Embryogenic calli were induced from

Embryogenic calli were induced from leaf
explants of coffee (Coffea canephora) on McCown’s
woody plant medium (WPM) supplemented with 5 mM
N6
–(2-isopentenyl)-adenosine (2-iP). These calli were
co-cultured with Agrobacterium tumefaciens EHA101
harboring pIG121-Hm, containing b-glucuronidase
(GUS), hygromycin phosphotransferase (HPT), and
neomycin phosphotransferase II genes. Selection of
putative transgenic callus was performed by gradual
increase in hygromycin concentration (5, 50, 100 mg/l).
The embryogenic calli surviving on medium containing
100 mg/l hygromycin showed a strong GUS-positive
reaction with X-Gluc solution. Somatic embryos were
formed from these putative transgenic calli and germinated
on WPM medium with 5 mM 2-iP. Regenerated
small plantlets with shoots and roots were transferred
to medium containing both 100 mg/l hygromycin and
100 mg/l kanamycin for final selection of transgenic
plants. The selected plantlets exhibited strong GUS
activity in leaves and roots as indicated by a deep blue
color. GUS and HPT genes were confirmed to be stably
integrated into the genome of the coffee plants by the
polymerase chain reaction.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

นำเยื่อ calli จากใบไม้explants กาแฟ (Coffea canephora) บนของ McCownกลางพืชวู้ดดี้ (WPM) เสริม ด้วย 5 มม.N6–(2-isopentenyl)-อะดี (2-iP) Calli เหล่านี้ได้อ่างร่วมกับ tumefaciens อโกรแบคทีเรียม EHA101harboring pIG121-Hm ประกอบด้วยบี-glucuronidase(GUS), hygromycin phosphotransferase (HPT), และนีโอมัยซิน phosphotransferase II ยีน ตัวเลือกทำให้ถั่วเหลือง putative โดย gradualเพิ่มความเข้มข้น hygromycin (5, 50, 100 mg/l)Calli เยื่อที่รอดบนที่ประกอบด้วยขนาดกลางhygromycin 100 mg/l พบว่าบวก GUS แข็งแรงปฏิกิริยากับโซลูชัน X-Gluc มีโคลน somaticเกิดขึ้นจาก calli ถั่วเหลืองเหล่านี้ putative และเปลือกงอกบนกลาง WPM กับ 5 มม. 2 iP สร้างใหม่มีการถ่ายโอน plantlets ขนาดเล็ก มียอดและรากปานกลางประกอบด้วยทั้ง hygromycin 100 mg/l และกานามัยซิน 100 mg/l สำหรับการเลือกสุดท้ายของถั่วเหลืองรดน้ำต้นไม้ Plantlets เลือกจัดแสดงที่ GUS แข็งแรงกิจกรรมในใบและรากตามที่ระบุ โดยสีฟ้าเข้มสี ยีน GUS และ HPT ถูกยืนยัน stablyรวมอยู่ในกลุ่มของพืชกาแฟโดยการปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แคลลัสที่ถูกเหนี่ยวนำให้เกิด Embryogenic
จากใบชิ้นส่วนของกาแฟ(กาแฟ canephora) บน McCown
ของกลางพืชไม้(WPM) เสริมด้วย 5 มิลลิ
N6
- (2 isopentenyl) -adenosine (2-IP) แคลลัสเหล่านี้ได้ร่วมกับการเพาะเลี้ยง Agrobacterium tumefaciens EHA101 เก็บงำ pIG121-หืมมมที่มีข glucuronidase (กัส), ไฮโกร phosphotransferase (HPT) และneomycin phosphotransferase สองยีน การเลือกของแคลลัสพันธุ์สมมุติได้ดำเนินการโดยค่อยๆเพิ่มความเข้มข้นไฮโกร(5, 50, 100 mg / l). embryogenic แคลลัสที่หลงเหลืออยู่ในสื่อที่มี100 มิลลิกรัม / ลิตรไฮโกรกัสแสดงให้เห็นบวกที่แข็งแกร่งปฏิกิริยากับการแก้ปัญหาX-Gluc ตัวอ่อนร่างกายถูกสร้างขึ้นมาจากแคลลัสพันธุ์สมมุติเหล่านี้และงอกบนสื่อWPM 5 มิลลิ 2 iP สร้างใหม่ต้นกล้าขนาดเล็กที่มียอดและรากมีการถ่ายโอนไปยังสื่อที่มีทั้ง100 mg / l ไฮโกรและ100 mg / l กานามัยซินในการเลือกสุดท้ายของการดัดแปรพันธุกรรมพืช ต้นกล้าที่เลือกแสดง GUS แข็งแกร่งกิจกรรมในใบและรากตามที่ระบุโดยสีฟ้าเข้มสี และยีน GUS HPT ได้รับการยืนยันที่จะเสถียรรวมอยู่ในจีโนมของพืชกาแฟโดยวิธีPolymerase chain reaction

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เลี้ยงแคลลัสที่เกิดจากใบ
อาหารกาแฟ ( คอฟเฟีย canephora ) เมิ่กเคาน์ของ
วู้ดดี้พืชปานกลาง คือ การเสริมด้วย

( n6 5 มม. ( 2-isopentenyl ) - อะดีโนซีน ( 2-ip ) เหล่านี้ จำกัด เลี้ยงแคลลัส

eha101 Agrobacterium tumefaciens ที่ pig121 HM ที่มี b-glucuronidase
( กัส ) ยีนต้านยา hygromycin phosphotransferase ( HPT ) และนีโอมัยซิน phosphotransferase
2 ยีน การคัดเลือก
การแสดงออกยีนแคลลัสทำโดยค่อยๆเพิ่มปริมาณยีนต้านยา hygromycin
( 5 , 50 , 100 mg / L )

เลี้ยงแคลลัสได้ในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มียีนต้านยา hygromycin 100 mg / l พบแข็งแรงกัสบวก
x-gluc ทำปฏิกิริยากับสารละลาย โซมาติกเอ็มบริโอที่เกิดขึ้นจากยีนเหล่านี้ซึ่งเป็น

ให้เกิดแคลลัสงอกกลางด้วย 2-ip 5 มิล 7
ต้นเล็กๆ ที่มีหน่อและรากถูก
กลางที่มีทั้ง 100 มก. / ล. และยีนต้านยา hygromycin
100 มก. / ล. นสำหรับการเลือกสุดท้ายของพืชต้น

เลือกต้นที่จัดแสดงกิจกรรมกัส
แข็งแรงในใบและราก ( สีฟ้าเข้ม
สี กัส และ HPT ยีนยืนยันจะแน่นแฟ้น
บูรณาการเข้าไปในจีโนมของพืชกาแฟโดย
ปฏิกิริยาลูกโซ่ .