- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
compounds. Moreover, all types of b
compounds. Moreover, all types of body care cosmetics applied to the skin (not only underarm cosmetics) can be a source of local estrogenic chemical input to the breast and therefore should be considered in risk assessments [14]. Gas Chromatography–Mass Spectrometry (GC–MS) is well suited for the identification of a large number of potential steroids and metabolites due to its high chromatographic resolution capacity and reproducible ionization efficiency [15]. This study was aimed to develop a simple and suitable method for the detection and quantification of paraben preservatives in human tissue using GC–MS. Silylation of parabens with MSTFA was adopted in the analysis to improve the performance of GC–MSdetermination.
2. Experimental
2.1. Reagents and chemicals
The reference standards of MeP, EtP, PrP and BuP, and the derivatizing reagent, N-Methyl-N-(trimethylsilyl) trifluoroacetamide (MSTFA) were purchased from Sigma-Aldrich (USA). Acetone and ethyl acetate of HPLC grade were procured from Qualigens Fine Chemicals (Mumbai, India). Sodium sulfate (anhydrous) and glass wool were obtained from HiMedia Laboratory Pvt. Ltd., (Mumbai,India). Silica gel and florisil (60–120 mesh) were procured from Merck Specialties Private Limited (Mumbai, India). The laboratorypurified water was obtained from a water purification system (ELGA,UK). To avoid potential contamination with parabens, the glassware were sequentially washed with 10% soap solution (Labolene), tap water and 50% hydrochloric acid (HCl), ultrapure water and acetone. Then they were air dried and covered with aluminium foil and sterilized in hot air oven (Heco, Chennai, India) at 200 °C for 12 h.
2.2. Standard solutions
The individual standard stock solutions were prepared by accurately weighing 10 mg of methyl, ethyl, propyl and butyl
parabens separately and dissolving them in 100 mL of acetone:ethyl acetate (1:1 v/v) (100 μg mL−1). The working standard solutions for calibration and for recovery spike were prepared at required concentrations from the stock standard solutions, and stored at −20 °C.
2.3. Sample preparation
2.3.1. Parabens extraction
One gram of the breast tissue was homogenized with 3 g of anhydrous sodium sulfate and 15 mL of acetone:n-hexane (1:1 v/v), and transferred to a conical flask for extraction by mechanical shaking for 12 h. After extraction, the extract was transferred to a centrifuge tube and centrifuged (3000 rpm; 10 min) at room temperature. The supernatant was collected in a glass tube, the pellet was again extracted by shaking manually with 5 mL of acetone–hexane mixture and the supernatant was collected. The extracts were pooled and 3 g of anhydrous sodium sulfate was added to it, shaken well to remove moisture. Then the extract was condensed (dried) using a vacuum rotavapour (Buchi R 210, Switzerland) at 35 °C and reconstituted in 1 mL of ethyl acetate.
2.3.2. Silica gel cleanup
The extract cleanup was done with solid phase extraction (SPE) using silica gel. Three grams of silica gel (60–120 mesh, baked at 200 °C for 12 h) was stirred with ethyl acetate to form slurry and poured into a glass column (16×1.5 cm), then Na2SO4 was layered (~1 cm) above the silica gel and finally, conditioned with 15 mL of ethyl acetate. The concentrated extract was transferred to the column and eluted with 15 mL of ethyl acetate. The eluate was collected and condensed (0.5 mL) with a rotavapour and by gentle purging of N2 and then transferred to amber glass GC vial for derivatization.
2.3.3. Derivatization
Derivatization is a very useful process for detecting compounds in complex samples, and applied widely in forensic, medical and environmental chemistry [16]. Silylation is the most widely used derivatization technique and normally it does not require a purification step, and the derivatives can be injected directly into the GC [17]. The introduction of a silyl group(s) can also serve to enhance mass spectrometric properties of the derivatives, by producing either more favorable diagnostic fragmentation patterns for use in structure investigations, or the characteristic ions for use in trace analyses in
GC–MS under selected ion monitoring mode. In this study, we aimed to detect and quantify parabens that are highly polar and thermally fragile. In order to make the parabens suitable for GC analysis, they require transformation into more volatile and thermally stable compounds. For this purpose,we used derivatizing reagent MSTFA. The MSTFA derivatization achieved complete derivatization and permitted the detection of compounds containing polar function groups with adequate signal-to-noise (S/N) ratio. Derivatization decreases the LODs of GC–MS methods and therefore achieves sensitivity comparable to that of LC–MS, and GC–MS analysis after derivatization is an efficient alternative to LC–MS [18].
For derivatization of parabens, 100 ng of working standards was transferred to amber glass GC vials containing 500 μL of ethyl acetate. Then derivatizing reagent (MSTFA) was added. The conditions for derivatization were determined through investigating the effects of various experimental parameters including the reaction time and the volume of reagent on the analytical response of the compounds. Silylation was optimized with different volumes (ie. 10, 20, 30, 40 and 50 μL) of MSTFA (N-Methyl-N-(trimethylsilyl) trifluoroacetamide) and different incubation times (ie. 15, 30, 45, 60, 75 and 90 min) at 70 °C. After silylation, 1 μL of the derivatized solution was analyzed by GC–MS.
2.3.4. Quality control
One gram of non-cancerous breast tissue was spiked individually with 50, 100, 200 and 300 ng mL−1 parabens (methyl-, ethyl-, propyland butyl paraben) and extracted, followed by SPE cleanup and derivatized as mentioned in earlier sections, and the recovery and linearity were measured. Precision was also calculated as relative standard deviation (RSD) of the experimental concentrations.
2.4. GC–MS analysis
The detection and quantification of parabens were performed using a Shimadzu (Japan) QP-2010 GC–MS system equipped with a Shimadzu AOC-20i auto sampler. Chromatographic separation of parabens was achieved with DB-1 fused silica capillary column (30 m×0.32 mm i.d., 0.25 μm film thickness, J&W Scientific, Folsom, CA, USA). Helium with a purity of 99.999% was used as the carrier gas at a flow rate of 2.25 mL min−1. One μL of derivatized extract was injected in splitless mode using an auto sampler. The injector port, interface and ion source temperatures were set at 250, 270 and
230 °C, respectively. The GC temperature was programmed as follows: 50 °C (1 min), 30 °C min−1 ramp to 220 °C, 2 °C min−1 ramp to 230 °C, and 15 °C min−1 ramp to 320 °C (10 min hold). The mass spectrometer was operated in electron ionization (EI) mode at 70 eV and at an emission current of 60 μA. Full scan data was obtained in a mass range of m/z 35–500. Scanning interval and SIM sampling rate were 0.5 and 0.2 s, respectively. The mass selective detector was operated in selected ion monitoring (SIM) mode and mass ions for each compound are given in Table 1.392 G. Shanmugam et al. / Microchemical Journal 96 (2010) 391–396
2. Experimental
2.1. Reagents and chemicals
The reference standards of MeP, EtP, PrP and BuP, and the derivatizing reagent, N-Methyl-N-(trimethylsilyl) trifluoroacetamide (MSTFA) were purchased from Sigma-Aldrich (USA). Acetone and ethyl acetate of HPLC grade were procured from Qualigens Fine Chemicals (Mumbai, India). Sodium sulfate (anhydrous) and glass wool were obtained from HiMedia Laboratory Pvt. Ltd., (Mumbai,India). Silica gel and florisil (60–120 mesh) were procured from Merck Specialties Private Limited (Mumbai, India). The laboratorypurified water was obtained from a water purification system (ELGA,UK). To avoid potential contamination with parabens, the glassware were sequentially washed with 10% soap solution (Labolene), tap water and 50% hydrochloric acid (HCl), ultrapure water and acetone. Then they were air dried and covered with aluminium foil and sterilized in hot air oven (Heco, Chennai, India) at 200 °C for 12 h.
