​​ด สารสกัดจากนั้นก็พร้อมสำหรับการฉีด ตัวอย่างของความสม่ำเสมอยากจนตัวอย่าง 5 กรัมถูกชั่งน้ำหนักใน 100 มล. ¯ถามและการวิเคราะห์ตามสัดส่วน.
2.5 การวิเคราะห์ hplc
การศึกษาการเพิ่มประสิทธิภาพเบื้องต้นได้ดำเนินการแก้ปัญหาด้วยคอลัมน์ ต่อไปนี้การกวาดล้างของการวิเคราะห์
คอลัมน์อย่างน้อย 15 เล่ม acetonitrile (100%) และ acetonitrile: น้ำ (50:50 v / v) ระบบที่ถูก equilibrated ด้วยเฟสเคลื่อนที่ (ฟอสเฟต bu €เอ้อ ph2.25: acetonitrile, 97:3 v / v)อัตรา isocratic ¯โอ๊ยมีการปรับระหว่าง 1 และ 2 มล. / นาทีการชะมาตรฐานกรด pantothenic ภายในแคลิฟอร์เนีย 10 ± 20 นาทีและเพื่อรักษาความดันในการดำเนินงานที่เหมาะสม มาตรฐานการทำงาน (10 ± 20 มล. ) ถูกฉีดจนการตอบสนองที่ทำซ้ำก็ประสบความสำเร็จตามด้วยสารสกัดจากตัวอย่าง โคเป็นอย่างต่อเนื่องจนกว่า
ที่สำคัญ,eluting ปลายยอดเขาที่ไม่รู้จักจะถูกลบออก (CA 35 นาที) ก่อนที่จะฉีดตัวอย่างต่อไป
ต่อไปนี้ความสำเร็จของตารางตัวอย่างคอลัมน์ที่ถูกไล่ออกตามลำดับด้วย acetonitrile. น้ำ
(50:50 v / v) น้ำ (100%), acetonitrile: น้ำ (50:50 v / v) และ Nally acetonitrile (100%) สำหรับการจัดเก็บคอลัมน์
ระหว่างการตรวจสอบยูวี runs.multichannel ที่ 200, 205 และ 240 นาโนเมตรถูกนำมาใช้เป็นประจำในระหว่างการวิเคราะห์ (การตรวจสอบช่องทางคู่ที่ 200 และ 205 นาโนเมตรเป็นความต้องการขั้นต่ำเพื่อให้สเปกตรัม ratioing, มีการตรวจสอบที่ 240 นาโนเมตร con-
sidered สมควรในการที่จะตรวจสอบต่อไปกรณีที่ไม่มีการรบกวนที่อาจเกิดขึ้น) ในระหว่างการศึกษาการเพิ่มประสิทธิภาพ
สเปกตรัมสแกนได้มากับยอดเขาทั้งหมดที่น่าสนใจทั้งสำหรับการประเมินผลการวิเคราะห์ความบริสุทธิ์ของเป้าหมายและ
ตรวจสอบสิ่งของที่มีศักยภาพ ขึ้นอยู่กับข้อมูลที่ได้มาจากการศึกษาการแก้ปัญหาคอลัมน์ทางเลือกที่ได้รับการประเมิน เงื่อนไขการวิเคราะห์ถูกเปรียบเทียบสำหรับ aq312 YMC คอลัมน์ phenyl-c6 และ luna c8 luna ยกเว้นเล็กน้อย
