2. วัสดุและวิธีการ
เก็บตัวอย่างดินอ้างอิง SWy-2 (SWy) และ Saz-1 (Saz) ที่ได้รับจากแหล่งที่มาของดิน
ที่เก็บของแร่ดินเหนียวสมาคมตั้งอยู่ที่มหาวิทยาลัยเพอร์ดู (เวสต์ลาฟาแยต IN) SWy
ตัวอย่างมอนต์มอริลโลไนต์ค่าใช้จ่ายที่ต่ำจากไวโอมิงและ Saz มอนต์มอริลโลไนต์เป็นค่าใช้จ่ายสูง
จากแอริโซนา Novasil บวก (มอนต์มอริลโลไนต์ค่าใช้จ่ายต่ำ) เป็นผลิตภัณฑ์ของ Trouw โภชนาการซึ่งเป็น
ส่วนหนึ่งของ Englehard คอร์ปอเรชั่นเคมีตัวเร่งปฏิกิริยากรุ๊ป (600 East McDowell Road, แจ็คสัน, MS
39204) ตัวอย่างดินที่ถูกนาอิ่มตัวโดยการรักษาด้วยโซเดียมคลอไรด์, <2 ไมโครเมตรเศษดินที่ถูก
แยกจากกันโดยการหมุนเหวี่ยงและ <2 ไมโครเมตรเศษดินก็แห้ง ถ่านกัม (อัลคาไลน์
Norit-คาร์บอน decolorizing) ที่ได้รับจากฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ กระจายของ <2 ไมโครเมตรดินและ
ถ่านที่เตรียมโดยใช้หัววัดอัลตราโซนิกและผสมน้ำวน แป้งข้าวโพดที่ได้รับ
จากร้านขายของชำในท้องถิ่น อะฟลาท็อกซินบี 1 กระต่ายแอนติบอดีต่อต้านอะฟลาท็อกซินบี 1 คอนจูเกตอะฟลาท็อกซินบี 1-BSA,
แพะต่อต้านกระต่าย peroxidase ม้าหัวไชเท้า (HRP) ผันฟอสเฟตเกลือเป็นกลางกับ 0.05%
Tween 20 (PBST) และ o-Phenylenediamine dihydrochloride (OPD) พื้นผิว แท็บเล็ตที่ได้รับ
จาก Sigma-Aldrich การแก้ปัญหาที่มีความเสถียร AFB1 หุ้นได้จัดทำขึ้นโทลูอีน 95% / 5% acetonitrile และ
เก็บไว้ในตู้เย็น [38] โซลูชั่นหุ้นอะฟลาท็อกซินถูกสอบเทียบโดยการวัดการดูดกลืนแสงยูวี
ของ AFB1 ละลายในเมทานอลที่ 360 นาโนเมตร [38] เอนไซม์ที่เชื่อมโยง immunoassay microplates ถูกล้าง
และอ่านโดยใช้เครื่องซักผ้าจาน ELx50 Bio-Tek และ ELx800uv (เครื่องมือ Bio-Tek, Inc .; ไฮแลนด์
พาร์ค Box 998, นุ, VT) อ่านแผ่น.
2.1 เตรียมความพร้อมของการลดค่าใช้จ่ายดิน
ความจุแลกเปลี่ยนไอออนบวก (CEC) และค่าใช้จ่ายชั้นของ montmorillonites ลิเธียมอิ่มตัว
ลดลงหลังจากการรักษาความร้อน การลดลงของ CEC มอนต์มอริลโลไนต์โดยลิเธียม / รักษาความร้อน
ที่เรียกว่า Hofmann-Klemen ผล [39] ลิเธียมลดค่าใช้จ่ายที่ทำให้มันเป็นไปได้ที่จะแตกต่างกันไป
CEC / ค่าใช้จ่ายของกลุ่มตัวอย่างชั้นดินโดยเฉพาะอย่างยิ่งและตรวจสอบผลกระทบของค่าใช้จ่ายในชั้นอื่น ๆ
คุณสมบัติ ตัวอย่าง <2 ไมโครเมตร Saz-1 มอนต์มอริลโลไนต์กับหลี่ 35% และ 65% ในนาไอออนบวก
เว็บไซต์แลกเปลี่ยนถูกจัดทำขึ้น [40] 0.35Li, 0.65Na-Saz ตัวอย่างถูกความร้อนที่ 250 องศาเซลเซียสในผลึก
แก้วเบ้าหลอมในการผลิตลดลงประมาณ 35% ใน CEC / ค่าใช้จ่ายชั้น ค่าใช้จ่ายที่ลดลง Saz ดิน
เกิดขึ้นกำหนด 0.35Li-Saz, มีค่า CEC / ชั้นเปรียบได้กับ SWy.
