1. The Bradford assay is relatively

1. The Bradford assay is relatively free from interference by most commonly used biochemical reagents. However, a few chemicals may significantly alter the absorbance of the reagent blank or modify the response of proteins to the dye (Table 1) . The materials that are most likely to cause problems in biological extracts are detergents and ampholytes (3,8). These can be removed from the sample solution by gel filtration, dialysis, or precipitation of protein with calcium phosphate (9,10). Alternatively, they can be included in the reagent blank and calibration standards at the same concentration as that found in the sample. The presence of base in the assay increases absorbance by shifting the equilibrium of the free dye toward the anionic form. This may present problems when measuring protein content in concentrated basic buffers (3). Guanidine hydrochloride and sodium ascorbate compete with dye for protein, leading to underestimation of the protein content (3).
2. Binding of protein to Coomassie Blue G250 may shift the absorbance maximum of the blue ionic form of the dye from 590 nm to 620 nm (2). It might, therefore, appear more sensible to measure the absorbance at the higher wavelength. However, at the usual pH of the assay, an appreciable proportion of the dye is in the green form (λmax = 650 nm) which interferes with absorbance measurement of the dye–protein complex at 620 nm. Measurement at 595 nm represents the best compromise between maximizing the absorbence due to the dye–protein complex while minimizing that due to the green form of the free dye (2–4; but see also Note 9).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

1.วิเคราะห์แบรดฟอร์ดจะค่อนข้างปลอดสัญญาณรบกวนโดย reagents ชีวเคมีที่ใช้บ่อยที่สุด อย่างไรก็ตาม เคมีกี่อาจมากเปลี่ยนแปลง absorbance ของรีเอเจนต์ว่างเปล่า หรือปรับเปลี่ยนการตอบสนองของโปรตีนการย้อม (ตารางที่ 1) วัสดุที่มักจะทำให้เกิดปัญหาในสารสกัดจากชีวภาพ เป็นผงซักฟอกและ ampholytes (3,8) เหล่านี้สามารถเอาออกจากโซลูชันตัวอย่าง โดยการกรองเจ หน่วย หรือฝนของโปรตีนกับแคลเซียมฟอสเฟต (9,10) หรือ พวกเขาสามารถจะรวมในรีเอเจนต์ว่างและปรับเทียบมาตรฐานที่ความเข้มข้นเดียวกันกับที่พบในตัวอย่าง ของฐานในการวิเคราะห์เพิ่ม absorbance โดยขยับสมดุลของสีย้อมฟรีต่อแบบย้อม นี้อาจนำเสนอปัญหาเมื่อวัดโปรตีนในบัฟเฟอร์พื้นฐานเข้มข้น (3) ไฮโดรคลอไรด์และโซเดียม ascorbate guanidine แข่งขันกับย้อมสำหรับโปรตีน นำ underestimation ของโปรตีน (3)2. ผูกโปรตีนเพื่อ G250 สี Coomassie อาจเปลี่ยน absorbance สูงสุดแบบ ionic สีย้อมจาก 590 nm ไป 620 nm (2) ได้ มันอาจ ดังนั้น ปรากฏเหมาะสมวัด absorbance ที่ความยาวคลื่นสูงมากขึ้น อย่างไรก็ตาม ที่ pH ปกติของแบบทดสอบ สัดส่วนความเห็นของสีย้อมอยู่ในแบบฟอร์มสีเขียว (λmax = 650 nm) ซึ่งรบกวนการวัด absorbance ของคอมเพล็กซ์ย้อม – โปรตีนที่ 620 nm วัดที่ 595 nm แทนในขณะเดียวกันการเพิ่ม absorbence เนื่องจากย้อม – โปรตีนซับซ้อนในขณะที่ลดที่ได้จากแบบฟอร์มสีเขียวของย้อมฟรี (2-4 แต่ดูยัง หมายเหตุ 9)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