modications ในอัตรา¯โอ๊ย develosil ODS มิลลิกรัม-5 คอลัมน์ดำเนินการที่เนื้อหา acetonitrile สูงขึ้น (5% v / v)ในขณะที่กำไรต่อหุ้นทองคำถูกปรับให้เหมาะสมกับการฟอสเฟต Buer (100%) เพียงอย่างเดียว สำหรับคอลัมน์เหล่านี้มันก็สมควรที่จะเอาชิ้นส่วนที่เก็บรักษาไว้ด้วย acetonitrile (100%) เป็นเวลา 5 นาทีต่อไปนี้ elution ของ pantothenateprior อีกครั้ง equilibration ภายใต้เงื่อนไขเริ่มต้น.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แยก ltration และการ degassing ฟอสเฟต buer (970 ml.) และ acetonitrile (30 มล) Buer:acetonitrile อื่น
eluent ที่สัดส่วนเตรียมไว้เป็นที่ต้องการ
2.3 เตรียมสอบมาตรฐาน
มาตรฐานกรดแพนโทธีนิคหุ้น (500 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) ประมาณ 140 mg. แคลเซียม pantothenate ที่แห้งที่ 105_C สำหรับ h 2 ผ่านซิลิก้าเจลในเตาสูญญากาศ หลังจากทำความเย็นใน dessicator, 1088 มิลลิกรัมถูกชั่งน้ำหนักได้อย่างถูกต้องลงในบีกเกอร์ขนาดเล็ก มันละลายในปริมาตรเล็ก ๆ น้ำ และโอนย้ายไป ¯ask volumetric (200 มล.),
ล้างบีกเกอร์ ด้วยเอทานอล: น้ำ (1:1 v/v) และทำให้ปริมาตร stoppered และผสมอย่างละเอียด 4 ml aliquots
มีคำเป็น vials ปรบมือสกรู และเก็บไว้ที่ ÿ18_C มาตรฐานหุ้นมีเสถียรภาพสำหรับ 6 เดือน
ทำงานมาตรฐาน (5.0 และ 10.0 mg/ml): โดยเจือจางของหุ้น 1: 100 และ 1:50 ตามลำดับน้ำ
ใน volumetric แยก ¯asks (50 มล.) มาตรฐานเหล่านี้ถูกจัดทำสดใหม่ทุกวัน และถูกยกเลิกหลังจากใช้
2.4 ตัวอย่างการเตรียม
ตัวอย่างผง (0.5 กรัม) ถูกชั่งน้ำหนักอย่างเป็นหลอดเครื่องหมุนเหวี่ยงทิ้ง จบการศึกษา (10 มล.) ตัวอย่าง
ว่าง และควบคุมรวมอยู่ในแต่ละตารางวิเคราะห์ตัวอย่าง ประมาณ 5 ml น้ำอุ่น (< 40_C)
เพิ่ม ด้วยผสม vortex และอนุญาตให้ยืนสำหรับ 20 นาที 0.5 ml. กรดอะซิติก (3% v/v) ถูกเพิ่มไปยังแต่ละ
ตัว อย่าง vortexed และอนุญาตให้ยืนสำหรับ 20 นาที แล้วแปลงตัวอย่างปริมาตร (10.0 ml) และ cenrifuged ที่ 3500 rpm (1000 กรัม) ใน 15 นาที ส่วนลงตัว (1±2 ml.) ถูกถอนจากเฟสเซรั่มอควีหลีก (เลี่ยงไขมันและตะกอน), claried ผ่านดีซี 0.45 202 Woollard et al. / 69 เคมีอาหาร (2000) 201±208
มม.เยื่อและวัสดุเป็นแนบกับก้น luer เข็มทิ้ง 10 ml และ ltrate เก็บไว้ในตัว 1.8 ml ปรบมือสกรู autosampler คอนแทค แล้วพร้อมสำหรับฉีดสารสกัดได้ สำหรับตัวอย่างของ homogeneity ดี ตัวอย่าง 5 กรัมมีน้ำหนัก ¯ask 100 ml และวิเคราะห์ปรับตามนั้น
2.5 วิเคราะห์ HPLC