2.2. Standard solutions
The individual standard stock solutions were prepared by accurately weighing 10 mg of methyl, ethyl, propyl and butyl
parabens separately and dissolving them in 100 mL of acetone:ethyl acetate (1:1 v/v) (100 μg mL−1). The working standard solutions for calibration and for recovery spike were prepared at required concentrations from the stock standard solutions, and stored at −20 °C.
2.3. Sample preparation
2.3.1. Parabens extraction
One gram of the breast tissue was homogenized with 3 g of anhydrous sodium sulfate and 15 mL of acetone:n-hexane (1:1 v/v), and transferred to a conical flask for extraction by mechanical shaking for 12 h. After extraction, the extract was transferred to a centrifuge tube and centrifuged (3000 rpm; 10 min) at room temperature. The supernatant was collected in a glass tube, the pellet was again extracted by shaking manually with 5 mL of acetone–hexane mixture and the supernatant was collected. The extracts were pooled and 3 g of anhydrous sodium sulfate was added to it, shaken well to remove moisture. Then the extract was condensed (dried) using a vacuum rotavapour (Buchi R 210, Switzerland) at 35 °C and reconstituted in 1 mL of ethyl acetate.
2.3.2. Silica gel cleanup
The extract cleanup was done with solid phase extraction (SPE) using silica gel. Three grams of silica gel (60–120 mesh, baked at 200 °C for 12 h) was stirred with ethyl acetate to form slurry and poured into a glass column (16×1.5 cm), then Na2SO4 was layered (~1 cm) above the silica gel and finally, conditioned with 15 mL of ethyl acetate. The concentrated extract was transferred to the column and eluted with 15 mL of ethyl acetate. The eluate was collected and condensed (0.5 mL) with a rotavapour and by gentle purging of N2 and then transferred to amber glass GC vial for derivatization.
2.3.3. Derivatization
Derivatization is a very useful process for detecting compounds in complex samples, and applied widely in forensic, medical and environmental chemistry [16]. Silylation is the most widely used derivatization technique and normally it does not require a purification step, and the derivatives can be injected directly into the GC [17]. The introduction of a silyl group(s) can also serve to enhance mass spectrometric properties of the derivatives, by producing either more favorable diagnostic fragmentation patterns for use in structure investigations, or the characteristic ions for use in trace analyses in
GC–MS under selected ion monitoring mode. In this study, we aimed to detect and quantify parabens that are highly polar and thermally fragile. In order to make the parabens suitable for GC analysis, they require transformation into more volatile and thermally stable compounds. For this purpose,we used derivatizing reagent MSTFA. The MSTFA derivatization achieved complete derivatization and permitted the detection of compounds containing polar function groups with adequate signal-to-noise (S/N) ratio. Derivatization decreases the LODs of GC–MS methods and therefore achieves sensitivity comparable to that of LC–MS, and GC–MS analysis after derivatization is an efficient alternative to LC–MS [18].
For derivatization of parabens, 100 ng of working standards was transferred to amber glass GC vials containing 500 μL of ethyl acetate. Then derivatizing reagent (MSTFA) was added. The conditions for derivatization were determined through investigating the effects of various experimental parameters including the reaction time and the volume of reagent on the analytical response of the compounds. Silylation was optimized with different volumes (ie. 10, 20, 30, 40 and 50 μL) of MSTFA (N-Methyl-N-(trimethylsilyl) trifluoroacetamide) and different incubation times (ie. 15, 30, 45, 60, 75 and 90 min) at 70 °C. After silylation, 1 μL of the derivatized solution was analyzed by GC–MS.
2.3.4. Quality control
One gram of non-cancerous breast tissue was spiked individually with 50, 100, 200 and 300 ng mL−1 parabens (methyl-, ethyl-, propyland butyl paraben) and extracted, followed by SPE cleanup and derivatized as mentioned in earlier sections, and the recovery and linearity were measured. Precision was also calculated as relative standard deviation (RSD) of the experimental concentrations.
2.4. GC–MS analysis
The detection and quantification of parabens were performed using a Shimadzu (Japan) QP-2010 GC–MS system equipped with a Shimadzu AOC-20i auto sampler. Chromatographic separation of parabens was achieved with DB-1 fused silica capillary column (30 m×0.32 mm i.d., 0.25 μm film thickness, J&W Scientific, Folsom, CA, USA). Helium with a purity of 99.999% was used as the carrier gas at a flow rate of 2.25 mL min−1. One μL of derivatized extract was injected in splitless mode using an auto sampler. The injector port, interface and ion source temperatures were set at 250, 270 and
230 °C, respectively. The GC temperature was programmed as follows: 50 °C (1 min), 30 °C min−1 ramp to 220 °C, 2 °C min−1 ramp to 230 °C, and 15 °C min−1 ramp to 320 °C (10 min hold). The mass spectrometer was operated in electron ionization (EI) mode at 70 eV and at an emission current of 60 μA. Full scan data was obtained in a mass range of m/z 35–500. Scanning interval and SIM sampling rate were 0.5 and 0.2 s, respectively. The mass selective detector was operated in selected ion monitoring (SIM) mode and mass ions for each compound are given in Table 1.392 G. Shanmugam et al. / Microchemical Journal 96 (2010) 391–396
0/5000
