Roche Diagnostics PCR reagents were

Roche Diagnostics PCR reagents were used with following conditions: 20 μL reaction volume contained 1x PCR buffer, 3.5 mM MgCl2, 250 μM of each dNTP, 3 U FastStart Taq Polymerase, 0.5x EvaGreen Fluorescent DNA Stain (Jena Bioscience), 0.125 μM primer (Art2A) or 0.25 μM primer (BovB) and 5 pg of template DNA. Three biological replicates were prepared as templates and were analyzed in real time qPCR assays in duplicate. Polymerase chain reaction protocol was: initial denaturation at 95 °C for 10 minutes, followed by 40 cycles of 95 °C for 30 seconds, 61 °C for 15 seconds (Art2A) or 30 seconds (BovB) and 72 °C for 30 seconds. The fluorescence signal was measured at the end of each extension step. For verification of specific amplification, a melting curve analysis with a temperature gradient of 0.1 °C/s from 61 °C to 95 °C was performed. The primer specificity was verified by sequence analysis of an initial subset of PCR amplicons.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ใช้ PCR การวินิจฉัยโร reagents ด้วยเงื่อนไขต่อไปนี้: 20 μL ปฏิกิริยาปริมาตรประกอบด้วยบัฟเฟอร์ x PCR 1, 3.5 มม. MgCl2, μM 250 ของแต่ละ dNTP, 3 U FastStart Taq พอลิเมอเรส 0.5 x EvaGreen เรืองแสงดีเอ็นเอติด (Jena ซื้อ), 0.125 พื้น μM (Art2A) หรือ 0.25 μM สีรองพื้น (BovB) และ pg 5 แม่แบบดีเอ็นเอ เหมือนกับชีวภาพสามได้เตรียมไว้เป็นแม่แบบ และได้วิเคราะห์ในเวลาจริง qPCR assays สำเนา โพรโทคอปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส: เริ่มต้น denaturation ที่ 95 ° C 10 นาที ตาม ด้วยรอบ 40 95 ° C เวลา 30 วินาที 61 ° C (Art2A) 15 วินาที หรือ 30 วินาที (BovB) และ 72 ° C เวลา 30 วินาที สัญญาณ fluorescence ถูกวัดในตอนท้ายของแต่ละขั้นตอนการขยาย สำหรับการตรวจสอบการขยาย การละลายเส้นโค้ง มีการไล่ระดับอุณหภูมิ 0.1 องศาเซลเซียสการวิเคราะห์/ทำ s 61 ° c ถึง 95 ° C Specificity พื้นถูกตรวจสอบ โดยการวิเคราะห์ลำดับย่อยที่เริ่มต้นของ PCR amplicons

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

น้ำยา Roche Diagnostics PCR ถูกนำมาใช้โดยมีเงื่อนไขดังต่อไปนี้: ปริมาณปฏิกิริยา 20 ไมโครลิตรมีบัฟเฟอร์ 1x PCR 3.5 มิลลิ MgCl2, 250 ไมครอนของแต่ละ dNTP 3 U FastStart Taq โพลิเมอร์, 0.5 เท่า EvaGreen Fluorescent ดีเอ็นเอคราบ (Jena Bioscience) 0.125 ไมครอนไพร ( Art2A) หรือ 0.25 ไมครอนไพร (BovB) และ 5 PG ของดีเอ็นเอแม่แบบ สามซ้ำทางชีวภาพได้จัดทำขึ้นเป็นแม่แบบและการวิเคราะห์ในการตรวจ qPCR เรียลไทม์ในที่ซ้ำกัน โพลีเมอโปรโตคอลปฏิกิริยาลูกโซ่คือ: denaturation เริ่มต้นที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีตามด้วย 40 รอบ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที, 61 ° C เป็นเวลา 15 วินาที (Art2A) หรือ 30 วินาที (BovB) และ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที . สัญญาณเรืองแสงวัดในตอนท้ายของแต่ละขั้นตอนการขยาย สำหรับการตรวจสอบของการขยายเฉพาะการวิเคราะห์โค้งละลายด้วยอุณหภูมิลาด 0.1 ° C / วินาทีจาก 61 ° C ถึง 95 ° C ได้รับการดำเนินการ ความจำเพาะไพรเมอร์ได้รับการตรวจสอบโดยการวิเคราะห์ลำดับของการย่อยเริ่มต้นของ amplicons PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โรชวินิจฉัย reagents ) ใช้กับเงื่อนไขต่อไปนี้ : 20 μ L ปฏิกิริยาปริมาณที่มีอยู่ใช้ PCR buffer , MgCl2 3.5 มม. , 250 μ M ของแต่ละ dntp 3 u faststart ได้ดีขึ้น evagreen DNA polymerase เรืองแสงคราบ ( Jena Bioscience ) , 0.125 μ M สีรองพื้น ( art2a ) หรือ 0.25 μ M สีรองพื้น ( bovb ) และ 5 PG ของดีเอ็นเอแม่แบบสามแบบชีวภาพเตรียมเป็นแม่แบบ และวิเคราะห์ข้อมูลในเวลาจริง qpcr ) ในที่ซ้ำกัน การใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส ( โพรโทคอลคือ : เริ่มต้นที่ 95 องศา C 10 นาทีไหม ตามด้วย 40 รอบ 95 องศา C เป็นเวลา 30 วินาที , 61 ° C เป็นเวลา 15 วินาที ( art2a ) หรือ 30 วินาที ( bovb ) และ 72 ° C เป็นเวลา 30 วินาที สัญญาณที่เรืองแสงได้ในตอนท้ายของแต่ละส่วนขยายขั้นตอนสำหรับการตรวจสอบ ( เฉพาะ หลอมด้วยอุณหภูมิลาดโค้งการวิเคราะห์ 0.1 องศา C / S จาก 61 ° C ถึง 95 องศา C มาแสดง ไพรเมอร์ชนิดถูกยืนยันโดยการวิเคราะห์ลำดับเบสของยีนย่อยแรกของ amplicons .