การศึกษาเบื้องต้นการเพิ่มประสิทธิภาพดำเนินกับคอลัมน์แก้ไข ต่อล้างข้อมูลที่วิเคราะห์
คอลัมน์ที่ มีปริมาณน้อย 15 acetonitrile (100%) และ acetonitrile:water (คนละครึ่ง v/v) ระบบถูก equilibrated กับเฟสเคลื่อนที่ (ฟอสเฟตบุ€เอ้อ pH2.25:acetonitrile, 97:3 v/v) Isocratic คิดอัตรา ¯ow มีการปรับปรุงการระหว่าง 1 และ 2 ml/min elute มาตรฐานกรดแพนโทธีนิคภายใน ca. 10±20 นาที และรักษาความดันทำงานที่เหมาะสม มาตรฐานการทำงาน (10±20 มล) ถูกฉีดจนกว่าการตอบสนองที่จำลองสำเร็จตามตัวอย่างสารสกัดจาก Chromatography ถูก
ต่อเนื่องจนถึงเป็นหลัก สาย eluting พีคไม่ทราบถูกเอาออก (ca 35 นาที) ก่อนถัดไปตัวอย่างฉีด
ต่อความสมบูรณ์ของตัวอย่างกำหนดการ คอลัมน์ถูกลบตามลำดับกับ acetonitrile:water
(คนละครึ่ง v/v), น้ำ (100%), acetonitrile:water (คนละครึ่ง v/v) และ nally acetonitrile (100%) สำหรับคอลัมน์เก็บ
ระหว่างทำงานตรวจจับ UV แบบที่ 200, 205 และ 240 nm ใช้เป็นประจำในระหว่างการวิเคราะห์ (สองช่องตรวจที่ 205 และ 200 nm มีความต้องการขั้นต่ำให้สเปกตรัม ratioing มีการตรวจสอบที่ 240 nm คอน-
sidered สมควรเพื่อไปตรวจสอบของศักยภาพ interferences) ในระหว่างการศึกษาการเพิ่มประสิทธิภาพ,
สเปกตรัมสแกนสินทรัพย์สำหรับยอดทั้งหมดน่าสนใจทั้งสำหรับประเมินความบริสุทธิ์ ของ analyte เป้าหมาย และไป
ตรวจสอบสิ่งที่อาจเกิดขึ้น ตามข้อมูลที่ได้มาจากการศึกษาการแก้ไข ประเมินคอลัมน์อื่นได้ วิเคราะห์เงื่อนไขเทียบเท่าสำหรับ YMC AQ312, Luna Phenyl C6 และ Luna C8 คอลัมน์ ยกเว้นวิชารอง
modications ในอัตรา ¯ow คอลัมน์ Develosil ODS-MG-5 ถูกดำเนินการที่สูง acetonitrile เนื้อหา (5%v/v), ในขณะที่ EPS แพลทินัมเหมาะงานกราฟฟิกกับฟอสเฟต buer (100%) เพียงอย่างเดียว สำหรับคอลัมน์เหล่านี้ ก็สมควรลบคอมโพเนนต์สะสม ด้วย acetonitrile (100%) สำหรับ 5 นาที ต่อ elution ของ pantothenateprior equilibration ใหม่ภายใต้เงื่อนไขเริ่มต้น.

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

degassing ltration แบบแยกพื้นที่และฟอสเฟต buer ( 970 มล.)และ acetonitrile ( 30 มล.) สัดส่วน acetonitrile
eluent buer :ทางเลือกได้เตรียมความพร้อมตามที่ต้องการ.
