2. Materials and methods2.1. Chemic

2. Materials and methods
2.1. Chemicals
2,20
-Diphenyl-1-picryl hydrazyl hydrate (DPPH) and 6-hydroxy-
2,5,7,8-tetramethyl-chroman-2-carboxylic acid (trolox) were
obtained from Fluka (Buchs, Switzerland). Folin–Ciocalteu phenol
reagent and TPTZ (2,4,6-tripyridyl-s-triazine) were purchased from
Sigma–Aldrich Chemical Company (St. Louis, MO, USA). Methanol,
acetonitrile and phosphoric acid were of HPLC grade from Merck
(Darmstadt, Germany). Deionized water was prepared by a
Milli-Q Water Purification system (Millipore, MA, USA). Phenolic
standards [(+)-catechin, ()-epicatechin, rutin, tran-resveratrol,
myricetin, quercetin, naringenin, kaempferol, gallic acid vanillic
acid, chlorogenic acid, caffeic acid, ferulic acid, sinapinic acid,
cinnamic acid, pelargonidin, cyanindin, cyanidin-3-O-glucoside,
cyanidin 3-rutinoside, malvin, malvidin 3,5-diglucoside, and delphinidin]
were purchased from Sigma–Aldrich Chemical Company
(St. Louis, MO, USA).
2.2. Sample preparation
Fourteen cultivars of Mao-Luang fruits harvested from the MaoLuang
germplasm collection of the Rajamangala University of
Technology Isan, Northeastern Thailand namely ‘Phuphanthong’,
‘Lungplain’, ‘Kumlai’, ‘Thepnimit’, ‘Sorwannarsung’, ‘Sang krow
No. 1’, ‘Sang krow No. 2’, ‘Huoibang’, ‘Nongwai’, ‘No. 120’,
‘Faprathan’, ‘Lungkumlar’, ‘Phuchong’, and ‘Yaikumtar’ were studied.
Fruits were selected at early morning based on the uniformity
of the color and stored at 4 C immediately after collection. Fruit
samples (50 g) of each Mao-Luang cultivars were lyophilized (Heto
power dry PL 3000 Thermo Electron Corporation, Czech Republic)
at 40 C. After drying the samples were ground and stored at
4 C until analyzed.
Extraction of the polyphenol was as described by Oszmian´ ski,
Wojdylo, and Kolniak (2009) with some modifications. The precisely
weighed (1 g) amount of freeze-dried Mao-Luang samples was
extracted with 10 ml of methanol in a sonicator bath (KuDos
Model 621 OPH, China). Sonication was carried out at ambient
temperature for 20 min. The mixture was centrifuged at
19,000g for 10 min, solvent was decanted, and the residue was
re-extracted with a fresh 10 ml solvent. The two extracts were
combined, and the volume was adjusted to 20 ml with the same
solvent. Appropriate aliquots of extracts were filtered through a
0.45 lm membrane filter and stored at 18 C for future analysis.
2.3. HPLC analysis
HPLC–DAD system (Shimadzu, Japan), comprising of Shimadzu
LC-20AC pumps, a SPD-M20A diode array detector and a Apollo C-
18 column (Alltech Associates, Deerfield, IL, USA)
(4.6 mm 250 mm, 5 lm) protected with guard column Inertsil
ODS-3 (4.0 mm 10 mm, 5 lm; GL Science Inc., Tokyo, Japan) were
used for the analysis of flavonoids, phenolic acids and anthocyanins.
The mobile phase for flavonoids used acetonitrile/deionized water
(2/97.8, v/v) containing 0.2% phosphoric acid (solvent A) and acetonitrile/deionized
water (97.8/2, v/v) containing 0.2% phosphoric
acid (solvent B) at a flow rate of 0.6 ml/min and 40 C column temperature.
The UV–Vis spectra were detected at 254 nm. Gradient
elution started with 20% solvent B, 50% solvent B at 30 min, 60% solvent
B at 35 min, 20% solvent B at 40 min at isocratic elution until
55 min (Butkhup & Samappito, 2008). The mobile phase for phenolic
acids consisted of acetonitrile (solvent A) and phosphoric acid in
deionized water pH 2.58 (solvent B) at a flow rate of 0.8 ml/min and
40 C column temperature. The following gradient was used: 0–
15 min, 9% B, 15–22 min, from 9% B to 11% B, 22–38 min, from
110% B to 18% B, 38–43 min, 18% B to 23% B, 43–45 min, from 23%
B to 30% B, 45–46 min, from 30% B to 80% B, 46–55 min, 80% B,
55–60 min, from 80% B to 5% B. The UV–Vis spectra were detected
at 280 nm for hydroxybenzoic acids and 320 nm for hydroxycinnamic
acids (Kubola, Siriamornpun, & Meeso, 2011). The mobile
phase for anthocyanins used phosphoric acid 4% in deionized water
(solvent A) and acetonitrile (solvent B) at a flow rate of 1 ml/min and
40 C column temperature. The UV–Vis spectra were detected at
520 nm. The linear gradient started with 94% solvent B at 0 min,
75% solvent B at 55 min, 75% solvent B at 65 min at isocratic elution
until 70 min (Wrolstad, Decker, Penner, Reid, & Schwartz, 2005,
Chapter F. pigments and colorants). Quantification was carried out
by comparing the retention times and the spectra as well as by
the addition of standards. The concentrations of phenolic compounds
were calculated using a corresponding external standard.
