antibody and incubated at room temp

antibody and incubated at room temperature for 1 h. Blots
were developed with Clarity ECL regent (Bio-rad) and a
ChemiDoc MP Imaging System (Bio-rad). Densitometry
quantification was performed using ImageJ software
(NIH). Blots are representative of three runs.
ALDEFLUOR assays
Aldehyde dehydrogenase (ALDH) enzyme activity was
determined using the ALDEFLUOR™ Kit (Stem Cell
Technologies, Vancouver, British Columbia, Canada)
according to the manufacturer’s protocol. Briefly 2.0x105
MMTV-PyMT;Apc+/+ or MMTV-PyMT;ApcMin/+ cells
were suspended in Aldefluor™ assay buffer containing
ALDH substrate (Bodipy-Aminoacetaldehyde) which
served as the “test” sample. An identical sample served as
the “control” containing the ALDH substrate and diethylaminobenzaldehyde
(DEAB), a specific ALDH1 enzyme inhibitor.
Both the test and control samples were incubated
for 60 min at 37 °C. The fluorescent ALDH-expressing
cells were detected in the green fluorescence channel
(515–535 nm) of a Cytotomics FC 500 (Beckman Coulter,
Brea, CA) flow cytometer. Data were analyzed using
FlowJo Flow Cytometry Data Analysis Software (Tree Star,
Ashland, OR). The percent shift between gated events in
the test versus control samples was calculated; a greater
shift indicates a greater number of ALDH positive cells in
a given sample.
Statistical analysis
Student’s t-tests were used for all analyses except the
combination treatments where a two-way ANOVA with
Bonferroni post-hoc test was used. A p-value < 0.05 was
considered significant.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แอนติบอดี และ incubated สำหรับกันบล็อท 1 h. ที่อุณหภูมิห้องได้รับการพัฒนา ด้วยความชัดเจน ECL รีเจนท์ (ไบ-rad) และภาพระบบ (ไบ-rad) MP ChemiDoc Densitometryนับถูกดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ ImageJ(NIH) ตัวแทนของการทำงานสามกันบล็อทได้ALDEFLUOR assaysมีเอนไซม์ dehydrogenase (ALDH) แอลดีไฮด์กำหนดโดยใช้ชุดอุปกรณ์™ ALDEFLUOR (เซลล์ต้นกำเนิดเทคโนโลยี แวนคูเวอร์ บริติชโคลัมเบีย แคนาดา)ตามโพรโทคอลของผู้ผลิต 2.0x105 สั้น ๆMMTV-PyMT เอพีซี + /mts + หรือ MMTV-PyMT ApcMin / + เซลล์ถูกหยุดชั่วคราวใน Aldefluor ™วิเคราะห์บัฟเฟอร์ประกอบด้วยALDH พื้นผิว (Bodipy Aminoacetaldehyde) ซึ่งทำหน้าที่เป็นตัวอย่าง "การทดสอบ" ตัวอย่างเหมือนเป็นการ "ควบคุม" ที่ประกอบด้วยพื้นผิว ALDH และ diethylaminobenzaldehyde(DEAB), สารยับยั้งเอนไซม์ ALDH1 ที่ระบุมี incubated ทั้งตัวอย่างการทดสอบและควบคุมใน 60 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียส การเรืองแสง ALDH-แสดงเซลล์ที่พบในช่องเขียว fluorescence(515 – 535 nm) ของ Cytotomics FC (Beckman Coulter, 500Brea, CA) ไหล cytometer มีวิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ซอฟต์แวร์วิเคราะห์ข้อมูลเซลล์ FlowJo ขั้นตอน (แผนภูมิดาวAshland, OR) เปอร์เซ็นต์การเลื่อนระหว่างรั้วเหตุการณ์ในทดสอบกับตัวอย่างควบคุมไม่ได้ มีมากขึ้นกะบ่งชี้จำนวน ALDH บวกเซลล์มากขึ้นตัวอย่างกำหนดวิเคราะห์ทางสถิติใช้สำหรับการวิเคราะห์ทั้งหมดยกเว้น t-ทดสอบของนักเรียนรักษาชุดเป็นการวิเคราะห์ความแปรปรวนสองทางด้วยใช้ทดสอบโพสต์ฮอค Bonferroni P ค่า < 0.05 ได้ถือว่าสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แอนติบอดีและบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง บลอต
ได้รับการพัฒนาด้วยความชัดเจน ECL ผู้สำเร็จราชการแผ่นดิน (Bio-RAD) และ
ChemiDoc MP ถ่ายภาพระบบ (Bio-RAD) densitometry
ปริมาณที่ได้ดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ ImageJ
(NIH) บลอตเป็นตัวแทนของสามวิ่ง.
ALDEFLUOR ตรวจ
dehydrogenase ลดีไฮด์ (ALDH) กิจกรรมของเอนไซม์ได้รับ
การพิจารณาโดยใช้ ALDEFLUOR ™ Kit (เซลล์ต้นกำเนิด
Technologies, แวนคูเวอร์, บริติชโคลัมเบีย, แคนาดา)
ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต สั้น ๆ 2.0x105
MMTV-PyMT; Apc + / + หรือ MMTV-PyMT; ApcMin / + เซลล์
ถูกระงับในบัฟเฟอร์ทดสอบ Aldefluor ™ที่มี
พื้นผิว ALDH (Bodipy-Aminoacetaldehyde) ซึ่ง
ทำหน้าที่เป็น "การทดสอบ" ตัวอย่าง ตัวอย่างเหมือนกันทำหน้าที่เป็น
"ควบคุม" ที่มีพื้นผิวและ ALDH diethylaminobenzaldehyde
(DEAB) เฉพาะยับยั้งเอนไซม์ ALDH1.
ทั้งการทดสอบและตัวอย่างการควบคุมถูกบ่ม
เป็นเวลา 60 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เรืองแสง ALDH-แสดง
เซลล์ถูกตรวจพบในช่องสีเขียวเรืองแสง
(515-535 นาโนเมตร) ของ Cytotomics เอฟซี 500 (Beckman Coulter,
เบรีย, CA) ไหล cytometer วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้
FlowJo cytometry ไหลวิเคราะห์ข้อมูลซอฟต์แวร์ (สตาร์รี,
แอชแลนด์, OR) การเปลี่ยนแปลงร้อยละระหว่างเหตุการณ์รั้วรอบขอบชิดใน
การทดสอบเมื่อเทียบกับตัวอย่างควบคุมที่คำนวณได้; มากขึ้น
แสดงให้เห็นการเปลี่ยนแปลงจำนวนมากของ ALDH เซลล์ในเชิงบวกใน
ตัวอย่างที่กำหนด.
การวิเคราะห์ทางสถิติ
ของนักเรียนเสื้อทดสอบถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ทั้งหมดยกเว้น
การรักษารวมกันที่สองทาง ANOVA กับ
การทดสอบการโพสต์เฉพาะกิจ Bonferroni ถูกนำมาใช้ p-value <0.05 ได้รับการ
พิจารณาอย่างมีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แอนติบอดี และบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง blots
ถูกพัฒนามีความชัดเจน ECL รีเจ้นท์ ( ไบโอ ราด ) และ
chemidoc MP Imaging System ( ไบโอ ราด ) densitometry
ปริมาณการใช้ ImageJ ซอฟต์แวร์
( NIH ) blots เป็นตัวแทนสามวิ่ง aldefluor )

