150 ng of primersand DEPC-treated w

150 ng of primers
and DEPC-treated water to give a volume of 10 L. Samples were
incubated at 65 ◦C and immediately placed in glass for 1 min. A solution
of 2.0 L of RT buffer (10×), 4.0 L of 25 mM MgCl2, 2.0 L of
0.1 mM DTT and 1.0 L of RNaseOUTTM Recombinant RNase Inhibitor
was prepared and 9.0 L was added to each sample. The mixture
was shaken in a vortex, centrifuged at 950
×
g for 5 min and incubated
at 42 ◦C for 2 min. Fifty units of the enzyme SuperScriptTM II
RT were placed in the tubes and left at 42 ◦C for 50 min, and cDNA
synthesis was performed at 70 ◦C for 15 min. cDNA was quantified
by spectrophotometry through readings at wavelengths of 260 nm
and 280 nm. The efficiency of the synthesis was evaluated by amplifying
the gene obtained from ß-actin using RT-PCR and the primers
ß-AC Forward

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

150 ng ของไพรเมอร์และถือว่า DEPC น้ำให้ปริมาตรของตัวอย่าง 10 L.incubated ที่ 65 ◦C และทันทีวางในแก้วใน 1 นาที การแก้ปัญหาของ 2.0 L RT บัฟเฟอร์ (10 ราย), 25 มม. MgCl2, 2.0 L ของ 4.0 LDTT 0.1 mM และ 1.0 L ของสารยับยั้ง RNase วททช RNaseOUTTMถูกเตรียม และ 9.0 L ถูกเพิ่มเข้าไปแต่ละอย่าง ส่วนผสมมีผลสะเทือนในแบบ vortex, centrifuged ที่ 950×g ใน 5 นาที และ incubatedที่ 42 ◦C สำหรับ 2 นาทีห้าสิบหน่วยของเอนไซม์ SuperScriptTM IIใส่ในหลอด และ ◦C 42 50 นาที และ cDNA RTสังเคราะห์ทำที่ 70 ◦C สำหรับ 15 นาที cDNA ถูก quantifiedโดย spectrophotometry ผ่านอ่านที่ความยาวคลื่น 260 nmและ 280 นาโนเมตร มีประเมินประสิทธิภาพของการสังเคราะห์ โดยมือยีนได้รับจากแอกตินบาทใช้ RT-PCR และไพรเมอร์ที่บาท-AC ไปข้างหน้า

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

150
นาโนกรัมของไพรเมอร์และน้ำDEPC รับการรักษาที่จะให้ปริมาณ 10? L ตัวอย่างบ่มที่ 65 ◦Cและวางไว้ในแก้วเป็นเวลา 1 นาที
วิธีการแก้ปัญหาของ 2.0 ลิตรบัฟเฟอร์ RT (10 ×) 4.0? L 25 มิลลิ MgCl2, 2.0 ลิตร 0.1 มิลลิ DTT และ 1.0? ลิตร RNaseOUTTM Recombinant RNase ยับยั้งจัดทำและ9.0? L ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละตัวอย่าง ส่วนผสมที่ถูกเขย่าในน้ำวน, หมุนเหวี่ยงที่ 950 ×กรัมเป็นเวลา 5 นาทีและบ่มที่42 ◦Cเป็นเวลา 2 นาที ห้าสิบหน่วยของเอนไซม์ SuperScriptTM ครั้งที่สองRT ถูกวางไว้ในท่อและทิ้งไว้ที่ 42 ◦C 50 นาทีและยีนสังเคราะห์ได้ดำเนินการที่70 ◦Cเป็นเวลา 15 นาที cDNA ถูกวัดโดยspectrophotometry ผ่านการอ่านในช่วงความยาวคลื่น 260 นาโนเมตรของและ280 นาโนเมตร ประสิทธิภาพของการสังเคราะห์ได้รับการประเมินโดยขยายยีนที่ได้จาก SS-โปรตีนโดยใช้ RT-PCR และไพรเมอร์ß-AC ไปข้างหน้า

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

150 กรัมของไพรเมอร์ และ depc
น้ำเพื่อให้ปริมาณ 10  L . จำนวน
บ่มที่อุณหภูมิ 65 องศาเซลเซียส และ◦ทันทีวางไว้ในแก้ว 1 นาทีโซลูชั่น
2.0  ล. RT บัฟเฟอร์ ( 10 × ) , 4.0  l ชุด 25 มม. 2.0  l
0.1 มม. ส่วนและ 1.0 ลิตร ใช้  rnaseouttm เลสยับยั้ง
ถูกเตรียมและ 9.0  ผมเพิ่มเข้าไปในแต่ละตัวอย่าง ส่วนผสม
ถูกสั่นคลอนในน้ำวน , ระดับที่ 950

×g )
5 นาทีที่ 42 ◦ C 2 นาทีห้าสิบหน่วยของเอนไซม์ superscripttm II
RT อยู่ในหลอดแล้ว 42 ◦เป็นเวลา 50 นาที และการสังเคราะห์ cDNA
แสดงที่ 70 ◦ C เป็นเวลา 15 นาที ยีนถูก quantified
โดยวิธีผ่านการอ่านที่ความยาวคลื่น 260 นาโนเมตร
และ 280 nm . ประสิทธิภาพของแบบประเมินโดย amplifying
ยีนที่ได้จากß - actin โดยใช้ RT-PCR และไพรเมอร์
ß - AC ไปข้างหน้า