2.4. Determination of total phenolic content (TPC)
The determination of TPC was carried out using a previously
reported procedure after some modification (Singleton & Rossi,
1965). The absorbance of the samples was determined at 760 nm
using a microplate reader spectrophotometer (Synergy HT, BiotTek
instruments, USA). The equation obtained for the calibration curve
of gallic acid (0.5–100 mg/l) was Y = 0.006X + 0.111 (r = 0.9967).
The results were expressed as milligram gallic acid per 100 g dry
weight (mg GAE/100 g DW).
2.5. Determination of total flavonoid content (TFC)
The determination of TFC was performed using a colorimetric
assay (Mahmood, Anwar, Abbas, & Saari, 2012) with some modifi-
cations. The absorbance of the samples was determined at 510 nm
using a microplate reader spectrophotometer (Synergy HT, BiotTek
instruments, USA). The equation obtained for the calibration curve
of (+)-catechin (0.5–150 mg/l) was Y = 0.005X + 0.093 (r = 0.9980).
The results were expressed as milligram (+)-catechin equivalent
per 100 g dry weight (mg CE/100 g DW).
2.6. Determination of free radical scavenging capacity using DPPH
method
The antioxidant activity of the extract was evaluated through
the free radical scavenging effect on 2,20
-diphenyl-1-picrylhydrazyl
(DPPH) radical as previously reported by Akowuah, Ismail,
Norhayati, and Sadikun (2005). One hundred microliters of
0.2 mM DPPH methanolic solution was added to 100 ll of the sample
extracts. The mixture was thoroughly mixed and kept in the
dark for 1 h. The control was prepared by mixing 100 ll of DPPH
and 100 ll of methanol. The absorbance was measured at
520 nm using a microplate reader spectrophotometer (Synergy
HT, BiotTek instruments, USA). The equation obtained for the
calibration curve of vitamin C (0–200 lm) was Y = 0.001X + 635
S. Jorjong et

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. เคมีภัณฑ์2,20-ฟีนิลได-1-picryl hydrazyl ผับ/เลาจน์ (DPPH) และ 6-hydroxy-มีกรด 2,5,7,8-tetramethyl-chroman-2-carboxylic (trolox)ได้รับจาก Fluka (Buchs สวิตเซอร์แลนด์) วาง Folin-Ciocalteuซื้อจากรีเอเจนต์และ TPTZ (2,4,6-tripyridyl-s-triazine)ซิกมา-Aldrich เคมี บริษัท (St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) เมทานอลacetonitrile และกรดฟอสฟอริกมีเกรด HPLC จากเมอร์ค(ดาร์มส เยอรมนี) น้ำ deionized ถูกเตรียมโดยการQ น้ำฟอกระบบ (มาก MA สหรัฐอเมริกา) ฟีนอมาตรฐาน [(+) -สารสกัดจาก, ()-epicatechin, rutin ทรานจำนวนมาก resveratrolmyricetin, quercetin, naringenin, kaempferol กรด gallic vanillicกรด กรด chlorogenic กรด caffeic กรด ferulic กรด sinapinicกรดทรานส์-ซินนามิก pelargonidin, cyanindin, cyanidin-3-O-glucosidecyanidin 3 rutinoside, malvin, malvidin 3,5-diglucoside และ delphinidin]ซื้อจาก บริษัทเคมี Aldrich-ซิกมา(St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา)2.2. ตัวอย่างสิบสี่พันธุ์ผลไม้เมาหลวงที่เก็บเกี่ยวจากการ MaoLuangคอลเลกชัน germplasm ของวิทยาลัยราชมงคลเทคโนโลยีอีสาน ภาคอีสานคือ 'Phuphanthong''Lungplain', 'Kumlai' 'ใช้ใน' 