oxins 2011 556 3
2.2 การเตรียมพื้นผิวดินเหนียว-Modified
พื้นผิวดินเหนียวที่ปรับเปลี่ยนได้จัดทำขึ้นโดยการเปลี่ยนแลกเปลี่ยนประจุบวกในดินเหนียวกับ
ไพเพอร์อินทรีย์ Hexadecyltrimethylammonium (HDTMA) โบรไมด์ที่ได้รับจากอีสต์แมน
phenyltrimethylammonium (PTMA) คลอไรด์ที่ได้รับจาก Fluka และโคลีนคลอไรด์และ
ไฮโดรคลอไร carnitine (รูปที่ 1) ที่ได้รับจากซิกม่า ชั่งน้ำหนักตัวอย่าง (1.63 กรัม) HDTMA
โบรไมด์เท่ากับ CEC (89 cmol / กิโลกรัม) SWy-2 ถูกละลายในเมทานอลและเพิ่มไปยัง
ระงับ 5 กรัม <2 ไมโครเมตร SWy-2 ใน 500 มิลลิลิตรน้ำปราศจากไอออน ระงับถูกกวนเป็นเวลาหนึ่ง
ชั่วโมงและล้างสามครั้งด้วยน้ำปราศจากไอออนโดยการหมุนเหวี่ยงเพื่อลบแลกเปลี่ยนนินทรีย์
เกลือไอออนบวก ชั่งน้ำหนักตัวอย่าง (2.3 กรัม) PTMA คลอไรด์เท่ากับ 3 เท่าของ CEC SWy-2 ถูก
ละลายในน้ำปราศจากไอออนและเพิ่มการระงับ 5 กรัม <2 ไมโครเมตร SWy-2 ใน 500 มิลลิลิตร
น้ำปราศจากไอออน ระงับถูกกวนเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมงและล้างสามครั้งด้วยน้ำปราศจากไอออน
โดยการหมุนเหวี่ยงเพื่อลบการแลกเปลี่ยนไอออนบวกเกลืออนินทรีและ unadsorbed PTMA.
พื้นผิวดินเหนียวที่ปรับเปลี่ยนได้จัดทำเช่นเดียวกันกับโคลีนและคาร์นิทีใช้ 3 ครั้ง CEC เพื่อ
ให้แน่ใจว่าการแลกเปลี่ยนไอออนที่สมบูรณ์และล้างด้วย น้ำปราศจากไอออนลบเพื่อแลกเปลี่ยนนินทรีย์
เกลือไอออนบวกและไอออนบวกอินทรีย์ unadsorbed ผล SWy-HDTMA, SWy-PTMA, SWy-โคลีน,
SWy-Carnitine, Saz-โคลีนและ 0.35Li-Saz-โคลีนเป็นดินเหนียวต่อมาแช่แข็งและ
แห้ง.
2.3 การดูดซับน้ำ AFB1 จาก
การดูดซับชุด isotherms (6 จุดเพิ่มขึ้นสามเท่าใน 4 ช่องว่าง) จากน้ำที่ถูกจัดทำขึ้นด้วย
ความเข้มข้นเริ่มต้นจาก 1 ไมโครกรัม AFB1 / มิลลิลิตรใน 5 มิลลิลิตรกระจายน้ำ กระจายน้ำ
ที่มีอยู่ 10-180 ไมโครกรัมจากดินเหนียวหรือถ่านใน 15 มิลลิลิตรหลอด centrifuge โพรพิลีน หุ้น
วิธีการแก้ปัญหาที่มี 100 ไมโครกรัม AFB1 / มิลลิลิตรใน acetonitrile จัดทำและ aliquots ของการแก้ปัญหาหุ้น
ถูกเจือจางด้วยน้ำและใช้ในการส่ง AFB1 เพื่อแก้ปัญหาไอโซเทอม (50 ไมโครลิตรหุ้น + 0.95 มิลลิลิตรของ
น้ำ = 5 ไมโครกรัม AFB1 / มิลลิลิตร) ช่องว่างที่มีเพียง AFB1 และน้ำได้จัดทำและตัวอย่างและ
ช่องว่างที่ถูกผสมโดยใช้ผสมน้ำวน หลังจากที่กวนค้างคืนบนลูกสูบ
เครื่องปั่นหลอดที่ถูกปั่นและ supernatants ถูกส่งผ่านตัวกรอง 0.2 ไมครอนและ
เก็บใน 20 มลขวดพลาสติก ข้อมูลการดูดซับ AFB1 ถูกติดตั้งกับสมการ Langmuir และ
ขีดความสามารถในการดูดซับ monolayer (Xm) ใน AFB1 กรัม / กกดินจะถูกคำนวณ [41] สมการ Langmuir
ถูกนำมาใช้ในทำนองเดียวกันเพื่อให้พอดีกับการดูดซับ AFB1 ดินจากข้อมูลน้ำ [42].
