DNA extraction, PCR amplification a

DNA extraction, PCR amplification and DNA sequencing.
Samples of pure cultures from 3-day-old CYA agar plates were added
to 1.5 ml tubes containing TE buffer [10 mM Tris/HCl (pH 8.0),
1 mM EDTA (pH 4.5)], gently homogenized and then lysed by either
sonication or enzymic digestion. For physical disruption, tubes were
placed in a sonicator (ultrasonic bath LBS2; Falc Instruments) at 60
KHz for 3–5 min then heated at 100 uC for 5–10 min. Samples were
centrifuged in a micro-centrifuge for 2 min at 14 000 r.p.m. at room
temperature, and the supernatant extracts containing unpurified
fungal DNA were then stored at 220 uC for subsequent PCR analysis.
Enzymic digestion was instead initially performed with lyticase
(20 mg ml21; Sigma) at 40 uC for 1 h, and then by incubating with
proteinase K (20 mg ml21; Sigma) at 50–60 uC for several hours
followed by phenol/chloroform extraction and alcohol precipitation
to yield PCR-amplifiable genomic DNA; the resulting DNA pellets
were dissolved in 50–100 ml TE buffer and stored at 220 uC.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สกัดดีเอ็นเอ ขยาย PCR และลำดับดีเอ็นเอเพิ่มตัวอย่างของวัฒนธรรมบริสุทธิ์จากแผ่น agar CYA อายุ 3 วันให้หลอด 1.5 มิลลิลิตรประกอบด้วย TE บัฟเฟอร์ [10 มม. HCl ตรี (ค่า pH 8.0),1 mM EDTA (pH 4.5)], homogenized เป็นกลุ่มเบา ๆ แล้ว lysed ด้วยการsonication หรือย่อยอาหาร enzymic สำหรับทางกายภาพทรัพย หลอดได้วางใน sonicator (อาบน้ำอัลตราโซนิก LBS2 เครื่องมือ Falc) ที่ 60KHz สำหรับ 3-5 นาทีแล้ว ความร้อนที่ 100 uC สำหรับตัวอย่าง 5-10 นาทีได้centrifuged ในแบบไมโครเครื่องหมุนเหวี่ยงใน 2 นาทีที่ 14 000 รอบต่อนาทีที่ห้องอุณหภูมิ และสารสกัด supernatant ที่ประกอบด้วย unpurifiedดีเอ็นเอของเชื้อราแล้วได้ถูกเก็บไว้ที่ 220 uC สำหรับวิเคราะห์ PCR ตามมาย่อยอาหาร enzymic แทนเริ่มทำกับ lyticase(20 มิลลิกรัม ml21 ซิกมา) ที่ 40 uC สำหรับ 1 h และ incubating ด้วยproteinase K (20 มิลลิกรัม ml21 ซิกมา) ที่ 50 – 60 uC สำหรับหลายชั่วโมงตาม ด้วยฝนวาง/คลอโรฟอร์มแอลกอฮอล์และสกัดให้ผลผลิต PCR amplifiable genomic DNA ขี้ดีเอ็นเอได้ละลายในบัฟเฟอร์ TE 50 – 100 ml และเก็บไว้ที่ 220 uC

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สกัดดีเอ็นเอ, PCR การขยายและลำดับดีเอ็นเอ
ตัวอย่างของวัฒนธรรมบริสุทธิ์จาก 3 วันเก่า CYA แผ่นวุ้นถูกเพิ่ม
ถึง 1.5 มลหลอดที่มีบัฟเฟอร์ TE [10 MM Tris / HCl (pH 8.0)
1 มิลลิ EDTA (pH 4.5)] , หดหายอย่างอ่อนโยนและ lysed โดยทั้งแล้ว
sonication หรือการย่อยอาหารเอนไซม์ สำหรับการหยุดชะงักทางกายภาพหลอดถูก
วางไว้ใน Sonicator (ล้ำอาบน้ำ LBS2; Falc เครื่องมือ) ที่ 60
KHz ประมาณ 3-5 นาทีจากนั้นความร้อนที่ 100 UC ประมาณ 5-10 นาที ตัวอย่าง
ปั่นในไมโคร centrifuge 2 นาทีที่ 14 000 รอบต่อนาทีที่ห้อง
อุณหภูมิและสารสกัดจากสารละลายที่มี unpurified
ดีเอ็นเอของเชื้อรานั้นถูกเก็บไว้ที่ 220 UC สำหรับการวิเคราะห์ PCR มา
ทางเอนไซม์ย่อยอาหารแทนที่จะดำเนินการครั้งแรกกับ lyticase
(20 มก. ml21 ; Sigma) ที่ 40 UC เป็นเวลา 1 ชั่วโมงแล้วโดยบ่มกับ
โปร K (20 ml21 มิลลิกรัม Sigma) ที่ 50-60 UC เป็นเวลาหลายชั่วโมง
ตามด้วยฟีนอล / สกัดคลอโรฟอร์มและการตกตะกอนเครื่องดื่มแอลกอฮอล์
ให้ผลผลิต PCR-amplifiable ดีเอ็นเอ; ส่งผลให้เม็ดดีเอ็นเอ
ถูกกลืนหายไปใน 50-100 มลบัฟเฟอร์ TE และเก็บไว้ที่ 220 UC

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัด DNA Amplification ) และการหาลำดับเบสดีเอ็นเอ .
ตัวอย่างเชื้อบริสุทธิ์จาก 3-day-old cya วุ้นแผ่นเพิ่ม 1.5 ml หลอดบรรจุ
te บัฟเฟอร์ [ 10 มม. นอกจากนี้ / HCl ( pH 8.0 )
1 mM EDTA ( pH 4.5 ) ] ค่อยๆบดแล้ว lysed ด้วย
sonication หรือการย่อยทางเอนไซม์ . สำหรับการหยุดชะงักทางท่อ คือ
วางไว้ในเครื่องเขย่าแบบเสียง ( ultrasonic bath lbs2 ; เครื่องมือ falc 60
)เฮิร์ทซ์ 3 – 5 นาทีแล้วให้ความร้อนที่ 100 UC 5 – 10 นาทีจำนวน
ไฟฟ้าในเครื่องหมุนเหวี่ยงขนาดเล็ก 2 นาทีที่ 14 , 000 r.p.m. อุณหภูมิห้อง
และนำสารสกัดที่มี unpurified
ราดีเอ็นเอแล้วเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 220 UC เพื่อการวิเคราะห์ PCR ที่ตามมา คือ การย่อยทางเอนไซม์แทน
การเริ่มต้น lyticase
( 20 มิลลิกรัม ml21 ; Sigma ) ที่ 40 เป็นต้น เป็นเวลา 1 ชั่วโมง และจากนั้น โดยการแช่ด้วย
โปรตีนเค ( 20 มิลลิกรัม ml21 ; Sigma ) ที่ 50 – 60 UC หลายชั่วโมง
ตามมาสกัดด้วยแอลกอฮอล์ฟีนอลและการตกตะกอน /
ผลผลิต PCR amplifiable ดีเอ็นเอ ; ผลดีเอ็นเอเม็ด
ถูกละลายใน 50 – 100 มล. TE บัฟเฟอร์และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 220 ฯลฯ .