DNA extractions: Total DNA was isol

DNA extractions: Total DNA was isolated from EtOH-preserved blood samples by a modification of the salt-extraction procedure of MILLER et al. (1988). Approximately 200 pl of blood was pelleted, washed with high TE (100 mM Tris-HC1, 10 mM EDTA, pH 8.0) and resuspended in 700 pl of lysis buffer (10 mM Tris-HC1,4 00 mM NaCl, 2 mM EDTA, pH 8.3) containing 0.8% SDS and 200 pg Proteinase K. After incubating the sample overnight at 55", protein was precipitated by the addition of 350 pl of saturated NaCl solution followed by vigorous shaking on a Vortex for 15 min. After centrifuging for 30 min at 14,000 rpm, the supernatant was transferred to a fresh microfuge tube. DNA was precipitated by the addition of 1 volume of isopropanol. Samples were pelleted, washed with 70% EtOH and resuspended in 100- 150 pl TE. DNA concentrations were determined by measur- ing absorbance at 260 nm on a Hewlett-Packard HP8452A Diode Array spectrophotometer.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สกัดดีเอ็นเอ: ดีเอ็นเอทั้งหมดถูกแยกออกจากตัวอย่างเลือดที่เก็บคะแนน โดยการเปลี่ยนแปลงของกระบวนการสกัดเกลือของมิลเลอร์ et al. (1988) ประมาณ 200 pl ของเลือดถูกสัตว์ ล้าง ด้วย TE สูง (100 มม.ทริ-HC1, EDTA, 10 มม. pH 8.0) และ resuspended ใน 700 pl ของ lysis บัฟเฟอร์ (10 มม.ทริสเรทติ้ง HC1, 4 00 มม. NaCl, 2 mM EDTA, pH 8.3) ที่มี 0.8% SDS และ pg 200 เค Proteinase หลังจาก incubating ตัวอย่างค้างคืนที่ 55 โปรตีนตกตะกอน โดยการเติม 350 pl ของสารละลาย NaCl อิ่มตัวตาม ด้วยการเขย่าคึกคักในวังวน 15 นาที หลังจากสิ่งที่ 14,000 rpm 30 นาที supernatant ถูกถ่ายโอนไปหลอด microfuge สด ดีเอ็นเอถูกตกตะกอน โดยการเติม isopropanol ระดับ 1 ตัวอย่างที่สัตว์ ล้าง ด้วย 70% คะแนนและ resuspended ใน 100-150 pl TE ความเข้มข้นของดีเอ็นเอถูกกำหนด โดยค่าการระบายตัวอย่างนั้น-ing ที่ 260 nm ในสเปค Hewlett-Packard HP8452A ไดโอดอาร์เรย์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สกัดดีเอ็นเอรวมดีเอ็นเอที่แยกได้จากเอทานอลที่เก็บรักษาไว้ตัวอย่างเลือดโดยการเปลี่ยนแปลงขั้นตอนการสกัดเกลือของ Miller et al, (1988) ระยะทางประมาณ 200 PL ของเลือดเม็ดล้างด้วย TE สูง (100 มิลลิเมตร Tris-HC1 10 มิลลิ EDTA, ค่า pH 8.0) และ resuspended ใน 700 PL สลายของบัฟเฟอร์ (10 mM Tris-HC1,4 00 มิลลิโซเดียมคลอไรด์, 2 mm EDTA, ค่า pH 8.3) ที่มีระบบ SDS 0.8% และ 200 PG Proteinase เคหลังจากบ่มตัวอย่างค้างคืนที่ 55 ", โปรตีนตกตะกอนโดยนอกเหนือจาก 350 PL ของการแก้ปัญหาโซเดียมคลอไรด์อิ่มตัวตามด้วยพลังเขย่า Vortex เป็นเวลา 15 นาที. หลังจากเหวี่ยง 30 นาทีที่ 14,000 รอบต่อนาทีใสถูกย้ายไปยังหลอด microfuge สด. ดีเอ็นเอตกตะกอนโดยการเพิ่มขึ้นของปริมาณของ 1 isopropanol. ตัวอย่างเม็ดล้างด้วย 70% เอทานอลและ resuspended ใน 100 150 PL TE. ความเข้มข้นของดีเอ็นเอที่ถูกกำหนดโดย measur- ไอเอ็นจีการดูดกลืนแสงที่ 260 นาโนเมตรบนอาร์เรย์ spectrophotometer Hewlett-Packard HP8452A ไดโอด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดดีเอ็นเอดีเอ็นเอทั้งหมดถูกแยกจากกลุ่มอนุรักษ์ตัวอย่างเลือดโดยการเปลี่ยนแปลงของกระบวนการแยกเกลือมิลเลอร์ et al . ( 1988 ) ที่คุณของเลือดประมาณ 200 เม็ด ล้าง กับ เต้ สูง ( tris-hc1 100 มม. 10 mM EDTA pH 8.0 ) และ resuspended ใน 700 PL ของการสลายบัฟเฟอร์ ( 10 มม. tris-hc1,4 00 mM NaCl , 2 mM EDTA pH 8.3 ) ที่ 0.8% SDS และ 200 pg โปร K . หลังจากการแช่ค้างคืนที่ 55 " . โปรตีนคือตกตะกอนโดยนอกเหนือจาก 350 และตามด้วยเกลือโซลูชั่นที่จะเขย่าเข้มแข็งใน Vortex เป็นเวลา 15 นาที หลังจากสาร 30 นาที ที่ 14000 รอบต่อนาที และน่าน ถูกย้ายไปเป็นหลอด microfuge สด ดีเอ็นเอตกตะกอนโดยเพิ่ม 1 เล่มของไอโซโพรพานอล . จำนวนเม็ด ล้างด้วยแอลกอฮอล์ 70 % และ resuspended 100 - 150 คุณเต้ ดีเอ็นเอปริมาณกำหนดโดยการวัดการดูดกลืนแสงที่ 260 นาโนเมตร - ing ใน Hewlett Packard hp8452a ไดโอดเรย์วัสดุ