2.6.2. Cytokines
The levels of IL-6, IL-10 and IFN-g present in blood from CD1
female mice treated with Bxb, aspirin, dexamethasone and saline
solution were assayed by a two-site sandwich enzyme-like immunosorbent
assay (ELISA) (Schumacher et al., 1988). Briefly, ELISA
plates were coated with 100 ml (1 mg/mL) of the monoclonal
antibodies anti-IL-6, anti-IL-10 or anti-IFN-g in 0.1 M sodium
carbonate buffer (pH 8.2) and incubated for 6 h at room temperature.
The wells were then washed with 0.1% phosphate-buffered
saline (PBS/Tween-20) and blocked with 100 mL of 10% FCS in PBS
for 2 h at room temperature. After washing, duplicate sera samples
of 50 mL were added to each well. After 18 h of incubation at 4 1C,
the wells were washed and incubated with 100 mL (2 mg/mL) of
the biotinylated monoclonal antibodies anti-IL-6, anti-IL-10 or
anti-IFN-g as second antibodies for 45 min at room temperature.
After a final wash, the reaction was developed by the addition of
OPD to each well. Optical densities were measured at 405 nm in a
microplate reader. The cytokine content of each sample was read
from a standard curve established with the appropriate recombinant
cytokines (expressed in picograms per millilitre). The minimum
levels of each cytokine detectable in the conditions of the
assays were 10 pg/mL for IFN-g and 5 pg/mL for IL-10 and IL-6.
2.6.2 cytokines
ระดับของ IL-6, IL-10 และ IFN-กรัมอยู่ในเลือดจาก CD1
หนูหญิงรับการรักษาด้วย BXB แอสไพริน, dexamethasone
และน้ำเกลือวิธีการแก้ปัญหาที่ถูกวิเคราะห์จากแซนวิชสองเว็บไซต์เอนไซม์เช่นอิมมูโนทดสอบ
(ELISA) (ชูมัคเกอร์ et al., 1988) สั้น ๆ , ELISA
แผ่นเคลือบด้วย 100 มล. (1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร)
ของโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อต้านIL-6, ต่อต้าน IL-10 หรือต่อต้าน IFN-กรัมใน 0.1 M
โซเดียมบัฟเฟอร์คาร์บอเนต(pH 8.2) และบ่มเป็นเวลา 6 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง.
บ่อถูกล้างแล้วกับฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 0.1%
น้ำเกลือ (พีบีเอส / Tween-20) และถูกปิดกั้นด้วย 100 มิลลิลิตร 10% FCS ในพีบีเอสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง
หลังจากล้างซ้ำกันตัวอย่างซีรั่ม
50 มลถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละดี หลังจาก 18 ชั่วโมงของการบ่มที่ 4 1C,
หลุมถูกล้างและบ่มด้วย 100 มิลลิลิตร (2 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร)
แอนติบอดีโมโนโคลนอล biotinylated ต่อต้าน IL-6, ต่อต้าน IL-10
หรือต่อต้านIFN-กรัมเป็นแอนติบอดี้ที่สอง 45 นาทีที่อุณหภูมิห้อง. หลังจากล้างสุดท้ายปฏิกิริยารับการพัฒนาโดยการเพิ่มขึ้นของผู้ป่วยนอกต่อกันเป็นอย่างดี ความหนาแน่นของออปติคอลได้รับการวัดที่ 405 นาโนเมตรในอ่านmicroplate เนื้อหาไซโตไคน์ของกลุ่มตัวอย่างแต่ละคนถูกอ่านจากกราฟมาตรฐานเป็นที่ยอมรับกับ recombinant เหมาะสม cytokines (แสดงใน picograms ต่อมิลลิลิตร) ขั้นต่ำระดับของแต่ละไซโตไคน์ที่ตรวจพบในสภาพของการตรวจ10 pg / มิลลิลิตรสำหรับ IFN-กรัมและ 5 pg / มิลลิลิตรสำหรับ IL-10 และ IL-6
การแปล กรุณารอสักครู่..
ดาวน์โหลด . ไซโตไคน์
ระดับ IL-6 และปัจจุบัน , ifn-g เตอร์ในเลือดจากหนู CD1
หญิงที่ได้รับการรักษาด้วย bxb ยาแอสไพริน , dexamethasone เกลือ
โซลูชั่นถูก assayed โดยและเว็บไซต์สองแซนวิชและเอนไซม์ เช่น
assay ( ELISA ) ( Schumacher et al . , 1988 ) สั้น , ELISA
แผ่นถูกเคลือบด้วย 100 มิลลิลิตร ( 1 mg / ml ) ของโมโนโคลนอลแอนติบอดี anti-il-6 anti-il-10
, หรือ anti-ifn-g ใน 0.1 โมลาร์โซเดียม
คาร์บอเนตบัฟเฟอร์ pH 8.2 ) และบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 6 H .
บ่อแล้วล้างด้วยน้ำเกลือ ( 0.1% ฟอสเฟตบัฟเฟอร์
PBS / tween-20 ) และถูกปิดกั้นด้วย 100 มิลลิลิตรของ 10% FCS ใน PBS
2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง หลังจากล้างซ้ำกัน ( ตัวอย่าง
50 มลเพิ่มแต่ละครั้งได้อีกด้วย หลังจาก 18 H บ่มที่ 4 ในบ่อล้างและ
) , แยก 100 ml ( 2 mg / ml )
ส่วนโมโนโคลนอลแอนติบอดี anti-il-6 anti-il-10 ไล , หรือ
anti-ifn-g เป็นแอนติบอดีตัวที่สอง 45 นาที ที่อุณหภูมิห้อง
หลังจากล้างสุดท้าย ปฏิกิริยาที่ถูกพัฒนาโดยนอกเหนือจาก
OPD แต่ละอย่างดี ความหนาแน่นและวัดแสงที่ 405 นาโนเมตร ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย เป็นผู้อ่าน
ไซโตไคน์ที่เนื้อหาของแต่ละอย่างอ่าน
จากมาตรฐานโค้งขึ้น
แบบเหมาะสมการศึกษา ( แสดงใน picograms ต่อมิลลิลิตร ) ระดับของไซโตไคน์ที่ตรวจพบในแต่ละขั้น
) เงื่อนไขของจำนวน 10 pg / ml และ ifn-g 5 pg / ml และสำหรับเตอร์สร้าง .
การแปล กรุณารอสักครู่..