'Sorwannarsung', ' สัง krowหมายเลข 1', 'Sang krow หมายเลข 2', 'Huoibang', 'Nongwai' 'หมายเลข 120''Faprathan', 'Lungkumlar', 'Phuchong', 'Yaikumtar' และได้ศึกษาเลือกผลไม้ที่เช้าขึ้นอยู่กับความรื่นรมย์สี และเก็บไว้ที่ 4 C ทันทีหลังจากเก็บรวบรวม ผลไม้ตัวอย่าง (50 กรัม) ของแต่ละพันธุ์เม่าหลวงมี lyophilized (Hetoพลังงานแห้ง PL 3000 เทอร์โมอิเล็กตรอน คอร์ปอเรชั่น สาธารณรัฐเช็ก)ที่ 40 เซลเซียส หลังจากแห้ง ตัวอย่างถูกพื้น และเก็บไว้ที่C 4 จนกว่าจะวิเคราะห์Polyphenol สกัดได้ตามที่อธิบายไว้ โดย Oszmian´ สกีWojdylo และ Kolniak (2009) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง แม่นยำชั่งน้ำหนัก (1 g) จำนวนตัวอย่างเมาหลวงกรอบได้สกัด ด้วย 10 ml ของเมทานอลในน้ำ sonicator (คูดอสรุ่น OPH 621 จีน) Sonication ถูกดำเนินการที่แวดล้อมอุณหภูมิสำหรับ 20 นาที ส่วนผสมถูก centrifuged ที่19000 g สำหรับ 10 นาที ตัวทำละลายถูก decanted และสารตกค้างเป็นการสกัด ด้วยตัวทำละลาย 10 ml สดเป็น มีสารสกัดจากสองรวม และถูกปรับปริมาตร 20 ml ด้วยเหมือนกันตัวทำละลาย สม aliquots สารสกัดจากถูกกรองผ่านตัวกรองเมมเบรน lm 0.45 และเก็บไว้ที่ C 18 สำหรับการวิเคราะห์ในอนาคต2.3 วิเคราะห์ HPLCระบบ HPLC – พ่อ (Shimadzu ญี่ปุ่น), ประกอบของ ShimadzuLC 20AC ปั๊ม ตัว SPD M20A ไดโอดอาร์เรย์จับ และอพอลโล C แบบ18 คอลัมน์ (Alltech ร่วม บางนาตราด IL สหรัฐอเมริกา)(4.6 มม. 250 มม. 5 lm) ป้องกัน ด้วยรักษาคอลัมน์ InertsilODS 3 (4.0 มม. 10 มม. 5 lm GL วิทยาศาสตร์ Inc. โตเกียว ญี่ปุ่น) ได้ใช้สำหรับการวิเคราะห์ของ flavonoids กรดฟีนอ และ anthocyaninsเฟสเคลื่อนที่สำหรับ flavonoids ใช้ acetonitrile/deionized น้ำ(2/97.8, v/v) ที่ประกอบด้วยกรดฟอสฟอริก 0.2% (ตัวทำละลาย A) และ acetonitrile/deionizedน้ำ (97.8/2, v/v) ประกอบด้วย phosphoric 0.2%กรด (ตัวทำละลาย B) ที่อัตราการไหลอุณหภูมิคอลัมน์ 0.6 ml/min และ 40 Cแรมสเป็คตรา UV – Vis พบที่ 254 nm การไล่ระดับสีelution เริ่มต้น ด้วยตัวทำละลาย 20% B, 50% ตัวทำละลาย B ที่ 30 นาที 60% ตัวทำละลายB ที่ 35 นาที 20% ตัวทำละลาย B ใน 40 นาทีที่ elution isocratic คิดถึงนาที 55 (Butkhup & Samappito, 2008) เฟสเคลื่อนที่สำหรับฟีนอกรดประกอบด้วย acetonitrile (ตัวทำละลาย A) และกรดฟอสฟอริกdeionized ค่า pH ของน้ำ (ตัวทำละลาย B) 2.58 ที่อัตราการไหล 0.8 มิลลิลิตร/นาที และอุณหภูมิ 40 C คอลัมน์ ใช้การไล่ระดับต่อไปนี้: 0-15 นาที 9% B, 15-22 นาที จาก 9% B 11% B, 22-38 นาที จาก110% B 18% B ขั้นต่ำ 38 – 43, 18% B 23% B, 43 – 45 นาที จาก 23%B 30% B, 45-46 นาที จาก 30% B 80% B, 46-55 นาที 80% Bนาที 55 – 60, 80% B 5% เกิดจาก แรมสเป็คตรา UV – Vis พบที่ 280 nm hydroxybenzoic กรดและ 320 nm สำหรับ hydroxycinnamicกรด (Kubola, Siriamornpun, & Meeso, 2011) มือถือระยะสำหรับ anthocyanins ใช้กรดฟอสฟอริก 4% ในน้ำ deionized(ตัวทำละลาย A) และ (ตัวทำละลาย B) acetonitrile ที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร/นาที และอุณหภูมิ 40 C คอลัมน์ แรมสเป็คตรา UV – Vis พบที่520 nm เริ่มไล่ระดับเส้น 94% ตัวทำละลาย B ที่นาทีที่ 075% ตัวทำละลาย B ที่ 55 นาที 75% ตัวทำละลาย B ในนาที 65 ที่ elution isocratic คิดจนกระทั่งนาที 70 (Wrolstad เหล็กสองชั้น Penner รีด และ Schwartz ปี 2005บท F. สีก colorants) นับเป็นดำเนินการโดยการเปรียบเทียบเวลาที่รักษาและแรมสเป็คตราเช่นโดยนอกจากนี้มาตรฐาน