2.4 AFB1 การเก็บรักษาจากแป้งข้าวโพดกับน้ำเมทานอล 60% สกัด
การดูดซับอะฟลาท็อกซินจากแป้งข้าวโพดกระจายน้ำที่ใช้เป็นใช้มากขึ้นและ
มาตรการอนุรักษ์ของการเก็บรักษาอะฟลาท็อกซิน การดูดซับ Batch isotherms จากข้าวโพด aquous
(6 จุดเพิ่มขึ้นสามเท่าใน 4 ช่องว่าง) ได้รับการจัดทำขึ้นด้วยความเข้มข้นเริ่มต้น 1.5 ไมโครกรัม AFB1 / มิลลิลิตร
(3 ไมโครกรัม AFB1 / g ข้าวโพด) ใน 2 มิลลิลิตรกระจายน้ำที่มี 1-20 มก. (0.1 ถึง 2%) ดินเหนียวหรือ 5 ถึง
100 มิลลิกรัม (0.5-10%) ของถ่าน ช่องว่างได้จัดทำในทำนองเดียวกันโดยใช้เพียง AFB1, แป้งข้าวโพด
และน้ำ 3 ไมโครกรัม AFB1 / g แป้งข้าวโพดที่ใช้ก็เปรียบได้กับการปนเปื้อนสูง
(aflatoxins 3000 ไมโครกรัม / กิโลกรัม) ข้าว ตัวอย่างที่ถูกผสมโดยใช้ผสมน้ำวน หลังจากที่
กวนค้างคืนบนเครื่องปั่นลูกสูบ 8 มิลลิลิตรเมทานอล 60% / 40% 2M NaCl สกัด
oxins 2011 3 557
วิธีการแก้ปัญหาที่ถูกผสมกับกลุ่มตัวอย่างที่ใช้ผสมน้ำวน หลอดถูกปั่นและ
supernatants ผ่านตัวกรอง 0.2 ไมครอนและรวบรวมไว้ใน 20 มลขวดพลาสติก aflatoxins มี
ละลายในเมทานอลกว่าในน้ำ สกัดเมทานอล 60% ได้รับการดัดแปลงมาจากขั้นตอนการ
สกัดและการวัด aflatoxins ในถั่วลิสง [43] วิธี AOCS สำหรับ aflatoxins ในข้าวโพดฝ้าย
ถั่วลิสงและเนยถั่วลิสงในทำนองเดียวกันที่ใช้เมทานอล 80% / 20% สกัดน้ำ [44] การปรับเปลี่ยน
ขั้นตอนแรก equilibrates AFB1 / แป้งข้าวโพด / ดินในน้ำ (มากขึ้นเช่นสภาพแวดล้อมของการกิน
aflatoxins) ก่อนที่จะมีการสกัดด้วยเมทานอล 60% แทนการสกัดทันที [43] AFB1
ข้อมูลการดูดซับกำลังพอดีกับสายน้อยสแควร์โดยใช้การถดถอยเชิงเส้นและความลาดชันหรือการดูดซับ
ค่าสัมประสิทธิ์ (Kd) คำนวณเพื่อใช้ในการเปรียบเทียบความสามารถในการดูดซับญาติ หน่วย Kd (L / กก.) เป็น
อัตราส่วนของการดูดซับ AFB1 (ช AFB1 / กกดิน) หารด้วยความเข้มข้นของการแก้ปัญหาความสมดุล
(ช AFB1 / ลิตร).
2.5 วิธี ELISA AFB1 วัด
immunoassay เอนไซม์ที่เชื่อมโยง (ELISA) วิธีการ [43] มีการปรับเปลี่ยนการวัด AFB1
ความเข้มข้นสำหรับการดูดซับ isotherms [17] สั้น ๆ , สไตรีน 96 หลุม microplates ถูกเคลือบ
ด้วยผัน AFB1-BSA ล้างและบันทึกไว้เพื่อใช้ในภายหลัง ในขั้นตอนแรกอะฟลาท็อกซินมาตรฐาน,
การแก้ปัญหาตัวอย่างและแอนติบอดีต่อต้าน AFB1 ถูกเพิ่มเข้าไปใน AFB1-BSA แผ่นเคลือบ วิธีการ
เทคนิค ELISA แข่งขันเพราะ AFB1 ในการแก้ปัญหา (จากมาตรฐานหรือตัวอย่าง) แข่งขันกับ
AFB1-BSA ผูกไว้กับ microplates กระต่ายต่อต้าน AFB1 แอนติบอดี AFB1 สูง
ตัวอย่าง AFB1 ความเข้มข้นหรือมาตรฐานผูกกับส่วนใหญ่ของกระต่ายแอนติบอดีต่อต้าน AFB1 ซึ่งเป็นที่
ล้างภายหลังจาก microplates AFB1 ในตัวอย่าง AFB1 ความเข้มข้นต่ำหรือ
มาตรฐานไม่ได้ผูกเท่าของแอนติบอดีต่อต้าน AFB1 เป็น AFB1-BSA ที่แนบมากับจานและ
ส่วนใหญ่ของแอนติบอดีต่อต้าน AFB1 จะถูกเก็บไว้ใน microplate แพะต่อต้านกระต่าย HRP แอนติบอดีจะถูก
เพิ่มเข้าไปใน microplates และผูกกับกระต่ายใด ๆ แอนติบอดีต่อต้าน AFB1 ที่แนบมากับ microplates.