สารประกอบ นอกจากนี้ ทุกประเภทของเครื่องสำอางดูแลร่างกายนำไปใช้กับผิวหนัง (ไม่เฉพาะเหงื่อใต้วงแขนเครื่องสำอาง) สามารถเป็นแหล่งของถิ่น estrogenic เคมีเข้ากับ และดังนั้นจึง ควรพิจารณาในการประเมินความเสี่ยง [14] Chromatography ก๊าซ – มวล Spectrometry (GC – MS) เหมาะสำหรับรหัสของของสเตอรอยด์และ metabolites ของกำลังการผลิตสูงความละเอียด chromatographic และ ionization จำลองประสิทธิภาพ [15] ศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาวิธีง่าย และเหมาะสำหรับการตรวจพบ และนับของสารกันบูด paraben ในเนื้อเยื่อมนุษย์ด้วย GC – นางสาว Silylation ของ parabens MSTFA ถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์เพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพของ GC – MSdetermination2. ทดลอง2.1. reagents และเคมีภัณฑ์มาตรฐานอ้างอิงของ MeP, EtP, PrP และ BuP และรีเอเจนต์ derivatizing, N-Methyl-N-(trimethylsilyl) trifluoroacetamide (MSTFA) ถูกซื้อจากซิก Aldrich (สหรัฐอเมริกา) อะซีโตนและเอทิล acetate HPLC เกรดได้ค้นหาสารเคมีดี Qualigens (มุมไบ อินเดีย) โซเดียมซัลเฟต (ได) และเส้นใยแก้วได้รับจาก HiMedia ปฏิบัติ pvt. จำกัด, (มุมไบ อินเดีย) ซิลิก้าเจลและ florisil (60 – 120 ตาข่าย) ถูกค้นหาจากบริษัทเมอร์ค จำกัดส่วนอาหาร (มุมไบ อินเดีย) น้ำ laboratorypurified ได้รับจากระบบฟอกน้ำ (ELGA, UK) เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนที่อาจเกิดขึ้นกับ parabens แก้วถูกตามลำดับสามารถล้าง ด้วยโซลูชั่นสบู่ 10% (Labolene), น้ำประปา และ 50% กรดไฮโดรคลอริก (HCl), น้ำ ultrapure และอะซิโตน แล้ว จะมีอากาศแห้ง และปกคลุม ด้วยอลูมิเนียมฟอยล์ sterilized ในเตาอบอากาศร้อน (Heco เจนไน อินเดีย) ที่ 200 ° C สำหรับ 12 h2.2 การแก้แต่ละมาตรฐานหุ้นโซลูชั่นถูกเตรียม โดยชั่งได้ถูกต้อง 10 มก.ของ methyl เอทิล propyl และด...parabens ต่างหาก และยุบไปใน 100 mL ของเอทิลอะซิโตน: acetate (1:1 v/v) (100 μg mL−1) ทำงานมาตรฐานโซลูชั่น สำหรับการปรับเทียบ และ สำหรับการกู้คืนที่เก็บชั่วคราวได้เตรียมที่ความเข้มข้นต้องจากโซลูชั่นมาตรฐานหุ้น และเก็บไว้ที่ −20 องศาเซลเซียส2.3. ตัวอย่าง2.3.1. Parabens สกัดหนึ่งกรัมของเนื้อเยื่อเต้านมถูก homogenized เป็นกลุ่ม มี 3g ไดโซเดียมซัลเฟต และ 15 mL ของอะซีโตน: เอ็น-เฮกเซน (1:1 v/v), และทรงกรวยหนาวสำหรับแยกโอนสั่นทางกลสำหรับ 12 h หลังจากสกัด สารสกัดถูกโอนย้ายไปหลอดเครื่องหมุนเหวี่ยง และ centrifuged (3000 รอบต่อนาที 10 นาที) ที่อุณหภูมิห้อง Supernatant รวบรวมไว้ในหลอดแก้ว เม็ดถูกสกัด โดยสั่นด้วยตนเองด้วย 5 mL ของส่วนผสมอะซีโตน – เฮกเซนอีก และ supernatant รวบรวมไว้ สารสกัดถูกทางถูกพู และ g 3 ของไดโซเดียมซัลเฟตถูกเพิ่มเข้าไป เขย่าดีเพื่อเอาความชื้น แล้ว ดึงข้อมูลถูกบีบ (แห้ง) ใช้ rotavapour เครื่องดูดฝุ่น (Buchi R 210 สวิตเซอร์แลนด์) ที่ 35 ° C และ reconstituted ใน 1 mL ของเอทิล acetate2.3.2. ซิลิก้าเจลล้างทำการล้างสารสกัดกับแยกเฟสของแข็ง (SPE) โดยใช้ซิลิก้าเจล กวนกับเอทิล acetate ให้สารละลายแบบฟอร์ม และ poured ลงในคอลัมน์แก้วสามกรัมของซิลิก้าเจล (60 – 120 ตาข่าย อบที่ 200 ° C สำหรับ 12 h) (16 × 1.5 ซม), แล้ว Na2SO4 ถูกชั้น (~ 1 ซม.) เหนือซิลิก้าเจล และสุดท้าย ปรับอากาศ 15 mL ของเอทิล acetate สารสกัดเข้มข้นถูกโอนย้ายไปยังคอลัมน์ และ eluted กับ 15 mL ของเอทิล acetate Eluate ถูกรวบรวม และบีบ (0.5 มล.) และโดย rotavapour อ่อนโยนล้างของ N2 และโอนย้ายไปคอนแทคสีเหลืองอำพันแก้ว GC สำหรับ derivatization แล้ว2.3.3. derivatizationDerivatization เป็นกระบวนการที่มีประโยชน์มากสำหรับการตรวจสอบสารในตัวอย่างที่ซับซ้อน และใช้กันอย่างแพร่หลายในทางนิติวิทยาศาสตร์ แพทย์ และสิ่งแวดล้อมเคมี [16] Silylation เป็นการใช้เทคนิค derivatization และปกติก็ไม่ต้องใช้ขั้นตอนฟอก และสามารถฉีดอนุพันธ์การลง GC [17] ยังสามารถให้บริการแนะนำกลุ่ม silyl เพื่อเพิ่มคุณสมบัติ spectrometric โดยรวมของตราสารอนุพันธ์ รูปแบบการกระจายตัวของวินิจฉัยใดดีสำหรับใช้ในการตรวจสอบโครงสร้างการผลิต หรือประจุลักษณะสำหรับใช้ในการติดตามวิเคราะห์ในGC – MS ภายใต้ไอออนเลือกโหมดตรวจสอบ ในการศึกษานี้ เรามุ่งเน้นการตรวจสอบ และกำหนดปริมาณ parabens ที่มีขั้วสูง และเปราะบางแพ เพื่อให้ parabens เหมาะสมสำหรับการวิเคราะห์ GC พวกเขาต้องการแปลงเป็นระเหยเพิ่มมากขึ้น และมีเสถียรภาพสารแพ สำหรับวัตถุประสงค์นี้ เราใช้รีเอเจนต์ derivatizing MSTFA MSTFA derivatization สำเร็จสมบูรณ์ derivatization และสามารถตรวจหาสารที่ประกอบด้วยขั้วฟังก์ชันกลุ่ม ด้วยอัตราส่วน (S/N) สัญญาณเสียงเพียงพอ Derivatization ลดวิธี LODs ของ GC – MS และได้รับความไวเทียบได้กับที่ LC – MS และวิเคราะห์ GC – MS ดังนั้น หลังจาก derivatization ทางเลือกประสิทธิภาพ LC-MS [18]สำหรับ derivatization parabens, 100 ng มาตรฐานทำงานถูกถ่ายโอนไปประกอบด้วย μL 500 ของเอทิล acetate vials แก้วสีเหลืองอำพัน GC แล้ว derivatizing รีเอเจนต์ (MSTFA) ถูกเพิ่ม เงื่อนไขสำหรับ derivatization ถูกกำหนดผ่านการตรวจสอบผลของพารามิเตอร์การทดลองต่าง ๆ เวลาปฏิกิริยาและปริมาตรของรีเอเจนต์ในการวิเคราะห์การตอบสนองสารประกอบ Silylation ถูกทำให้เหมาะกับปริมาณที่แตกต่างกัน (ie. μL 10, 20, 30, 40 และ 50) MSTFA (N-Methyl-N-(trimethylsilyl) trifluoroacetamide) และเวลาฟักตัวแตกต่างกัน (ie 15, 30, 45, 60, 75 และ 90 นาที) ที่ 70 องศาเซลเซียส หลังจาก silylation, μL 1 ของโซลูชัน derivatized ถูกวิเคราะห์ ด้วย GC-MS2.3.4 พัฒนาการควบคุมคุณภาพหนึ่งกรัมของเนื้อเยื่อเต้านมไม่ใช่มะเร็งมี spiked ละ 50, 100, 200 และ 300 ng mL−1 parabens (methyl- เอทิล- paraben ด... propyland) และ แยก ไปมาแล้ว โดยล้าง SPE และ derivatized เป็นที่กล่าวถึงในส่วนก่อนหน้านี้ และวัดกู้และแบบดอกไม้ ความแม่นยำยังถูกคำนวณเป็นค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ (RSD) ของความเข้มข้นที่ทดลอง2.4 การการวิเคราะห์ GC – MSตรวจสอบและนับของ parabens ดำเนินใช้ระบบ GC QP-2010 Shimadzu (ญี่ปุ่น) – MS พร้อมกับ Shimadzu AOC 20i อัตโนมัติแซมเพลอร์ แบ่งแยก parabens chromatographic สำเร็จกับคอลัมน์รูพรุนของซิลิก้า fused DB-1 (30 m × 0. ประชาชน 32 mm หนาฟิล์ม μm 0.25, J และ W วิทยาศาสตร์ โฟลซัม CA, USA) มีใช้ฮีเลียม มีความบริสุทธิ์ 99.999% เป็นก๊าซผู้ขนส่งที่อัตราการไหลของหุ้น 2.25 มล min−1 ΜL หนึ่งของสารสกัด derivatized ถูกฉีดในโหมด splitless ที่ใช้แซมเพลอร์ที่อัตโนมัติ ได้การตั้งค่าการอัดพอร์ต อินเตอร์เฟซ และไอออนแหล่งอุณหภูมิที่ 250, 270 และ230 ° C ตามลำดับ โปรแกรมอุณหภูมิ GC เป็นดังนี้: 50 ° C (1 นาที), ทางลาด min−1 30 ° C ถึง 220 ° C ลาด min−1 2 ° C ถึง 230 ° C และทางลาด min−1 15 ° C ถึง 320 ° C (10 นาทีค้าง) สเปกโตรมิเตอร์จำนวนมากถูกดำเนินในโหมด ionization (EI) อิเล็กตรอน ที่ 70 eV และ ในปัจจุบันการปล่อยก๊าซของ 60 μA ข้อมูลการสแกนแบบเต็มได้รับในช่วงมวล m/z 35-500 การสแกนช่วงและซิม อัตราการสุ่มตัวอย่างได้ 0.5 และ 0.2 s ตามลำดับ จับโดยรวมใช้ได้ดำเนินการในไอออนที่เลือกตรวจสอบโหมด (SIM) และประจุโดยรวมในแต่ละบริเวณมีให้ในตาราง 1.392 G. Shanmugam et al. / Microchemical สมุด 96 (2010) 391-396
การแปล กรุณารอสักครู่..