1. การทดสอบแบรดฟอค่อนข้างอิสระจากการแทรกแซงโดยทั่วไปมักใช้สารชีวเคมี อย่างไรก็ตามสารเคมีไม่กี่อย่างมีนัยสำคัญอาจปรับเปลี่ยนการดูดกลืนแสงของสารว่างเปล่าหรือปรับเปลี่ยนการตอบสนองของโปรตีนที่จะย้อม (ตารางที่ 1) วัสดุที่มีแนวโน้มที่จะก่อให้เกิดปัญหาในสารสกัดชีวภาพเป็นผงซักฟอกและ ampholytes (3,8) เหล่านี้จะถูกลบออกจากสารละลายตัวอย่างโดยการกรองเจลฟอกไตหรือการตกตะกอนของโปรตีนแคลเซียมฟอสเฟต (9,10) อีกทางเลือกหนึ่งที่พวกเขาสามารถจะรวมอยู่ในมาตรฐานที่ว่างเปล่าและการสอบเทียบสารที่ความเข้มข้นเช่นเดียวกับที่พบในตัวอย่าง การปรากฏตัวของฐานในการทดสอบการดูดกลืนแสงที่เพิ่มขึ้นโดยขยับสมดุลของสีย้อมฟรีต่อรูปแบบประจุลบ นี้อาจมีปัญหาเมื่อวัดปริมาณโปรตีนในบัฟเฟอร์ความเข้มข้นพื้นฐาน (3) ไฮโดรคลอไร guanidine และ ascorbate โซเดียมแข่งขันกับสีย้อมโปรตีนที่นำไปสู่เบาของปริมาณโปรตีน (3).
2 ผูกพันของโปรตีนที่จะ Coomassie สีน้ำเงิน G250 อาจเปลี่ยนสูงสุดดูดกลืนแสงในรูปแบบอิออนสีฟ้าของสีย้อมจาก 590 นาโนเมตร 620 นาโนเมตร (2) มันอาจจึงปรากฏที่เหมาะสมมากขึ้นในการวัดการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่นที่สูงขึ้น อย่างไรก็ตามในค่า pH ปกติของการทดสอบที่เห็นสัดส่วนของสีย้อมที่อยู่ในรูปแบบสีเขียว (λmax = 650 นาโนเมตร) ซึ่งเป็นอุปสรรคกับการวัดการดูดกลืนแสงของสีย้อมโปรตีนที่ซับซ้อนที่ 620 นาโนเมตร วัดที่ 595 นาโนเมตรแสดงให้เห็นถึงการประนีประนอมที่ดีที่สุดระหว่างการเพิ่ม absorbence เนื่องจากการที่ซับซ้อนย้อมโปรตีนในขณะที่ลดว่าเนื่องจากรูปแบบของสีเขียวสีย้อมฟรี (2-4 แต่ดูหมายเหตุ 9)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

1 . ( แบรดฟอร์ดที่ค่อนข้างปลอดจากการแทรกแซงโดยส่วนใหญ่มักใช้เคมี reagents แต่ไม่กี่สารเคมีอาจอย่างมากเปลี่ยนค่าของสารเคมีเปล่าหรือปรับเปลี่ยนการตอบสนองของโปรตีนที่จะย้อม ( ตารางที่ 1 ) วัสดุที่มีแนวโน้มมากที่สุดที่จะทำให้เกิดปัญหาในผงซักฟอกและสารสกัดทางชีวภาพที่มีน้ำหนักแรกเกิดน้อยกว่าปกติ ( 3,8 )เหล่านี้สามารถถูกลบออกจากตัวอย่างสารละลายโดยเจลฟิล ฟอกเลือด หรือการตกตะกอนของโปรตีนกับแคลเซียมฟอสเฟต ( 9,10 ) อีกวิธีหนึ่งคือ พวกเขาสามารถรวมอยู่ในโครงสร้างและมาตรฐานการสอบเทียบที่ว่างเหมือนกัน เท่ากับที่พบในตัวอย่าง การปรากฏตัวของฐานในการทดสอบโดยการเพิ่มค่าสมดุลของฟรีต่อแบบฟอร์มและสี .นี้อาจนำเสนอปัญหาเมื่อการวัดปริมาณโปรตีนในบัฟเฟอร์เข้มข้นพื้นฐาน ( 3 ) กัวนิดีน ไฮโดรคลอไรด์ และโซเดียมแข่งขันกับย้อมโปรตีน ที่นำไปสู่การการประเมินค่าต่ำไปของโปรตีน ( 3 )
2 การผูกโปรตีนเหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า g250 อาจเปลี่ยนค่าการดูดกลืนแสงสูงสุดของรูปแบบไอออนิกสีฟ้าของสีย้อมจาก 590 nm ถึง 620 Nm ( 2 ) มันอาจจะ จึงปรากฏที่เหมาะสมเพื่อวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่นสูง . อย่างไรก็ตามที่ pH ปกติของการทดสอบ มีสัดส่วนของสีย้อมในรูปแบบสีเขียว ( λ max = 650 nm ) ซึ่งรบกวนกับการวัดการดูดกลืนแสงของสีย้อม และโปรตีนที่ซับซ้อนที่ 620 นาโนเมตรวัดที่ 595 nm เป็นประนีประนอมที่ดีที่สุดระหว่างการ absorbence เนื่องจากการย้อมโปรตีนที่ซับซ้อนและในขณะที่ลดเนื่องจากรูปแบบสีเขียวของย้อมฟรี ( 2 ) 4 ; แต่ดูหมายเหตุ 9



)