2.3 Calcium pantothenate หุ้นตินจัดอยู่มาตรฐาน( 500 มล.มก./)ประมาณ 140 มก.แคลเซียม
ซึ่งจะช่วยในการเตรียมมาตรฐานก็แห้งที่ 105 _c สำหรับ 2 ชั่วโมงกว่าซิลิกาเจลในเตาอบเครื่องดูดฝุ่นได้ หลังจากระบบระบายความร้อนใน dessicator 108 .8 มก.ก็ต้องชั่งน้ำหนักลงในโถปั่นขนาดเล็กที่ได้อย่างถูกต้อง มันก็ละลายได้ในระดับเสียงขนาดเล็กของน้ำและจะพาท่านไปส่งถึงยังทางปริมาตรที่ N ห้ามทำขอให้( 200 มล.)โถ
ล้างด้วยเอทานอล:น้ำ( 1 : 1 V / V )และทำให้ stoppered ระดับเสียงและเป็นการผสมผสานอย่างทั่วถึง 4 มล. aliquots
มีน้ำบริสุทธิ์ใน vials สกรูปกคลุมไปด้วยและจัดเก็บไว้ใน Y เพื่อแสดง 18 _c. มาตรฐานหุ้นก็มั่นคงให้กับ 6 เดือน.มาตรฐาน
การทำงาน( 5.0 และ 10.0 มก./มล.)ซึ่งได้รับการจัดเตรียมโดยเจือจางของตลาดหลักทรัพย์ฯ 1 : 100 และ 1 : 50 ตามลำดับพร้อมด้วยน้ำ
ในทางปริมาตร N ห้ามทำแบบแยกพื้นที่และขอให้( 50 มล.) ตามมาตรฐานเหล่านี้ได้จัดเตรียมขึ้นอย่างสดใหม่ทุกวันและถูกยกเลิกหลังจากใช้.
2.4 ตัวอย่างของการเตรียมการ
ตัวอย่างแป้ง( 0.5 G .)ก็ต้องชั่งน้ำหนักเข้าไปในท่อดูด centrifuge จบการศึกษาแบบใช้แล้วทิ้งได้( 10 มล.)ได้อย่างถูกต้อง ตัวอย่าง
ว่างไว้และการควบคุมตัวอย่างที่มีอยู่ในแต่ละตารางเวลาในการวิเคราะห์ประมาณ 5 มล.น้ำ(< 40 _c )
มีการเพิ่มเติมพร้อมด้วยวังน้ำวนและผสมอาหารได้รับอนุญาตให้อยู่ใน 20 นาที 0.5 มล.กรดอะซิติกกรด( 3% v / v )ได้ถูกเพิ่มลงในแต่ละ
ตัวอย่าง, vortexed และได้รับอนุญาตให้อยู่ใน 20 นาทีที่เป็นตัวอย่างแล้วทำให้ในการปรับระดับเสียง( 10.0 มล.)และ cenrifuged ที่ 3500 รอบต่อนาที( 1000 G )สำหรับ 15 นาทีที่ aliquot ( 1 ,± 2 มล..)เป็นการถอนเงินออกจากที่เจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์ที่เกิดจากน้ำระยะ(การหลีกเลี่ยงการ( lipid และตะกอน),claried ผ่าน 0.45 202 D . C . woollard ที่ et al . /อาหารเคมี 69 ( 2000 ) 201 - - ± 208
มม.เยื่อแผ่นติดอยู่กับที่ 10 มล. luer แบบใช้แล้วทิ้งกระบอกฉีดและ ltrate เก็บรวบรวมใน 1.8 มล.สกรูปกคลุมไปด้วย autosampler ขวด. ดึงก็พร้อมสำหรับหัวฉีด สำหรับตัวอย่างของซึ่งประกอบขึ้นด้วยส่วนที่เหมือนกันผู้น่าสงสาร 5 ตัวอย่าง G เป็นชั่งน้ำหนักใน 100 มล. N ห้ามทำถามและการวิเคราะห์ที่ปรับขยายได้จึงเรียนมาเพื่อ.