compounds. Moreover, all types of body care cosmetics applied to the skin (not only underarm cosmetics) can be a source of local estrogenic chemical input to the breast and therefore should be considered in risk assessments [14]. Gas Chromatography–Mass Spectrometry (GC–MS) is well suited for the identification of a large number of potential steroids and metabolites due to its high chromatographic resolution capacity and reproducible ionization efficiency [15]. This study was aimed to develop a simple and suitable method for the detection and quantification of paraben preservatives in human tissue using GC–MS. Silylation of parabens with MSTFA was adopted in the analysis to improve the performance of GC–MSdetermination.
2. Experimental
2.1. Reagents and chemicals
The reference standards of MeP, EtP, PrP and BuP, and the derivatizing reagent, N-Methyl-N-(trimethylsilyl) trifluoroacetamide (MSTFA) were purchased from Sigma-Aldrich (USA). Acetone and ethyl acetate of HPLC grade were procured from Qualigens Fine Chemicals (Mumbai, India). Sodium sulfate (anhydrous) and glass wool were obtained from HiMedia Laboratory Pvt. Ltd., (Mumbai,India). Silica gel and florisil (60–120 mesh) were procured from Merck Specialties Private Limited (Mumbai, India). The laboratorypurified water was obtained from a water purification system (ELGA,UK). To avoid potential contamination with parabens, the glassware were sequentially washed with 10% soap solution (Labolene), tap water and 50% hydrochloric acid (HCl), ultrapure water and acetone. Then they were air dried and covered with aluminium foil and sterilized in hot air oven (Heco, Chennai, India) at 200 °C for 12 h.
2.2. Standard solutions
The individual standard stock solutions were prepared by accurately weighing 10 mg of methyl, ethyl, propyl and butyl
parabens separately and dissolving them in 100 mL of acetone:ethyl acetate (1:1 v/v) (100 μg mL−1). The working standard solutions for calibration and for recovery spike were prepared at required concentrations from the stock standard solutions, and stored at −20 °C.
2.3. Sample preparation
2.3.1. Parabens extraction
One gram of the breast tissue was homogenized with 3 g of anhydrous sodium sulfate and 15 mL of acetone:n-hexane (1:1 v/v), and transferred to a conical flask for extraction by mechanical shaking for 12 h. After extraction, the extract was transferred to a centrifuge tube and centrifuged (3000 rpm; 10 min) at room temperature. The supernatant was collected in a glass tube, the pellet was again extracted by shaking manually with 5 mL of acetone–hexane mixture and the supernatant was collected. The extracts were pooled and 3 g of anhydrous sodium sulfate was added to it, shaken well to remove moisture. Then the extract was condensed (dried) using a vacuum rotavapour (Buchi R 210, Switzerland) at 35 °C and reconstituted in 1 mL of ethyl acetate.
2.3.2. Silica gel cleanup
The extract cleanup was done with solid phase extraction (SPE) using silica gel. Three grams of silica gel (60–120 mesh, baked at 200 °C for 12 h) was stirred with ethyl acetate to form slurry and poured into a glass column (16×1.5 cm), then Na2SO4 was layered (~1 cm) above the silica gel and finally, conditioned with 15 mL of ethyl acetate. The concentrated extract was transferred to the column and eluted with 15 mL of ethyl acetate. The eluate was collected and condensed (0.5 mL) with a rotavapour and by gentle purging of N2 and then transferred to amber glass GC vial for derivatization.
2.3.3. Derivatization
Derivatization is a very useful process for detecting compounds in complex samples, and applied widely in forensic, medical and environmental chemistry [16]. Silylation is the most widely used derivatization technique and normally it does not require a purification step, and the derivatives can be injected directly into the GC [17]. The introduction of a silyl group(s) can also serve to enhance mass spectrometric properties of the derivatives, by producing either more favorable diagnostic fragmentation patterns for use in structure investigations, or the characteristic ions for use in trace analyses in
GC–MS under selected ion monitoring mode. In this study, we aimed to detect and quantify parabens that are highly polar and thermally fragile. In order to make the parabens suitable for GC analysis, they require transformation into more volatile and thermally stable compounds. For this purpose,we used derivatizing reagent MSTFA. The MSTFA derivatization achieved complete derivatization and permitted the detection of compounds containing polar function groups with adequate signal-to-noise (S/N) ratio. Derivatization decreases the LODs of GC–MS methods and therefore achieves sensitivity comparable to that of LC–MS, and GC–MS analysis after derivatization is an efficient alternative to LC–MS [18].
For derivatization of parabens, 100 ng of working standards was transferred to amber glass GC vials containing 500 μL of ethyl acetate. Then derivatizing reagent (MSTFA) was added. The conditions for derivatization were determined through investigating the effects of various experimental parameters including the reaction time and the volume of reagent on the analytical response of the compounds. Silylation was optimized with different volumes (ie. 10, 20, 30, 40 and 50 μL) of MSTFA (N-Methyl-N-(trimethylsilyl) trifluoroacetamide) and different incubation times (ie. 15, 30, 45, 60, 75 and 90 min) at 70 °C. After silylation, 1 μL of the derivatized solution was analyzed by GC–MS.
2.3.4. Quality control
One gram of non-cancerous breast tissue was spiked individually with 50, 100, 200 and 300 ng mL−1 parabens (methyl-, ethyl-, propyland butyl paraben) and extracted, followed by SPE cleanup and derivatized as mentioned in earlier sections, and the recovery and linearity were measured. Precision was also calculated as relative standard deviation (RSD) of the experimental concentrations.
