Using PCR, cloning and sequencing t

Using PCR, cloning and sequencing techniques, a 1.1-kb complementary DNA fragment encoding for a b-mannan- ase (mannan endo-1,4-b-mannosidase, EC 3.2.1.78) has been identified in the digestive gland of blue mussel, Mytilus edulis. The cDNA sequence shows significant sequence identity to several b-mannanases in glycoside hydrolase family 5. The b-mannanase gene has been isolated and sequenced from gill tissue of blue mussel and contains five introns. The b-mannanase has been expressed extracellularly in Pichia pastoris using the Saccharomyces cerevisiae a-factor signal sequence. The b-mannanase was produced in a 14-L fermenter with an expression level of 900 mgÆL)1. The expression level is strongly affected by the induction tem- perature. A two-step purification procedure, composed of a combination of immobilized metal ion affinity chromato-

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ใช้ PCR โคลน และลำดับเบสเทคนิค การ 1.1 kb เสริมดีเอ็นเอส่วนเข้ารหัสเป็น b-mannan-ase (mannan endo-1,4-b-mannosidase, EC 3.2.1.78) มีการระบุในต่อมย่อยอาหารของหอยแมลงภู่สีน้ำเงิน Mytilus edulis ลำดับ cDNA ที่แสดงตัวตนสำคัญลำดับ b mannanases หลายใน glycoside hydrolase ครอบครัว 5 ยีน b mannanase แล้วแยก และตามลำดับจากเหงือกเนื้อเยื่อของหอยแมลงภู่สีน้ำเงิน และประกอบด้วยห้า introns B mannanase มีการแสดง extracellularly ใน pastoris Pichia ใช้ Saccharomyces cerevisiae สัญญาณเป็นปัจจัยลำดับ B mannanase ถูกผลิตใน fermenter 14 L มีระดับการนิพจน์ของ 900 mgÆL) 1 ระดับนิพจน์เป็นอย่างยิ่งผลจาก perature ยการของการเหนี่ยวนำ หาขั้นตอนฟอก สองขั้นตอนประกอบด้วยการรวมกันของโลหะไอออนความสัมพันธ์ chromato-

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โดยใช้วิธี PCR โคลนและการหาลำดับเบสเทคนิคการเข้ารหัส 1.1 กิโลประกอบชิ้นดีเอ็นเอสำหรับ ASE b-mannan- (Mannan Endo-1,4-b-mannosidase, EC 3.2.1.78) ได้รับการระบุไว้ในต่อมย่อยอาหารของหอยแมลงภู่สีน้ำเงิน , Mytilus edulis ลำดับ cDNA แสดงให้เห็นถึงตัวตนของลำดับอย่างมีนัยสำคัญไปหลาย mannanases-B ใน glycoside hydrolase ครอบครัว 5 ยีน b-mannanase ถูกโดดเดี่ยวและติดใจจากเนื้อเยื่อเหงือกของหอยแมลงภู่สีน้ำเงินและมีห้า introns b-mannanase ได้รับการแสดงความ extracellularly ใน Pichia pastoris ใช้ Saccharomyces cerevisiae ปัจจัยลำดับสัญญาณ b-mannanase ถูกผลิตในถังหมัก 14 ลิตรที่มีระดับการแสดงออกของmgÆL 900) 1 ระดับการแสดงออกได้รับผลกระทบอย่างรุนแรงจากการเหนี่ยวนำอุณหภูมิที่ ขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์สองขั้นตอนประกอบด้วยการรวมกันของความสัมพันธ์ตรึงโลหะไอออน chromato-

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การใช้เทคนิค PCR , การโคลนและวิเคราะห์ลำดับเป็น 1.1-kb ประกอบดีเอ็นเอเข้ารหัสสำหรับ b-mannan - ase ( Mannan endo-1,4-b-mannosidase EC 3.2.1.78 ) ได้ระบุไว้ในต่อมย่อยอาหารสีฟ้า หอย mytilus ตับเต่า . วิธีที่สำคัญลำดับลำดับแสดงเอกลักษณ์หลาย b-mannanases ในครอบครัวไฮโดรเลส ไกลโคไซด์ 5การ b-mannanase ยีนได้ถูกแยกจากเนื้อเยื่อเหงือกของหอยสีฟ้านี้มี 5 introns . การ b-mannanase ได้รับการแสดง extracellularly ใน pichia pastoris โดยใช้ Saccharomyces cerevisiae a-factor สัญญาณลำดับ การ b-mannanase ถูกผลิตในถังหมัก 14-l ด้วยการแสดงออกที่ระดับ 900 มิลลิกรัมต่อลิตร ) กู้ 1ระดับการแสดงออกอย่างยิ่งคือผลกระทบจากการเหนี่ยวนำเต็ม - perature . กระบวนการบำบัดสองขั้นตอนประกอบด้วยการรวมกันของ chromato จำเพาะไอออนโลหะ
- ตรึง