ความเข้มข้นของสารฟีนอมีคำนวณโดยใช้มาตรฐานภายนอกที่เกี่ยวข้อง2.4 การกำหนดเนื้อหาฟีนอรวม (สิ่งทอ)กำหนดของสิ่งทอที่ทำใช้ได้ก่อนหน้านี้รายงานกระบวนการบางอย่าง (เดี่ยว & Rossi1965) กำหนด absorbance ของตัวอย่างที่ 760 nmใช้เป็น microplate reader เครื่องทดสอบกรดด่าง (เอชที Synergy, BiotTekเครื่องมือ สหรัฐอเมริกา) สมการของเส้นโค้งเทียบได้ของกรด gallic (0.5-100 mg/l) คือ Y = 0.006 X + 0.111 (r = 0.9967)ผลลัพธ์ได้แสดงเป็นกรด gallic milligram ต่อแห้ง 100 กรัมน้ำหนัก (mg GAE/100 g DW)2.5 การกำหนดเนื้อหา flavonoid ที่รวม (TFC)ความมุ่งมั่นของ TFC ทำโดยใช้การเทียบเคียงวิเคราะห์ (มะหฺมูด อันวา ระเบิด และ Saari, 2012) กับ modifi บาง-เป็นของหายาก Absorbance ของตัวอย่างถูกกำหนดที่ 510 nmใช้เป็น microplate reader เครื่องทดสอบกรดด่าง (เอชที Synergy, BiotTekเครื่องมือ สหรัฐอเมริกา) สมการของเส้นโค้งเทียบได้ของ (+) -สารสกัดจาก (0.5-150 mg/l) คือ Y = 0.005 X + 0.093 (r = 0.9980)ผลลัพธ์ได้แสดงเป็น milligram (+) -สารสกัดจากที่เทียบเท่าต่อ 100 กรัมแห้งน้ำหนัก (mg CE/100 g DW)2.6 การกำหนดกำลัง scavenging อนุมูลอิสระโดยใช้ DPPHวิธีการกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดจากการถูกประเมินผ่านอนุมูลอิสระ scavenging ผล 2,20-ฟีนิลได-1-picrylhydrazylรัศมี (DPPH) ก่อนหน้านี้ที่รายงาน โดย Akowuah สุลต่านอิสมาอิลNorhayati และ Sadikun (2005) Microliters หนึ่งร้อยของเพิ่มโซลูชั่น methanolic ของ DPPH 0.2 mM 100 จะของตัวอย่างสารสกัด ส่วนผสมอย่างละเอียดผสม และเก็บไว้ในมืดสำหรับ 1 h ตัวควบคุมถูกเตรียม โดยผสม 100 ll ของ DPPHและ 100 ของเมทานอลจะ Absorbance ที่วัดได้520 nm ใช้เป็น microplate reader เครื่องทดสอบกรดด่าง (Synergyเอชที เครื่อง BiotTek สหรัฐอเมริกา) ได้สมการเทียบเส้นโค้งของวิตามินซี (0 – 200 lm) คือ Y = 0.001 X + 635S. Jorjong et

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 สารเคมี
2,20
-Diphenyl-1-picryl hydrazyl ไฮเดรต (DPPH) และ 6 hydroxy-
กรด 2,5,7,8-tetramethyl-chroman-2-carboxylic (Trolox) ได้รับ
ที่ได้รับจาก Fluka (Buchs วิตเซอร์แลนด์) Folin-Ciocalteu ฟีนอล
และสาร TPTZ (2,4,6-tripyridyl-s-triazine) ที่ซื้อมาจาก
บริษัท Sigma-Aldrich เคมิคอล จำกัด (St. Louis, MO, USA) เมทานอล,
acetonitrile และกรดฟอสฟเป็นของเกรด HPLC จากเมอร์
(Darmstadt, เยอรมนี) น้ำ Deionized ถูกจัดทำขึ้นโดย
ระบบน้ำบริสุทธิ์พัน-Q (ค, MA, USA) ฟีนอล
มาตรฐาน [(+) - catechin () -epicatechin, รูติน, tran-Resveratrol,
myricetin, quercetin, naringenin, เฟอรอลกรดแกลลิ vanillic
กรด chlorogenic กรด caffeic กรด ferulic กรด Sinapinic,
กรดซินนามิก, pelargonidin, cyanindin, cyanidin-3-O-glucoside,
cyanidin 3 rutinoside, Malvin, malvidin 3,5-Diglucoside และ delphinidin]
ที่ซื้อมาจาก บริษัท Sigma-Aldrich เคมิคอล จำกัด
(St. Louis, MO, USA).
2.2 การเตรียมตัวอย่าง
สิบสี่สายพันธุ์ของผลไม้เหมาหลวงเก็บเกี่ยวจาก MaoLuang
เก็บรวบรวมเชื้อพันธุกรรมของมหาวิทยาลัยราชมงคล
เทคโนโลยีอีสาน, ภาคตะวันออกเฉียงเหนือ ได้แก่ 'ภูพานทอง',
'Lungplain', 'Kumlai', 'เทพนิมิตร', 'Sorwannarsung', 'Sang เกล้า
ไม่มี . 1 ',' Sang เกล้าครั้งที่ 2 ',' Huoibang ',' หนองหวาย ',' ฉบับที่ 120 ',
'Faprathan', 'Lungkumlar', 'ภุชงค์' และ 'Yaikumtar' การศึกษา.
