4 Anti-CENP-A antibody-specific mot

4 Anti-CENP-A antibody-specific motifs identified using phage display
peptide libraries
Insight into the antigen-contact site of anti-CENP-A antibodies came from Mahler et al.
[118,119], who used sequential peptide scanning and mutational analysis. This work first
identified several proline- and arginine-rich sequences within the immunodominant epitopes
[118], which were further refined the motif to [119], where X is any amino acid
(Table 2). This short motif is present two times in the amino terminus of CENP-A. Since, the
same motif is also found in CENP-B, it was speculated that the motif was at the basis of the
apparent cross-reactivity between CENP-A and CENP-B [119]. Subsequent analyses revealed
that antibodies to the CENP-A-derived peptides Ap1-17 and anti-Ap17-30 (both containing
) did not cross-react with CENP-B [18,101,102], suggesting that the motif
does not completely define the antigenic determinant of these antibodies. An alternative, more powerful strategy for defining the motif amino acids of an antibody
population involves the use of a phage display peptide library (PDPL). A PDPL consists of a collection of phage clones engineered to express up to 109 peptides of a defined length and highly
variable sequence. Peptides can either be linear or cysteine-constrained, the latter allowing the
identification of conformational epitopes [121]. The library is screened with an antibody, in a
process called “panning”, to select those phages that express on their surface a peptide with
affinity for the paratope (antibody’s binding site for antigens). The selected phage clones are
amplified and the sequences of their peptides, which correspond to the antibody’s epitope, are
determined. We previously used this technology to determine the antigenic motifs of monoclonal
[121,122] and polyclonal [117,123] antibodies, and therefore applied it as well in the study of
anti-CENP-A antibodies from SSc patients.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

4 แสดงลวดลายเฉพาะของแอนติบอดีป้องกัน-CENP-A ระบุใช้ phageเปปไทด์จากไลบรารีเข้าใจในการติดต่อ antigen ของแอนตี้ต่อต้าน-CENP-A มาจาก Mahler et al[118,119], ที่ใช้วิเคราะห์การสแกน และ mutational เปปไทด์ตามลำดับ นี้ทำงานก่อนระบุหลายรวยจินี และเป็นลำดับภายใน immunodominant epitopes[118], ซึ่งถูกเพิ่มเติมกลั่นลายเพื่อ [119], X เป็นกรดอะมิโนใด ๆ(ตารางที่ 2) ลายนี้สั้น ๆ อยู่สองครั้งในเทอร์มินัสอะมิโนของ CENP A. ตั้งแต่ การลายเดียวกับที่พบใน CENP-B มันถูกคาดการณ์ว่า ลายเป็นพื้นฐานของการcross-reactivity ชัดเจนระหว่าง CENP A และ CENP-B [119] วิเคราะห์ตามมาเปิดเผยที่แอนตี้ CENP A มาเปปไทด์ Ap1-17 และต่อต้าน-Ap17-30 (ทั้งที่ประกอบด้วย) ไม่ได้ cross-react กับ CENP-B [18,101,102], แนะนำที่ ลายไม่สมบูรณ์กำหนดดีเทอร์มิแนนต์ antigenic ของแอนตี้เหล่านี้ กลยุทธ์อื่น มีประสิทธิภาพในการกำหนดโนภาพของแอนติบอดีที่ประชากรที่เกี่ยวข้องกับการใช้ไลบรารีเพปไทด์แสดง phage (PDPL) PDPL ประกอบด้วยคอลเลกชันของ phage โคลนเพื่อแสดงถึง 109 เปปไทด์ ของความยาวที่กำหนด และสูงลำดับตัวแปร เปปไทด์ได้ทั้งเส้น หรือไส้ จำกัด ให้หลังการการระบุของ conformational epitopes [121] ไลบรารีจะตรวจกับแอนติบอดีที่ ในการกระบวนการที่เรียกว่า "แพน" เลือกที่ phages ที่แสดงบนพื้นผิวของเปปไทด์ด้วยความสัมพันธ์สำหรับ paratope (ของแอนติบอดีรวมไซต์สำหรับ antigens) มี phage เลือกโคลนขยาย และมีลำดับของเปปไทด์ของพวกเขา ซึ่งสอดคล้องกับ epitope ของแอนติบอดีกำหนด เราเคยใช้เทคโนโลยีนี้เพื่อกำหนดแบบ antigenic ของโมโน[121,122] และแอ นตี้ [117,123] polyclonal ดังนั้น ใช้ได้เช่นในการศึกษาแอนตี้ต่อต้าน-CENP-A จากผู้ป่วย SSc