ใดแพะโสดต่อต้านกระต่าย HRP ล้างภายหลังจาก microplates ในขั้นตอนสุดท้าย
ผู้ป่วยนอกพื้นผิวจะถูกเพิ่ม microplates และม้าหัวไชเท้าเอนไซม์ peroxidase ในแพะ
ต่อต้านกระต่าย HRP ที่แนบมากับแผ่นกระตุ้นการพัฒนาสี ความหนาแน่นของออปติคอล
โซลูชั่นสีที่มีการผลิตเป็นสัดส่วนผกผันกับความเข้มข้น AFB1 สูง
มาตรฐาน AFB1 ความเข้มข้นและตัวอย่างเบา ๆ สีและช่องว่างที่มีสีเข้ม
ความหนาแน่นของแสงที่วัดโดยใช้เครื่องอ่าน microplate และความเข้มข้นของ AFB1 จะคำนวณตาม
พล็อตของความเข้มข้นของมาตรฐานเมื่อเทียบกับความหนาแน่นของแสง.
2.6 ฐานระยะปลูกเนื้อหาอินทรีย์คาร์บอนและพื้นที่ผิวจำเพาะ
เชิงตัวอย่างดินที่ถูกจัดทำขึ้นโดยแขวนลอยอากาศแห้งบนสไลด์แก้ว สไลด์แก้ว
แห้งต่อไปใน dessicator สูญญากาศและเก็บไว้จนคอลเลกชันของรูปแบบ X-ray diffraction.
รูปแบบการเลี้ยวเบนรังสีเอกซ์ที่ถูกเก็บรวบรวมสำหรับดินเหนียวโดยเน้นการสแกน 2-30 °2θใช้
รังสีCuKαและมาตรการเลี้ยวเบนฟิลิปส์ที่จะเชื่อมต่อ คอมพิวเตอร์ เนื้อหาอินทรีย์คาร์บอนถูก
วัดโดยใช้ LECO (LECO คอร์ปอเรชั่น 3000 Lakeview Ave .; เซนต์โจเซฟ, มิชิแกน) วิเคราะห์คาร์บอน.
ดินและเปิดใช้งานตัวอย่างคาร์บอนถูก outgassed ที่ 120 องศาเซลเซียสและพื้นที่ผิวเฉพาะไนโตรเจนถูก
วัดโดยวิธีจุดเดียว ใช้ Micromeritics (Micromeritics ตราสารคอร์ปอเรชั่น
หนึ่ง Micromeritics ดร .; แอตแลนตา, จอร์เจีย) Flowsorb รูปแบบครั้งที่สอง 2,300 เมตรพื้นที่ผิวโดยใช้ 30%
oxins 2011 3 558
N2 / 70% เขาก๊าซและของเหลว N2 พื้นที่ผิว N2 ดินขยายเช่น
มอนต์มอริลโลไนต์จะประกอบกับพื้นผิวภายนอกเพราะการล่มสลาย interlayers แห้งภายใต้
เงื่อนไขที่จำเป็นสำหรับการตรวจวัด พื้นที่ผิวจำเพาะถูกวัดโดยเอทิลีนไกลคอล
อีเทอร์ monoethyl (EGME) การดูดซับ [45] ตัวอย่างแห้งมากกว่า P2O5 ใน dessicator สูญญากาศ,
ชั่งน้ำหนักและต่อมาย้ายไป dessicator สูญญากาศที่มีละลาย CaCl2-EGME สาม
มิลลิลิตร EGME ถูกเพิ่มเข้าไปใน (~ 1 กรัม) ตัวอย่างและส่วนเกิน unadsorbed EGME ถูกลบออกภายใต้
สูญญากาศจนน้ำหนักคงที่ก็ประสบความสำเร็จ พื้นที่ผิว
การแปล กรุณารอสักครู่..