2.4. GC–MS analysis
The detection and quantification of parabens were performed using a Shimadzu (Japan) QP-2010 GC–MS system equipped with a Shimadzu AOC-20i auto sampler. Chromatographic separation of parabens was achieved with DB-1 fused silica capillary column (30 m×0.32 mm i.d., 0.25 μm film thickness, J&W Scientific, Folsom, CA, USA). Helium with a purity of 99.999% was used as the carrier gas at a flow rate of 2.25 mL min−1. One μL of derivatized extract was injected in splitless mode using an auto sampler. The injector port, interface and ion source temperatures were set at 250, 270 and
230 °C, respectively. The GC temperature was programmed as follows: 50 °C (1 min), 30 °C min−1 ramp to 220 °C, 2 °C min−1 ramp to 230 °C, and 15 °C min−1 ramp to 320 °C (10 min hold). The mass spectrometer was operated in electron ionization (EI) mode at 70 eV and at an emission current of 60 μA. Full scan data was obtained in a mass range of m/z 35–500. Scanning interval and SIM sampling rate were 0.5 and 0.2 s, respectively. The mass selective detector was operated in selected ion monitoring (SIM) mode and mass ions for each compound are given in Table 1.392 G. Shanmugam et al. / Microchemical Journal 96 (2010) 391–396
2. Experimental
2.1. Reagents and chemicals
The reference standards of MeP, EtP, PrP and BuP, and the derivatizing reagent, N-Methyl-N-(trimethylsilyl) trifluoroacetamide (MSTFA) were purchased from Sigma-Aldrich (USA). Acetone and ethyl acetate of HPLC grade were procured from Qualigens Fine Chemicals (Mumbai, India). Sodium sulfate (anhydrous) and glass wool were obtained from HiMedia Laboratory Pvt. Ltd., (Mumbai,India). Silica gel and florisil (60–120 mesh) were procured from Merck Specialties Private Limited (Mumbai, India). The laboratorypurified water was obtained from a water purification system (ELGA,UK). To avoid potential contamination with parabens, the glassware were sequentially washed with 10% soap solution (Labolene), tap water and 50% hydrochloric acid (HCl), ultrapure water and acetone. Then they were air dried and covered with aluminium foil and sterilized in hot air oven (Heco, Chennai, India) at 200 °C for 12 h.
2.2. Standard solutions
The individual standard stock solutions were prepared by accurately weighing 10 mg of methyl, ethyl, propyl and butyl
parabens separately and dissolving them in 100 mL of acetone:ethyl acetate (1:1 v/v) (100 μg mL−1). The working standard solutions for calibration and for recovery spike were prepared at required concentrations from the stock standard solutions, and stored at −20 °C.
2.3. Sample preparation
2.3.1. Parabens extraction
One gram of the breast tissue was homogenized with 3 g of anhydrous sodium sulfate and 15 mL of acetone:n-hexane (1:1 v/v), and transferred to a conical flask for extraction by mechanical shaking for 12 h. After extraction, the extract was transferred to a centrifuge tube and centrifuged (3000 rpm; 10 min) at room temperature. The supernatant was collected in a glass tube, the pellet was again extracted by shaking manually with 5 mL of acetone–hexane mixture and the supernatant was collected. The extracts were pooled and 3 g of anhydrous sodium sulfate was added to it, shaken well to remove moisture. Then the extract was condensed (dried) using a vacuum rotavapour (Buchi R 210, Switzerland) at 35 °C and reconstituted in 1 mL of ethyl acetate.
2.3.2. Silica gel cleanup
The extract cleanup was done with solid phase extraction (SPE) using silica gel. Three grams of silica gel (60–120 mesh, baked at 200 °C for 12 h) was stirred with ethyl acetate to form slurry and poured into a glass column (16×1.5 cm), then Na2SO4 was layered (~1 cm) above the silica gel and finally, conditioned with 15 mL of ethyl acetate. The concentrated extract was transferred to the column and eluted with 15 mL of ethyl acetate. The eluate was collected and condensed (0.5 mL) with a rotavapour and by gentle purging of N2 and then transferred to amber glass GC vial for derivatization.
2.3.3. Derivatization
Derivatization is a very useful process for detecting compounds in complex samples, and applied widely in forensic, medical and environmental chemistry [16]. Silylation is the most widely used derivatization technique and normally it does not require a purification step, and the derivatives can be injected directly into the GC [17]. The introduction of a silyl group(s) can also serve to enhance mass spectrometric properties of the derivatives, by producing either more favorable diagnostic fragmentation patterns for use in structure investigations, or the characteristic ions for use in trace analyses in
GC–MS under selected ion monitoring mode. In this study, we aimed to detect and quantify parabens that are highly polar and thermally fragile. In order to make the parabens suitable for GC analysis, they require transformation into more volatile and thermally stable compounds. For this purpose,we used derivatizing reagent MSTFA. The MSTFA derivatization achieved complete derivatization and permitted the detection of compounds containing polar function groups with adequate signal-to-noise (S/N) ratio. Derivatization decreases the LODs of GC–MS methods and therefore achieves sensitivity comparable to that of LC–MS, and GC–MS analysis after derivatization is an efficient alternative to LC–MS [18].
For derivatization of parabens, 100 ng of working standards was transferred to amber glass GC vials containing 500 μL of ethyl acetate. Then derivatizing reagent (MSTFA) was added. The conditions for derivatization were determined through investigating the effects of various experimental parameters including the reaction time and the volume of reagent on the analytical response of the compounds. Silylation was optimized with different volumes (ie. 10, 20, 30, 40 and 50 μL) of MSTFA (N-Methyl-N-(trimethylsilyl) trifluoroacetamide) and different incubation times (ie. 15, 30, 45, 60, 75 and 90 min) at 70 °C. After silylation, 1 μL of the derivatized solution was analyzed by GC–MS.
2.3.4. Quality control
One gram of non-cancerous breast tissue was spiked individually with 50, 100, 200 and 300 ng mL−1 parabens (methyl-, ethyl-, propyland butyl paraben) and extracted, followed by SPE cleanup and derivatized as mentioned in earlier sections, and the recovery and linearity were measured. Precision was also calculated as relative standard deviation (RSD) of the experimental concentrations.
2.4. GC–MS analysis
The detection and quantification of parabens were performed using a Shimadzu (Japan) QP-2010 GC–MS system equipped with a Shimadzu AOC-20i auto sampler. Chromatographic separation of parabens was achieved with DB-1 fused silica capillary column (30 m×0.32 mm i.d., 0.25 μm film thickness, J&W Scientific, Folsom, CA, USA). Helium with a purity of 99.999% was used as the carrier gas at a flow rate of 2.25 mL min−1. One μL of derivatized extract was injected in splitless mode using an auto sampler. The injector port, interface and ion source temperatures were set at 250, 270 and
230 °C, respectively. The GC temperature was programmed as follows: 50 °C (1 min), 30 °C min−1 ramp to 220 °C, 2 °C min−1 ramp to 230 °C, and 15 °C min−1 ramp to 320 °C (10 min hold). The mass spectrometer was operated in electron ionization (EI) mode at 70 eV and at an emission current of 60 μA. Full scan data was obtained in a mass range of m/z 35–500. Scanning interval and SIM sampling rate were 0.5 and 0.2 s, respectively. The mass selective detector was operated in selected ion monitoring (SIM) mode and mass ions for each compound are given in Table 1.392 G. Shanmugam et al. / Microchemical Journal 96 (2010) 391–396
การแปล กรุณารอสักครู่..
สารประกอบ นอกจากนี้ ทุกประเภทของเครื่องสำอางดูแลผิวทาผิว ( ไม่เพียง แต่เครื่องสำอางใต้วงแขน ) สามารถเป็นแหล่งของการป้อนข้อมูล estrogenic ท้องถิ่นเคมีเต้านมและดังนั้นจึงควรพิจารณาในการประเมินความเสี่ยง [ 14 ]แก๊สโครมาโทกราฟี - แมสสเปกโทรเมทรี ( GC ( MS ) เหมาะดีสำหรับตัวของตัวเลขขนาดใหญ่ของเตียรอยด์ที่มีศักยภาพและสารเนื่องจากความจุความละเอียดสูงและประสิทธิภาพการแตกตัวเป็นไอออนโครม ) [ 15 ] การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาวิธีการที่ง่ายและเหมาะสำหรับการตรวจจับและปริมาณของสารกันบูด paraben ในเนื้อเยื่อมนุษย์โดยใช้ GC และคุณซิลิเวชันของ parabens ด้วย mstfa ถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์เพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพของ GC – msdetermination .