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

4 ต่อต้าน CENP-A แอนติบอดีเฉพาะลวดลายระบุการใช้จอแสดงผล phage
ห้องสมุดเปปไทด์
ลึกเข้าไปในเว็บไซต์แอนติเจนติดต่อของแอนติบอดีต่อต้าน CENP-A มาจากมาห์เลอร์ et al.
[118119] ที่ใช้การสแกนเปปไทด์ตามลำดับและการวิเคราะห์ mutational งานนี้เป็นครั้งแรก
ระบุลำดับ proline- และอาร์จินีที่อุดมไปด้วยหลายภายใน epitopes immunodominant
[118] ซึ่งถูกกลั่นต่อแรงจูงใจในการ[119] ที่ X คือกรดอะมิโนใด ๆ
(ตารางที่ 2) แม่ลายสั้นนี้มีอยู่สองครั้งในปลายทางของอะมิโน CENP-A ตั้งแต่ที่
บรรทัดฐานเดียวกันยังพบใน CENP-B สันนิษฐานว่ามันเป็นบรรทัดฐานอยู่ในพื้นฐานของ
ชัดเจนปฏิกิริยาข้ามระหว่าง CENP-A และ CENP-B [119] วิเคราะห์ตามมาเปิดเผย
ว่าแอนติบอดีไป CENP-A-มาเปปไทด์ Ap1-17 และต่อต้าน Ap17-30 (ทั้งที่มี
) ไม่ได้ข้ามทำปฏิกิริยากับ CENP-B [18101102] บอกว่า บรรทัดฐาน
ไม่สมบูรณ์กำหนดปัจจัยแอนติเจนแอนติบอดีเหล่านี้ ทางเลือกกลยุทธ์ที่มีประสิทธิภาพมากขึ้นสำหรับการกำหนดบรรทัดฐานกรดอะมิโนของแอนติบอดี
ประชากรเกี่ยวข้องกับการใช้ห้องสมุดการแสดงผล phage เปปไทด์ (PDPL) PDPL ประกอบด้วยคอลเลกชันของโคลน phage ออกแบบมาเพื่อแสดงถึง 109 เปปไทด์ที่มีความยาวที่กำหนดไว้และสูง
ลำดับตัวแปร เปปไทด์สามารถเป็นได้ทั้งเชิงเส้นหรือ cysteine ​​จำกัด หลังให้
บัตรประจำตัวของโครงสร้าง epitopes [121] ห้องสมุดจะถูกคัดเลือกกับแอนติบอดีใน
กระบวนการที่เรียกว่า "ปรากฎว่า" เพื่อเลือก phages ผู้ที่แสดงอยู่บนพื้นผิวของพวกเขาเปปไทด์ที่มี
ความใกล้ชิดกับ paratope นี้ (เว็บไซต์ที่มีผลผูกพันแอนติบอดีสำหรับแอนติเจน) โคลนทำลายจุลินทรีย์ที่เลือกจะถูก
ขยายและลำดับของเปปไทด์ของพวกเขาซึ่งสอดคล้องกับ epitope แอนติบอดีที่จะถูก
กำหนด ก่อนหน้านี้เราใช้เทคโนโลยีนี้ในการกำหนดลวดลายแอนติเจนของโมโนโคลนอล
[121,122] และโพลี [117,123] แอนติบอดีและดังนั้นจึงนำมาใช้เป็นอย่างดีในการศึกษาของ
แอนติบอดีต่อต้าน CENP-A จากผู้ป่วย SSC

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

4 anti-cenp-a แอนติบอดีที่เฉพาะระบุว่าแสดงลวดลายโดยใช้ห้องสมุดเปปไทด์ลึกเข้าไปในเว็บไซต์ของ anti-cenp-a แอนติบอดีต่อแอนติเจนที่ติดต่อมาจากมาห์เลอร์ et al .[ 118119 ] ที่ใช้ลำดับเปปไทด์สแกนและการวิเคราะห์เกี่ยวกับการเปลี่ยนแปลง งานนี้ครั้งแรกระบุหลายโปร - และลำดับที่อุดมไปด้วยอาร์ immunodominant ภายในผู้ป่วย[ 118 ] ที่ได้กลั่น แรงจูงใจที่จะ < gpxrx > [ 119 ] เมื่อ x คือกรดอะมิโน( ตารางที่ 2 ) รูปแบบสั้น ๆนี้อยู่ 2 ครั้ง ใน อะมิโน ปลายทางของ cenp-a. ตั้งแต่รูปเดียวกันยังพบใน cenp-b คาดการณ์กันว่า แรงจูงใจที่พื้นฐานของปฏิกิริยาข้ามระหว่าง cenp-a ชัดเจน และ cenp-b [ 119 ] การวิเคราะห์ต่อมาเปิดเผยที่ใช้กับ cenp-a-derived เปปไทด์และ ap1-17 anti-ap17-30 ( ที่มี< gpxrx > ) ไม่มีปฏิกิริยาข้ามกับ cenp-b [ 18101102 ] แนะนำว่า < gpxrx > โมทีฟไม่สมบูรณ์ กำหนดปัจจัยของแอนติเจนแอนติบอดีเหล่านี้ ทางเลือกกลยุทธ์ที่มีประสิทธิภาพสำหรับการกำหนดรูปแบบกรดอะมิโนของแอนติบอดีประชากรที่เกี่ยวข้องกับการใช้งานของเปปไทด์ฟาแสดงห้องสมุด ( pdpl ) เป็น pdpl ประกอบด้วยคอลเลกชันของเฟจโคลนออกแบบมาเพื่อแสดงถึง 109 ของเปปไทด์ที่กำหนดความยาวและสูงลำดับของตัวแปร เปปไทด์ สามารถเป็นได้ทั้งเส้นหรือซีสเตอีน จำกัด หลัง ให้การกำหนดโครงสร้างจาก [ 121 ] ห้องสมุดเป็นมุ้งลวดที่มีแอนติบอดี , ในกระบวนการที่เรียกว่า " แพน " เพื่อเลือกจที่แสดงบนพื้นผิวของเพปไทด์ด้วยความสัมพันธ์กับ paratope ( ) เป็นเว็บไซต์ที่เชื่อมต่อ ) เลือกว่าโคลนขยายและลำดับเปปไทด์ ซึ่งสอดคล้องกับของแอนติบอดีต่อไวรัส ,มุ่งมั่น เราเคยใช้เทคโนโลยีนี้เพื่อกำหนดลวดลายชนิดโมโนโคลนอล[ 121122 ] และ [ ] ใช้ 117123 แอนติบอดีและดังนั้นจึงใช้มันเป็นอย่างดีในการศึกษาanti-cenp-a แอนติบอดีจากผู้ป่วย SSC .