ผลไม้ได้รับการคัดเลือกในช่วงเช้าของวันขึ้นอยู่กับความสม่ำเสมอ
ของสีและเก็บไว้ที่ 4 C ทันทีหลังจากที่คอลเลกชัน ผลไม้
ตัวอย่าง (50 กรัม) ของแต่ละสายพันธุ์เหมาหลวงถูกแห้ง (Heto
อำนาจแห้ง PL 3000 เทอร์โมอิเลคคอร์ปอเรชั่นสาธารณรัฐเช็ก)
ที่ 40 องศาเซลเซียสหลังจากการอบแห้งตัวอย่างเป็นพื้นดินและเก็บไว้ที่
4 C จนวิเคราะห์.
สกัดโพลีฟีนเป็น ตามที่อธิบายไว้โดย Oszmian' สกี
Wojdylo และ Kolniak (2009) ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง ได้อย่างแม่นยำ
ชั่งน้ำหนัก (1 กรัม) จำนวนเงินที่แห้งตัวอย่างเหมาหลวงถูก
สกัดด้วย 10 ml ของเมทานอลในห้องอาบน้ำ Sonicator (รุ่งโรจน์
รุ่น 621 OPH, จีน) sonication ได้ดำเนินการที่แวดล้อม
อุณหภูมิสำหรับ 20 นาที ส่วนผสมที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่
19,000g เป็นเวลา 10 นาที, ตัวทำละลายค่อยๆรินและสารตกค้างที่ถูก
re-สกัดด้วยสด 10 มลตัวทำละลาย สองสารสกัดถูก
รวมและปริมาณการปรับถึง 20 มลแบบเดียวกับที่
ตัวทำละลาย ส่วนลงตัวที่เหมาะสมของสารสกัดถูกกรองผ่าน
เยื่อกรอง LM 0.45 และเก็บไว้ที่ 18 C สำหรับการวิเคราะห์ในอนาคต.
2.3 การวิเคราะห์ HPLC
ระบบ HPLC-DAD (Shimadzu, ญี่ปุ่น) ประกอบด้วย Shimadzu
LC-20AC ปั๊มไดโอด SPD-M20A เครื่องตรวจจับที่หลากหลายและอพอลโล C-
18 คอลัมน์ (ออลเทคแอสโซซิเดียร์ฟิลด์, อิลลินอยส์, สหรัฐอเมริกา)
(4.6 มิลลิเมตร 250 มิลลิเมตร 5 LM) ป้องกันด้วยยามคอลัมน์ Inertsil
ODS-3 (4.0 มม 10 มม, 5 LM; GL วิทยาศาสตร์อิงค์กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) ได้รับ
. ใช้ในการวิเคราะห์ของ flavonoids กรดฟีนอลและ anthocyanins
เฟสเคลื่อนที่สำหรับ flavonoids ใช้ acetonitrile / น้ำกลั่นปราศจากไอออน
(2 / 97.8, v / v) ที่มีกรดฟอสฟ 0.2% (ตัวทำละลาย) และ acetonitrile / ปราศจากไอออน
น้ำ (97.8 / 2, v / v) ที่มีฟอสฟอรัส 0.2%
กรด (ตัวทำละลาย B) ในอัตราการไหล 0.6 มิลลิลิตร / นาทีและ 40 C อุณหภูมิคอลัมน์.
สเปกตรัม UV-Vis ตรวจพบที่ 254 นาโนเมตร ไล่โทนสี
ชะเริ่มต้นด้วย 20% ตัวทำละลาย B, 50% ตัวทำละลาย B วันที่ 30 นาที, 60% ตัวทำละลาย
ที่ B 35 นาที, 20% ตัวทำละลายที่ B 40 นาทีที่ชะ Isocratic จนกว่า
55 นาที (Butkhup & Samappito 2008) เฟสเคลื่อนที่สำหรับฟีนอล
กรดประกอบด้วย acetonitrile (ตัวทำละลาย) และกรดฟอสฟใน
ค่า pH ของน้ำกลั่นปราศจากไอออน 2.58 (ตัวทำละลาย B) ที่อัตราการไหล 0.8 มิลลิลิตร / นาทีและ
40 C อุณหภูมิคอลัมน์ การไล่ระดับสีต่อไปนี้ถูกนำมาใช้: 0-
15 นาที, 9% B, 15-22 นาทีจากบี 9% เป็น 11% B, 22-38 นาทีจาก
110% B ถึง 18% B, 38-43 นาที, 18% B ไป 23% B, 43-45 นาทีจาก 23%
B ถึง 30% B, 45-46 นาที, จาก 30% B ถึง 80% B, 46-55 นาที, 80% B,
55-60 นาทีจาก 80 % B 5% B. สเปกตรัม UV-Vis ตรวจพบ
ที่ 280 นาโนเมตรสำหรับกรด hydroxybenzoic และ 320 นาโนเมตรสำหรับ hydroxycinnamic
กรด (Kubola, Siriamornpun และ Meeso 2011) มือถือ
ขั้นตอนสำหรับ anthocyanins ใช้กรดฟอสฟ 4% ในน้ำปราศจากไอออน
(ตัวทำละลาย) และ acetonitrile (ตัวทำละลาย B) ที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร / นาทีและ
40 C อุณหภูมิคอลัมน์ สเปกตรัม UV-Vis ตรวจพบที่
520 นาโนเมตร ลาดเชิงเส้นเริ่มต้นด้วย 94% ตัวทำละลาย B ที่ 0 นาที,
75% ตัวทำละลาย B ที่ 55 นาที, 75% ตัวทำละลายที่ B 65 นาทีที่ชะ Isocratic
จนกว่า 70 นาที (Wrolstad ฉูดฉาด, เพนเนอร์, เรดและชวาร์ต, ปี 2005
บทที่ F สี. และสี) ปริมาณได้ดำเนินการ
โดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาและสเปกตรัมเช่นเดียวกับ
การเพิ่มขึ้นของมาตรฐาน ความเข้มข้นของสารประกอบฟีนอล
จะถูกคำนวณโดยใช้มาตรฐานภายนอกที่สอดคล้องกัน.