2 ทดลอง
2.1 . สารเคมีและสารเคมี
อ้างอิงมาตรฐานของ MEP , ETP , และช่วยให้ และ derivatizing รีเอเจนต์ n-methyl-n - ( ไตรเมทิล trifluoroacetamide ( mstfa ) ซื้อจาก ซิกม่า Aldrich ( USA )อะซิโตนและเอทิลอะซิเตทเกรด HPLC ได้จัดหาจาก qualigens Fine Chemicals ( มุมไบอินเดีย ) โซเดียมซัลเฟต ( anhydrous ) และใยแก้วได้จากห้องปฏิบัติการ himedia Pvt . Ltd . ( มุมไบอินเดีย ) ซิลิกาเจลและ florisil ( 60 - 120 ตาข่าย ) จัดหาจากเมอร์คพิเศษ Private Limited ( มุมไบอินเดีย ) laboratorypurified น้ำที่ได้จากระบบบำบัดน้ำ elga ( ,สหราชอาณาจักร ) เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนที่อาจเกิดขึ้นกับ parabens , เครื่องแก้วเป็นลําดับล้างด้วยสารละลายสบู่ 10% ( labolene ) , น้ำประปาและ 50% กรดเกลือ ( HCl ) , น้ำบริสุทธิ์มาก และอะซิโตน แล้วพวกเขาแห้งปกคลุมด้วยอลูมิเนียมฟอยล์และฆ่าเชื้อในตู้อบอากาศร้อน ( heco เจนไน อินเดีย ) ที่ 200 องศา C เป็นเวลา 12 ชั่วโมง
2.2 .
โซลูชั่นมาตรฐานแต่ละมาตรฐานหุ้นโซลูชั่น เตรียมถูกต้องชั่ง 10 mg ของเมทิล , เอธิล , บิวทิลพาราเบนและโพรพิล
แยกกัน และการละลายใน 100 มิลลิลิตร ) : ethyl acetate ( 1 : 1 v / v ) ( 100 กรัมต่อมิลลิลิตรμ− 1 ) การทำงานมาตรฐานโซลูชั่นสำหรับการสอบเทียบและการกู้คืนชั่วคราวเตรียมที่ต้องใช้ความเข้มข้นจากสต็อกมาตรฐานโซลูชั่น และเก็บไว้ที่− 20 ° C .
2.3ตัวอย่างการเตรียม
2.3.1 . parabens การสกัด
กรัมหนึ่งในเนื้อเยื่อเต้านมเป็นโฮโมด้วย 3 กรัม และโซเดียม ซัลเฟต anhydrous 15 ml สำหรับ : บีบ ( 1 : 1 v / v ) และโอนไปยังขวดแก้วรูปกรวยสำหรับการสกัดด้วยเครื่องกลสั่นเวลา 12 ชั่วโมง หลังจากการสกัด สารสกัดที่ถูกโอนไปยัง centrifuge หลอดไฟฟ้า ( 3000 รอบต่อนาที ; 10 นาที ) ที่อุณหภูมิห้องที่นำเก็บในหลอดแก้วเม็ดอีกครั้งสกัดโดยการเขย่าด้วยตนเองกับ 5 มิลลิลิตร และนำส่วนผสมสารอะซิโตนและรวบรวม . สารสกัดถูก pooled และ 3 กรัมของ anhydrous โซเดียมซัลเฟตถูกเพิ่มลงไปเขย่าดีที่จะลบความชื้น แล้วแยกเป็นแบบย่อ ( แห้ง ) ใช้สุญญากาศ rotavapour ( บูชิ R 210 ,สวิตเซอร์แลนด์ ) ที่ 35 ° C และสร้างใหม่ใน 1 มิลลิลิตรของ Ethyl Acetate
2.3.2 . ซิลิกาเจลล้างทำความสะอาดเสร็จ
สกัดการสกัดด้วยเฟสของแข็ง ( SPE ) โดยใช้ซิลิกาเจล 3 กรัมของซิลิกาเจล ( 60 - 120 ตาข่าย อบที่อุณหภูมิ 200 องศา C นาน 12 ชั่วโมง ) ถูกกวนด้วยเอทิลอะซิเตทจากน้ำและเทลงในคอลัมน์แก้ว ( 16 × 1.5 ซม. ) แล้ว na2so4 เป็นชั้น ( ~ 1 ซม. ) สูงกว่าซิลิกาเจล และสุดท้ายปรับอากาศที่มี 15 ml ของเอทิลอะซิเทต สกัดเข้มข้นถูกโอนไปยังคอลัมน์และตัวอย่าง 15 ml ของเอทิลอะซิเทต ในสารละลาย ( eluate ) รวบรวมและย่อ ( 0.5 มิลลิลิตร ) กับ rotavapour และอ่อนโยนการกวาดล้าง N2 แล้วโอนไปยังขวดแก้วสีชา GC สำหรับใช้กับ .
2.3.3 . กับ
กับคือกระบวนการที่มีประโยชน์มากสำหรับการตรวจหาสารประกอบในตัวอย่างที่ซับซ้อน และใช้กันอย่างแพร่หลายในนิติเวชแพทย์และเคมีสิ่งแวดล้อม [ 16 ] ซิลิเวชันเป็นส่วนใหญ่ใช้กันอย่างแพร่หลายกับเทคนิค และปกติแล้ว ไม่ต้องฟอก ขั้นตอน และ อนุพันธ์ สามารถฉีดโดยตรงลงใน GC [ 17 ]การแนะนำของกลุ่ม silyl ( s ) นอกจากนี้ยังให้บริการเพื่อเพิ่มมวลความคุณสมบัติของอนุพันธ์ โดยผลิตทั้งมงคลขึ้นเพื่อใช้ในการวินิจฉัยของรูปแบบโครงสร้างหรือลักษณะไอออนสำหรับใช้ในการวิเคราะห์ร่องรอย
GC – MS ภายใต้การเลือกไอออนโหมด ในการศึกษานี้เรามุ่งเพื่อตรวจจับและตรวจวัด parabens ที่ขอขั้วโลกซึ่งเปราะบางมาก เพื่อให้เหมาะกับการวิเคราะห์ parabens GC ที่พวกเขาต้องการในการเปลี่ยนแปลงและผันผวนมากขึ้นซึ่งมีสารประกอบ สำหรับวัตถุประสงค์นี้ เราใช้ derivatizing รีเอเจนต์ mstfa .การ mstfa กับความสมบูรณ์และอนุญาตให้ใช้กับการตรวจหาสารประกอบที่ประกอบด้วยกลุ่มฟังก์ชันขั้วสัญญาณเพียงพอ ( s / n ) อัตราส่วน กับลดล็อดส์ของ GC –วิธีการและดังนั้นจึงใช้ความไวของ MS ที่เทียบเท่ากับที่ของ LC ( MS , MS และวิเคราะห์ GC –หลังกับเป็นทางเลือกที่มีประสิทธิภาพสำหรับการ LC MS [ 18 ] .