อัลดีไฮด์ ดีไฮโดรจีเนส ( aldh ) เอนไซม์คือ
กำหนดใช้ aldefluor ™ Kit ( ก้านเทคโนโลยีเซลล์
,แวนคูเวอร์ , บริติชโคลัมเบีย , แคนาดา )
ตามขั้นตอนของผู้ผลิต สั้น 2.0x105
mmtv pymt ; APC / หรือ mmtv pymt ; apcmin / เซลล์
หยุดชั่วคราวใน aldefluor ™ในบัฟเฟอร์ที่มีพื้นผิว ( bodipy aminoacetaldehyde aldh

) ซึ่งทำหน้าที่เป็น " ทดสอบ " ตัวอย่าง ตัวอย่างที่เหมือนกันในฐานะ
" ควบคุม " ที่มี aldh ( diethylaminobenzaldehyde
( deab )เฉพาะ aldh1 ตัวยับยั้งเอนไซม์ .
ทั้งตรวจสอบและควบคุมจำนวนเชื้อ
60 นาทีที่ 37 ° C ฟลูออเรสเซนต์ aldh การแสดง
เซลล์พบว่าช่องทางการเรืองแสงสีเขียว
( 515 ) 535 nm ) ของ cytotomics FC 500 ( Beckman Coulter
เบรีย , แคลิฟอร์เนีย ) การใช้โมโน . วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้การวิเคราะห์ข้อมูลการไหล (
flowjo ซอฟต์แวร์ ( ต้นไม้ดาว
แอชแลนด์ , หรือ )เปอร์เซ็นต์การเปลี่ยนระหว่าง gated เหตุการณ์ใน
ทดสอบกับตัวอย่างควบคุมคำนวณ ; เปลี่ยนมากกว่า
หมายถึงจำนวนเซลล์ในตัวอย่างให้บวก aldh
.

นักเรียนสถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลใช้การทดสอบค่าที วิเคราะห์ทั้งหมดยกเว้น
รวมกันรักษาที่การวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบสองทางกับ
บอนเฟอร์โรนี Post Hoc Test ที่ใช้ p < 0.05 คือ
ถือว่าสำคัญ