2.5 การวิเคราะห์ hplc
ตามมาตรฐานการศึกษาการใช้ประโยชน์สูงสุดเบื้องต้นได้ทำการแก้ไขที่พร้อมด้วยเสาหิน ต่อไปนี้กำลังเก็บกวาด
ซึ่งจะช่วยในการวิเคราะห์ของคอลัมน์ที่มีอย่างน้อย 15 เล่มของ acetonitrile ( 100% )และ acetonitrile :น้ำ( 50 : 50 v / v )ระบบ equilibrated พร้อมด้วยเฟส Mobile ( BU ฟอสเฟต€™ ER ph2.25 : acetonitrile 97 : 3 V / V )อัตราต isocratic N ห้ามทำเป็นการปรับเปลี่ยนระหว่าง 1 และ 2 มล./นาทีเพื่อกรด elute ตินจัดอยู่ใน CA 10 ± 20 นาทีและเพื่อรักษาระดับความดันทำงานเหมาะสม. มาตรฐานการทำงาน( 10 ,± 20 มล.)เป็นรองแบบฉีดขึ้นรูปที่เกิดขึ้นซ้ำเดิมได้จนกว่าการตอบสนองเป็นความสำเร็จตามด้วยสารสกัดจากตัวอย่าง chromatography
ซึ่งจะช่วยได้อย่างต่อเนื่องจนกว่าที่สำคัญสายที่ไม่รู้จัก eluting สูงสุดได้ถูกลบออกแล้ว( CA 35 นาที)ก่อนที่อยู่ถัดออกไปสุ่มตัวอย่างแบบฉีด.
ต่อไปนี้การลิ้มลองตารางเวลา,ที่คอลัมน์ก็ออกตามลำดับพร้อมด้วย acetonitrile :น้ำ
( 50 : 50 V / V ),น้ำ( 100% ), acetonitrile :น้ำ( 50 : 50 V / V )และ nally acetonitrile ( 100% )สำหรับคอลัมน์การจัดเก็บ
ระหว่างการวิ่งแต่ละ.แบบหลายช่อง UV การตรวจจับที่ 200 , 205 และ 240 นิวตันเมตรก็นำมาใช้อย่างสม่ำเสมอในระหว่างการวิเคราะห์( dual channel การตรวจจับที่ 200 และ 205 nm เป็นเกณฑ์ขั้นต่ำในการอนุญาตให้เป็นผี ratioing ,พร้อมด้วยการตรวจสอบที่ 240 NM - - -
sidered สมควรในการสั่งซื้อเพื่อตรวจสอบที่ไม่มี ศักยภาพ มีสัญญาณรบกวน) ในระหว่างการศึกษาการใช้ประโยชน์สูงสุดจะสแกนหา
คลื่นแสงความถี่ได้มาจากสำหรับยอดเขาทั้งหมดที่น่าสนใจทั้งสำหรับการประเมินผลความบริสุทธิ์ผุดผ่องของ analyte เป้าหมายและเพื่อตอบแทน
จอมอนิเตอร์งานฝีมือที่อาจเกิดขึ้น จากข้อมูลได้รับจากการศึกษาการแก้ไขที่คอลัมน์ทางเลือกเป็นการประเมิน เงื่อนไขในการวิเคราะห์ได้ใกล้เคียงกับการติดตั้งสวิชเกียร์ ymc 312 คอลัมน์ Luna phenyl - c 6 และ Luna c 8 ที่ยกเว้นสำหรับเล็กน้อย
modications ในอัตราต N ห้ามทำ 5 คอลัมน์โชว์เฟอร์ ODS - มก. develosil ที่ได้รับการผ่าตัดที่เนื้อหา acetonitrile สูงกว่า( 5% v / v )ในขณะที่แพลตตินั่ม EPS ที่ปรับแต่งด้วยเป็นฟอสเฟต buer ( 100% )ตามลำพัง สำหรับคอลัมน์นี้เป็นการสมควรถอดส่วนประกอบไว้ด้วย acetonitrile ( 100% )สำหรับ 5 นาทีต่อไปนี้: elution ของ pantothenateprior อีกครั้ง - equilibration ภายใต้ เงื่อนไขแรก.