สำหรับใช้กับของ parabens , 100 ng มาตรฐานการทํางาน ถูกโอนไปยังขวดแก้วสีเหลืองทองที่มี 500 μ L ของเอทิลอะซิเทต แล้ว derivatizing Reagent ( mstfa ) ถูกเพิ่มเข้ามา เงื่อนไขสำหรับใช้กับได้รับการพิจารณาผ่านการตรวจสอบผลของพารามิเตอร์ทดลองต่าง ๆ รวมทั้งเวลาปฏิกิริยาและปริมาณของสารเคมีที่ใช้ในการวิเคราะห์ของสารประกอบซิลิเวชันก็เหมาะกับปริมาณที่แตกต่างกัน ( เช่น 10 , 20 , 30 , 40 และ 50 μ L ) mstfa ( n-methyl-n - ( ไตรเมทิล trifluoroacetamide ) และเวลาการบ่มที่แตกต่างกัน ( เช่น 15 , 30 , 45 , 60 , 75 และ 90 นาที ) ที่อุณหภูมิ 70 องศา หลังจากซิลิเวชัน 1 μ L ของ derivatized โซลูชั่นคือ วิเคราะห์โดย GC และคุณ
2.3.4 . การควบคุมคุณภาพ
หนึ่งกรัมปลอดมะเร็งเนื้อเยื่อเต้านมถูกทีละ 50 , 100 ,200 และ 300 ng ml − 1 ( เมทิล - เอทิลพาราเบน , - propyland butyl paraben ) และสารสกัด ตามด้วยการทำความสะอาดและ derivatized ตามที่กล่าวไว้ในส่วนก่อนหน้านี้และการกู้คืนและเป็นเส้นตรง เป็นวัด ความแม่นยำก็คำนวณเป็นส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ ( RSD ) ของความเข้มข้นทดลอง .
2.4 . GC –การวิเคราะห์
MSการตรวจหาปริมาณของ parabens และการใช้ Shimadzu ( ญี่ปุ่น ) qp-2010 GC - MS ระบบติดตั้งกับ Shimadzu aoc-20i อัตโนมัติตัวอย่าง . แยกโครมของ parabens สําเร็จ ด้วย db-1 ซิลิกาคอลัมน์ C ( 30 m × 0.32 มม. ความหนาของฟิล์มμบัตร 0.25 m , J & W ทางวิทยาศาสตร์ ฟอลซัม , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ฮีเลียมกับความบริสุทธิ์ของ 99999 % ใช้เป็นแก๊สตัวพา ที่อัตราการไหล 25 มิลลิลิตรต่อนาที− 1 ผมμหนึ่ง derivatized สกัดมาฉีดให้ในโหมด splitless ใช้รถยนต์ตัวอย่าง . หัวฉีดพอร์ตอินเตอร์เฟซและอุณหภูมิแหล่งไอออนถูกตั้งไว้ที่ 250 แล้ว
230 องศาองศาเซลเซียส ตามลำดับ GC อุณหภูมิโปรแกรมดังนี้ 50 ° C ( 1 นาที ) , 30 ° C มิน− 1 ทางลาด 220 องศา C , 2 องศา C มิน− 1 ลาดถึง 230 องศาซีและ 15 ° C มิน− 1 ทางลาด 320 ° C ( 10 นาทีค้าง ) ดำเนินการในสเปกโตรมิเตอร์มวลอิเล็กตรอนอิสระ ( EI ) โหมดที่ 70 ปีที่ผ่านมาและในการปล่อยกระแสไฟฟ้า 60 μ . เต็มสแกนข้อมูลได้ในช่วงมวลของ M / Z 35 – 500 ช่วงการสแกนและซิมอัตราการสุ่มตัวอย่างคือ 0.5 และ 0.2 วินาที ตามลำดับมวลการดำเนินการในการเลือกเครื่องตรวจจับไอออน ( SIM ) โหมดและมวลไอออนแต่ละบริเวณจะได้รับในตาราง 1.392 กรัม Shanmugam et al . / microchemical วารสาร 96 ( 2010 ) 391 - 396
2 ทดลอง
2.1 . สารเคมีและสารเคมี
อ้างอิงมาตรฐานของ MEP , ETP , และช่วยให้ และ derivatizing รีเอเจนต์ n-methyl-n - ( ไตรเมทิล trifluoroacetamide ( mstfa ) ซื้อจาก ซิกม่า Aldrich ( USA )อะซิโตนและเอทิลอะซิเตทเกรด HPLC ได้จัดหาจาก qualigens Fine Chemicals ( มุมไบอินเดีย ) โซเดียมซัลเฟต ( anhydrous ) และใยแก้วได้จากห้องปฏิบัติการ himedia Pvt . Ltd . ( มุมไบอินเดีย ) ซิลิกาเจลและ florisil ( 60 - 120 ตาข่าย ) จัดหาจากเมอร์คพิเศษ Private Limited ( มุมไบอินเดีย ) laboratorypurified น้ำที่ได้จากระบบบำบัดน้ำ elga ( ,สหราชอาณาจักร ) เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนที่อาจเกิดขึ้นกับ parabens , เครื่องแก้วเป็นลําดับล้างด้วยสารละลายสบู่ 10% ( labolene ) , น้ำประปาและ 50% กรดเกลือ ( HCl ) , น้ำบริสุทธิ์มาก และอะซิโตน แล้วพวกเขาแห้งปกคลุมด้วยอลูมิเนียมฟอยล์และฆ่าเชื้อในตู้อบอากาศร้อน ( heco เจนไน อินเดีย ) ที่ 200 องศา C เป็นเวลา 12 ชั่วโมง
2.2 .
โซลูชั่นมาตรฐานแต่ละมาตรฐานหุ้นโซลูชั่น เตรียมถูกต้องชั่ง 10 mg ของเมทิล , เอธิล , บิวทิลพาราเบนและโพรพิล
แยกกัน และการละลายใน 100 มิลลิลิตร ) : ethyl acetate ( 1 : 1 v / v ) ( 100 กรัมต่อมิลลิลิตรμ− 1 ) การทำงานมาตรฐานโซลูชั่นสำหรับการสอบเทียบและการกู้คืนชั่วคราวเตรียมที่ต้องใช้ความเข้มข้นจากสต็อกมาตรฐานโซลูชั่น และเก็บไว้ที่− 20 ° C .
2.3ตัวอย่างการเตรียม
2.3.1 . parabens การสกัด
กรัมหนึ่งในเนื้อเยื่อเต้านมเป็นโฮโมด้วย 3 กรัม และโซเดียม ซัลเฟต anhydrous 15 ml สำหรับ : บีบ ( 1 : 1 v / v ) และโอนไปยังขวดแก้วรูปกรวยสำหรับการสกัดด้วยเครื่องกลสั่นเวลา 12 ชั่วโมง หลังจากการสกัด สารสกัดที่ถูกโอนไปยัง centrifuge หลอดไฟฟ้า ( 3000 รอบต่อนาที ; 10 นาที ) ที่อุณหภูมิห้องที่นำเก็บในหลอดแก้วเม็ดอีกครั้งสกัดโดยการเขย่าด้วยตนเองกับ 5 มิลลิลิตร และนำส่วนผสมสารอะซิโตนและรวบรวม . สารสกัดถูก pooled และ 3 กรัมของ anhydrous โซเดียมซัลเฟตถูกเพิ่มลงไปเขย่าดีที่จะลบความชื้น แล้วแยกเป็นแบบย่อ ( แห้ง ) ใช้สุญญากาศ rotavapour ( บูชิ R 210 ,สวิตเซอร์แลนด์ ) ที่ 35 ° C และสร้างใหม่ใน 1 มิลลิลิตรของ Ethyl Acetate
2.3.2 . ซิลิกาเจลล้างทำความสะอาดเสร็จ
สกัดการสกัดด้วยเฟสของแข็ง ( SPE ) โดยใช้ซิลิกาเจล 3 กรัมของซิลิกาเจล ( 60 - 120 ตาข่าย อบที่อุณหภูมิ 200 องศา C นาน 12 ชั่วโมง ) ถูกกวนด้วยเอทิลอะซิเตทจากน้ำและเทลงในคอลัมน์แก้ว ( 16 × 1.5 ซม. ) แล้ว na2so4 เป็นชั้น ( ~ 1 ซม. ) สูงกว่าซิลิกาเจล และสุดท้ายปรับอากาศที่มี 15 ml ของเอทิลอะซิเทต สกัดเข้มข้นถูกโอนไปยังคอลัมน์และตัวอย่าง 15 ml ของเอทิลอะซิเทต ในสารละลาย ( eluate ) รวบรวมและย่อ ( 0.5 มิลลิลิตร ) กับ rotavapour และอ่อนโยนการกวาดล้าง N2 แล้วโอนไปยังขวดแก้วสีชา GC สำหรับใช้กับ .