2.4 การวิเคราะห์หาปริมาณฟีนอลทั้งหมด (RDC)
ความมุ่งมั่นของ TPC ถูกนำออกมาใช้ก่อนหน้านี้
ขั้นตอนการรายงานหลังจากการปรับเปลี่ยนบางส่วน (ซิงเกิล & รอสซี
1965) การดูดกลืนแสงของกลุ่มตัวอย่างถูกกำหนดที่ 760 นาโนเมตร
โดยใช้ผู้อ่าน microplate Spectrophotometer (Synergy HT, BiotTek
เครื่องมือ, ประเทศสหรัฐอเมริกา) สมการที่ได้รับสำหรับกราฟมาตรฐาน
ของกรดแกลลิ (0.5-100 มิลลิกรัม / ลิตร) เป็น Y = 0.006X + 0.111 (r = 0.9967).
ผลการวิจัยแสดงเป็นมิลลิกรัมกรดแกลลิต่อ 100 กรัมแห้ง
น้ำหนัก (GAE มิลลิกรัม / 100 กรัม DW).
2.5 การวิเคราะห์หาปริมาณรวม flavonoid (TFC)
ความมุ่งมั่นของ TFC ได้รับการดำเนินการโดยใช้สี
การทดสอบ (ลอยอันวาร์อับบาสและ Saari, 2012) กับ modifi- บาง
ไพเพอร์ การดูดกลืนแสงของกลุ่มตัวอย่างถูกกำหนดที่ 510 นาโนเมตร
โดยใช้ผู้อ่าน microplate Spectrophotometer (Synergy HT, BiotTek
เครื่องมือ, ประเทศสหรัฐอเมริกา) สมการที่ได้รับสำหรับกราฟมาตรฐาน
ของ (+) - catechin (0.5-150 มิลลิกรัม / ลิตร) เป็น Y = 0.005X + 0.093 (r = 0.9980).
ผลที่ได้รับแสดงเป็นมิลลิกรัม (+) - เทียบเท่า catechin
ต่อ 100 กรัมแห้ง น้ำหนัก (มก CE / 100 กรัม DW).
2.6 การกำหนดความจุไล่อนุมูลอิสระ DPPH โดยใช้
วิธี
ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดถูกประเมินผ่าน
ผลต้านอนุมูลฟรีที่ 2,20
-diphenyl-1-picrylhydrazyl
(DPPH) รุนแรงตามที่รายงานก่อนหน้านี้โดย Akowuah, อิสมาอิล
Norhayati และ Sadikun ( 2005) หนึ่งร้อย microliters ของ
0.2 มิลลิ DPPH แก้ปัญหาเมทานอลถูกบันทึกอยู่ใน 100 LL ของตัวอย่าง
สารสกัดจาก ส่วนผสมที่เป็นผสมอย่างละเอียดและเก็บไว้ใน
ที่มืดเป็นเวลา 1 ชั่วโมง การควบคุมที่ถูกจัดทำขึ้นโดยการผสม 100 LL ของ DPPH
และ 100 LL เมทานอล การดูดกลืนแสงวัดที่
520 นาโนเมตรโดยใช้ผู้อ่าน microplate Spectrophotometer (Synergy
HT, เครื่องมือ BiotTek สหรัฐอเมริกา) สมการที่ได้รับสำหรับ
กราฟมาตรฐานของวิตามินซี (0-200 LM) เป็น Y = 0.001X + 635
S. Jorjong และ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . สารเคมี
2,20
- diphenyl-1-picryl hydrazyl hydrate ( dpph ) และ 6-hydroxy -
2,5,7,8-tetramethyl-chroman-2-carboxylic แอซิด ( สาร ) ที่ได้จาก fluka
( buchs , สวิตเซอร์แลนด์ ) folin – ciocalteu ฟีนอล
และรีเอเจนต์ tptz ( 2,4,6-tripyridyl-s-triazine ) ซื้อจาก บริษัท ซิกม่า Aldrich
เคมี– ( St . Louis , MO , USA )
เมทานอลไนกรดฟอสฟอริกเป็น HPLC Grade จากเมอร์ค
( ดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำเตรียมไว้ด้วย
milli-q น้ำบริสุทธิ์ระบบ ( มิลลิ , MA , USA ) มาตรฐาน ค
[ ( ) - ( ) - แคเทชิน Catechin , ทาง , Tran , Resveratrol ,
ไมริซีทินเคอร์ naringenin แคมเฟอรอล , , , ,
vanillic เพิ่มขึ้นกรด chlorogenic acid Caffeic กรด ferulic acid กรดซินนามิก sinapinic
, , ,pelargonidin cyanindin cyanidin-3-o-glucoside
, , , 3-rutinoside แมลวิน malvidin ไซยานิดิน , , 3,5-diglucoside และเดลฟินิดีน ]
ซื้อมาจาก บริษัท เคมีซิกม่า–ดิช
( St . Louis , MO , USA ) .