2.3.3 . กับ
กับคือกระบวนการที่มีประโยชน์มากสำหรับการตรวจหาสารประกอบในตัวอย่างที่ซับซ้อน และใช้กันอย่างแพร่หลายในนิติเวชแพทย์และเคมีสิ่งแวดล้อม [ 16 ] ซิลิเวชันเป็นส่วนใหญ่ใช้กันอย่างแพร่หลายกับเทคนิค และปกติแล้ว ไม่ต้องฟอก ขั้นตอน และ อนุพันธ์ สามารถฉีดโดยตรงลงใน GC [ 17 ]การแนะนำของกลุ่ม silyl ( s ) นอกจากนี้ยังให้บริการเพื่อเพิ่มมวลความคุณสมบัติของอนุพันธ์ โดยผลิตทั้งมงคลขึ้นเพื่อใช้ในการวินิจฉัยของรูปแบบโครงสร้างหรือลักษณะไอออนสำหรับใช้ในการวิเคราะห์ร่องรอย
GC – MS ภายใต้การเลือกไอออนโหมด ในการศึกษานี้เรามุ่งเพื่อตรวจจับและตรวจวัด parabens ที่ขอขั้วโลกซึ่งเปราะบางมาก เพื่อให้เหมาะกับการวิเคราะห์ parabens GC ที่พวกเขาต้องการในการเปลี่ยนแปลงและผันผวนมากขึ้นซึ่งมีสารประกอบ สำหรับวัตถุประสงค์นี้ เราใช้ derivatizing รีเอเจนต์ mstfa .การ mstfa กับความสมบูรณ์และอนุญาตให้ใช้กับการตรวจหาสารประกอบที่ประกอบด้วยกลุ่มฟังก์ชันขั้วสัญญาณเพียงพอ ( s / n ) อัตราส่วน กับลดล็อดส์ของ GC –วิธีการและดังนั้นจึงใช้ความไวของ MS ที่เทียบเท่ากับที่ของ LC ( MS , MS และวิเคราะห์ GC –หลังกับเป็นทางเลือกที่มีประสิทธิภาพสำหรับการ LC MS [ 18 ] .
สำหรับใช้กับของ parabens , 100 ng มาตรฐานการทํางาน ถูกโอนไปยังขวดแก้วสีเหลืองทองที่มี 500 μ L ของเอทิลอะซิเทต แล้ว derivatizing Reagent ( mstfa ) ถูกเพิ่มเข้ามา เงื่อนไขสำหรับใช้กับได้รับการพิจารณาผ่านการตรวจสอบผลของพารามิเตอร์ทดลองต่าง ๆ รวมทั้งเวลาปฏิกิริยาและปริมาณของสารเคมีที่ใช้ในการวิเคราะห์ของสารประกอบซิลิเวชันก็เหมาะกับปริมาณที่แตกต่างกัน ( เช่น 10 , 20 , 30 , 40 และ 50 μ L ) mstfa ( n-methyl-n - ( ไตรเมทิล trifluoroacetamide ) และเวลาการบ่มที่แตกต่างกัน ( เช่น 15 , 30 , 45 , 60 , 75 และ 90 นาที ) ที่อุณหภูมิ 70 องศา หลังจากซิลิเวชัน 1 μ L ของ derivatized โซลูชั่นคือ วิเคราะห์โดย GC และคุณ
2.3.4 . การควบคุมคุณภาพ
หนึ่งกรัมปลอดมะเร็งเนื้อเยื่อเต้านมถูกทีละ 50 , 100 ,200 และ 300 ng ml − 1 ( เมทิล - เอทิลพาราเบน , - propyland butyl paraben ) และสารสกัด ตามด้วยการทำความสะอาดและ derivatized ตามที่กล่าวไว้ในส่วนก่อนหน้านี้และการกู้คืนและเป็นเส้นตรง เป็นวัด ความแม่นยำก็คำนวณเป็นส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ ( RSD ) ของความเข้มข้นทดลอง .
2.4 . GC –การวิเคราะห์
MSการตรวจหาปริมาณของ parabens และการใช้ Shimadzu ( ญี่ปุ่น ) qp-2010 GC - MS ระบบติดตั้งกับ Shimadzu aoc-20i อัตโนมัติตัวอย่าง . แยกโครมของ parabens สําเร็จ ด้วย db-1 ซิลิกาคอลัมน์ C ( 30 m × 0.32 มม. ความหนาของฟิล์มμบัตร 0.25 m , J & W ทางวิทยาศาสตร์ ฟอลซัม , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ฮีเลียมกับความบริสุทธิ์ของ 99999 % ใช้เป็นแก๊สตัวพา ที่อัตราการไหล 25 มิลลิลิตรต่อนาที− 1 ผมμหนึ่ง derivatized สกัดมาฉีดให้ในโหมด splitless ใช้รถยนต์ตัวอย่าง . หัวฉีดพอร์ตอินเตอร์เฟซและอุณหภูมิแหล่งไอออนถูกตั้งไว้ที่ 250 แล้ว
230 องศาองศาเซลเซียส ตามลำดับ GC อุณหภูมิโปรแกรมดังนี้ 50 ° C ( 1 นาที ) , 30 ° C มิน− 1 ทางลาด 220 องศา C , 2 องศา C มิน− 1 ลาดถึง 230 องศาซีและ 15 ° C มิน− 1 ทางลาด 320 ° C ( 10 นาทีค้าง ) ดำเนินการในสเปกโตรมิเตอร์มวลอิเล็กตรอนอิสระ ( EI ) โหมดที่ 70 ปีที่ผ่านมาและในการปล่อยกระแสไฟฟ้า 60 μ . เต็มสแกนข้อมูลได้ในช่วงมวลของ M / Z 35 – 500 ช่วงการสแกนและซิมอัตราการสุ่มตัวอย่างคือ 0.5 และ 0.2 วินาที ตามลำดับมวลการดำเนินการในการเลือกเครื่องตรวจจับไอออน ( SIM ) โหมดและมวลไอออนแต่ละบริเวณจะได้รับในตาราง 1.392 กรัม Shanmugam et al . / microchemical วารสาร 96 ( 2010 ) 391 - 396
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- ฉันทราบว่าคนรัซเซียจะไม่ชอบยิ้มบ่อยๆและม
- Consignee reported that 1240 should be b
- ชักโครก น้ำไหลไม่หยุด
- referral
- คุณช่วยส่งดิจิตอลสัก10ตัวให้เราได้มั้ยเพ
- สถานีสุดท้าย
- เจ็บคอ
- กว้างมาก
- เรียน ผู้จัดงานดร.บงกช อนุโรจน์ ขอตอบรับ
- ทางเราต้องการเปลี่ยน
- ขอเบิกค่าออกแบบ
- ฉันมาสาย
- ยอดขายในประเทศเพิ่มขึ้น
- Our respondentswere wary of getting test
- อยู่ที่
- ..maybe befor...
- Headline news: ASEAN Championship - Our
- ou will never leave me
- เซี่ยงไฮ้
- ฉันรู้อยู่แล้วหล่ะ ว่าเธอเปลี่ยนไป
- ช่างแกะสลักใม้
- rice field
- • 2.5 years of experience in Sales Execu
- เพราะมีการแก้ไข ภาพวาดที่แนบไปคือภาพวาดท