2.2 .
ตัวอย่างการเตรียม 14 พันธุ์ของผลไม้เม่าหลวงเก็บเกี่ยวจาก maoluang
พันธุกรรม คอลเลกชันของมหาวิทยาลัยเทคโนโลยีราชมงคลอีสาน
เทคโนโลยีภาคตะวันออกเฉียงเหนือ ได้แก่ phuphanthong
'lungplain ' ' , ' ' kumlai เทพนิมิตร ' ' , ' ' sorwannarsung ' , ' ซังคราว
1 ' , ' ซังคราวที่ 2 ' ' huoibang ' , ' หนองหวาย ' , ' ไม่ 120 ' ,
'faprathan ' , ' lungkumlar ' , ' phuchong ' , และ ' ' yaikumtar ศึกษา .
ผลไม้ถูกเลือกในตอนเช้าตามความสม่ำเสมอ
ของสีและเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียส ทันทีหลังจาก คอลเลกชัน ผลไม้
ตัวอย่าง ( 50 กรัม ) ของแต่ละพันธุ์เม่าหลวง ( heto
พลังที่จะแห้งแห้ง 3000 อิเล็กตรอนร้อน Corporation , สาธารณรัฐเช็ก )
ที่ 40 C หลังจากการอบแห้งจำนวนพื้นดินและเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียส จนวิเคราะห์
.
การสกัดโพลีฟีนอล เป็น ตามที่อธิบายไว้โดย oszmian ใหม่อุปกรณ์สกี ,
wojdylo และ kolniak ( 2009 ) มีการปรับเปลี่ยน และแน่นอน
ชั่ง ( 1 กรัม ) จํานวนผลเม่าหลวง จำนวน
10 มิลลิลิตรสกัดด้วยเมทิลแอลกอฮอล์ในเครื่องเขย่าแบบเสียงนํ้า ( Kudos
รุ่น 621 อ๊อฟ จีน ) sonication กระทำที่อุณหภูมิห้อง
20 นาที ส่วนผสมจะถูกไฟฟ้าที่
19000g 10 นาที ตัวทำละลาย คือ ริน และตกค้าง
Re สดประมาณ 10 มล. สกัดด้วยตัวทำละลาย 2 สารสกัดถูก
รวมและปรับปริมาณ 20 ml ด้วยตัวทำละลายเดียวกัน

เหมาะสมเฉยๆ สกัดถูกกรองผ่านเยื่อกรองและ LM
0.45 อุณหภูมิ 18 องศา สำหรับการวิเคราะห์ในอนาคต .
2.3 เทคนิคการวิเคราะห์
HPLC –พ่อระบบ ( Shimadzu ญี่ปุ่น ) ประกอบด้วย Shimadzu
lc-20ac ปั๊ม , spd-m20a ไดโอดเรย์ตรวจจับและอพอลโล C -
18 คอลัมน์ ( เพราะสมาคม เดียร์ฟิลด์ , อิลลินอยส์ , สหรัฐอเมริกา )
( 4.6 มม. 250 มม. , 5 กล. ) ป้องกันด้วยยามคอลัมน์ inertsil
ods-3 ( 4.0 มม. 10 อืม , 5 อิม ;GL วิทยาศาสตร์ Inc . , โตเกียว , ญี่ปุ่น )
ใช้สำหรับการวิเคราะห์สารฟลาโวนอยด์ กรดฟีโนลิก และ แอนโทไซยานิน .
เฟสเคลื่อนที่สารฟลาโวนอยด์ที่ใช้ไน / คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ
( 2 / 97.8 , V / V ) ที่ 0.2% กรดฟอสฟอริก ( ตัวทำละลาย ) และไน / คล้ายเนื้อเยื่อประสาน
น้ำ ( 97.8/2 , V / V กรดฟอสฟอริค ที่มี 0.2 %
( ตัวทำละลาย B ) ที่อัตราการไหล 0.6 มิลลิลิตรต่อนาทีและอุณหภูมิ 40 C
คอลัมน์UV Vis spectra และถูกตรวจพบใน 254 นาโนเมตร ลาด
( เริ่มต้นกับ 20% ตัวทำละลาย B 50% ตัวทำละลาย B 30 นาที 60 ตัวทำละลาย
b ที่ 35 นาที 20 % ตัวทำละลาย B 40 นาทีที่ 55 นาที ( จน Isocratic
( butkhup & samappito , 2008 ) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยสารฟีโนลิก กรดไน
( ตัวทำละลาย ) และ กรดฟอสฟอริค ใน
คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ pH 2.58 ( ตัวทำละลาย B ) ที่อัตราการไหล 0.8 มิลลิลิตรต่อนาทีและ
คอลัมน์ที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียส . การไล่ระดับสีต่อไปนี้ที่ถูกใช้ : 0 –
15 นาที , 9 % B , 15 – 22 นาทีจาก 9 % B 11 % B , 22 – 38 นาทีจาก
110 % B 18 % B , 38 - 43 นาที 18 % B 23 % B , 43 และ 45 นาทีจาก 23 %
b 30 % B , 45 และ 46 นาที 30 % B 80 % B , 46 และ 55 นาที 80 % B ,
55 – 60 นาทีจาก 80 % B 5 % B . UV Vis Spectra –พบ
ที่ 280 nm เป็น hydroxybenzoic และ 320 nm สำหรับ hydroxycinnamic
กรด ( กุโบลา siriamornpun &มีโซ , , , 2011 ) ระยะเคลื่อนที่
% สำหรับแอนโธไซยานินใช้กรดฟอสฟอริก 4 คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ
( ตัวทำละลาย ) และไน ( ตัวทำละลาย B ) ที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตรต่อนาทีและอุณหภูมิ 40 C
คอลัมน์ . UV Vis Spectra ) พบใน
520 nm . การไล่ระดับสีเส้นเริ่มต้นด้วยตัวทำละลาย B 94 0 นาที
75% ตัวทำละลาย B ที่ 55 นาที 75 % ตัวทำละลาย B 65 นาที (
Isocraticถึง 70 นาที ( wrolstad เด็คเกอร์ เพนเนอร์ รี้ด & Schwartz , 2005
บทที่ F . สีและสี ) ปริมาณข้อมูล
โดยเปรียบเทียบความคงทนครั้งนี้เป็นอย่างดีโดย
2 มาตรฐาน ความเข้มข้นของสารประกอบฟีนอล
) คำนวณโดยใช้มาตรฐานที่สอดคล้องกันภายนอก .
2.4 . การวิเคราะห์ปริมาณฟีนอลิกทั้งหมด ( TPC )
ความมุ่งมั่นของ TPC ได้ดําเนินการใช้ก่อนหน้านี้
รายงานหลังจากขั้นตอนการแก้ไขบางส่วน ( ฌอน แอสติน&รอสซี่
1965 ) นจากจำนวนที่กำหนด 760 nm
โดยใช้พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยอ่าน Spectrophotometer ( USA ) HT , biottek
2 ) สมการที่ได้ในรูปโค้ง
ของเพิ่มขึ้น ( 0.5 - 100 mg / L ) คือ Y = 0.006x ส.ค. ( r =
0.9967 )ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นมิลลิกรัมต่อ 100 กรัมน้ำหนักแห้งเพิ่มขึ้น
( มิลลิกรัม / 100 กรัม ราคาเก )
2.5 การวิเคราะห์หาปริมาณฟลาโวนอยด์ ( TFC )
การหา TFC ได้โดยใช้วิธี Colorimetric
( Mahmood , อันวาร์ Abbas , &ซารี่ , 2012 ) กับโมดิฟาย -
ไอออน . นจากจำนวนที่กำหนด 510 nm
โดยใช้พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( อ่าน Spectrophotometer ( HT , biottek
เครื่องมือ , USA ) สมการที่ได้ในรูปโค้ง
( ) - catechin ( 0.5 – 150 mg / L ) คือ Y = 0.005x 0.093 ( r = 0.9980 ) .
ผลลัพธ์แสดงเป็นมิลลิกรัม ( เทียบเท่า ) - catechin
ต่อ 100 กรัมน้ำหนักแห้ง ( มิลลิกรัม / 100 กรัม CE DW ) .
2.6 การหาปริมาณสารอนุมูลอิสระการความจุโดยใช้วิธี dpph

ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดที่ประเมินผ่าน
มีความสามารถในการต้านสารอนุมูลอิสระใน 2,20
-
( diphenyl-1-picrylhydrazyl dpph ) อนุมูลอิสระเป็นก่อนหน้านี้ที่รายงานโดย akowuah Ismail
, , norhayati และ sadikun ( 2005 ) หนึ่งร้อยตัวเลขของ
0.2 มม. dpph สารละลายเมทานอลเพิ่ม 100 จะของตัวอย่าง
สารสกัด ผสมส่วนผสมให้ละเอียดผสมและเก็บไว้ใน
มืดเป็นเวลา 1 ชั่วโมงสามารถควบคุมได้โดยการผสม 100 จะ dpph
100 จะของเมทานอลนเป็นวัดที่
520 nm ใช้พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( อ่าน Spectrophotometer (
biottek HT , เครื่องมือ , USA ) สมการที่ได้สำหรับ
รูปโค้งของวิตามิน C ( 0 - 200 กล. ) คือ Y = 0.001x 635
S . อิทธานุเวคินและ