2.5. Preparation of human tissue sa

2.5. Preparation of human tissue samples
Human breast tissue samples (cancerous: n=9 and non-cancerous:
n=1) were obtained from the archives of Government Hospitals at
Tiruchirappalli and Thanjavur, Tamil Nadu state, India. Tissuewas sliced
finely using a sterile blade and ground well. One gramof the tissue was
homogenized and treated as mentioned in earlier sections for
extraction, clean up and derivatization in the optimized conditions of
20 μL MSTFA, 30min reaction time at 70 °C.
3. Result and discussion
The extraction with n-hexane:acetone (1:1 v/v) solvent mixture
and clean up using silica gel (60–120 mesh) were good (data not
shown). Ethyl acetate was used for both column conditioning and
elution.
3.1. Effect of MSTFA volume on derivatization
In order to know the influence of parameters on derivatization
process, the effect of the changes in the volume of MSTFA and the
derivatization reaction time were studied. Fig. 1 shows that
derivatization of spiked parabens with 10–50 μL of MSTFA, in which
20 μL (at 30 min for 70 °C) gave better derivatization and good
recovery (n=3), ranged between 92±0.7 and 101±6.3 ng mL−1 for
all compounds. Low recovery (79±16–90±13 ng mL−1) was
attained with 10 μL, but higher amount of MSTFA (i.e. 30, 40 and
50 μL) showed more than 100% recovery with wide deviations (110±
3.9–148±13.4 ng mL−1). Therefore, 20 μL could be considered
sufficient for complete derivatization of parabens (~100%). This is in
contrast to Basheer et al. [19] who reported that the amount of MSTFA
did not have any impact on derivatization of estrogens in water
samples. Canosa et al. [8] used 20 μL of MTBSTFA for 15 min at room
temperature for on-fiber derivatization of parabens from surface and
sewage water samples.
3.2. Effect of reaction time on derivatization
The reaction time is also crucial in derivatization, and so we
investigated by spiking 100 ng mL−1 concentration of parabens and
checked the extent of derivatization at 15, 30, 45, 60, 75, and 90 min
with 20 μL MSTFA at 70 °C. The findings (Fig. 2) revealed that the
lowest reaction time (15 min) gave less recovery (from 96±2.6 to
99.6±3.5 ng mL−1) than the higher reaction times (i.e. 30 to
90 min). However, at 30 and 45 min reaction times the recoveries
were almost same at around 100% (102±8–106±6.7 ng mL−1 and
101±9.4–106±6 ng mL−1, respectively). However, higher reaction
times (60, 75 and 90 min) gave greater recoveries with greater
deviations, (ranged between 107±11 and 136±48 ng mL−1). Since
there was not much variation between 30 and 45 min, the lower
reaction time of 30 min was chosen as an optimal reaction time for
sufficient recovery. The reaction temperature was maintained at
70 °C, since MSTFA's boiling point is 70 °C and at this temperature it
reacts with compounds to replace labile hydrogen with a –Si(CH3)3
group. Bowden et al. [15] stated that steriod derivatization beyond
60 min and above 70 °C do not provide any additional benefit in the
RRFs (relative response factors) obtained. In addition, they reported
that temperatures below 40 °C are not adequate for efficient
derivatization with the reaction times tested in their study. Basheer
et al. [19] reported complete derivatization of estrogens in water
samples at a derivatization time of 30 min at 60 °C with 50 μL of
MSTFA.
Fig. 3 shows the effect of derivatization on resolution (in terms of
peak intensity and peak tailing) of paraben standards. From
comparing the representative chromatograms of paraben standards
in scan mode without (Fig. 3a) and with (Fig. 3b) MSTFA derivatization,
it is obvious that prior to derivatization (Fig. 3a) the peak
intensity was very low and moreover not sharp but tailing. However,
after derivatization (Fig. 3b) the peaks were well resolved (i.e. sharp
peaks with many fold greater intensity and without tailing).
3.3. Quality control (recovery and detection limit)
Recoveries of parabens were investigated in triplicate using noncancerous
tissue sample spiked with known standards. The mean
recoveries of MeP, EtP, PrP and BuP were 99.8±5.1, 96±4.4, 107±17
and 113±13%, respectively. Quantitative linearity was investigated
by elucidating the calibration curves for the four parabens over the
concentration range 50–300 ng mL−1. The line of best fit for the
relationship between the peak intensity (area) and concentration of
each analyte in the standard solution was determined by linear
regression. The relationship is acceptably linear for all the four
analytes over the full range of concentrations. The calibration curves
are shown in Fig. 4 and correlation coefficients are presented in
Table 1, together with the method precision, quantification, and
detection limits. The limits of detection and limits of quantification
Fig. 1. Effect of MSTFA volume in the derivatization efficiency of parabens. Fig. 2. Effect of reaction time in MSTFA derivatization efficiency of parabens.
Table 1
Summary of the GC–MS method showing correlation coefficient (R2), precision, LODs,
LOQs and recovery of tissue spiked parabens.
Analyte Mass ions R2a Precision
(% RSD; n=3)
LOD
ng g−1
LOQ
ng g−1
Recovery (%)
(n=3)
MP 209, 224, 135 0.989 5.1 2.02 6.75 99.8±5.1
EP 223, 193, 238 0.998 4.6 1.05 3.49 96±4.4
PP 193, 210, 195 0.998 15.6 1.71 5.68 107±17
BP 210, 195, 193 0.996 13 3.75 12.5 113±13
a Linear range 50–300 ng mL−1.
G. Shanmugam et al. / Microchemical Journal 96 (2010) 391–396 393

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 การเตรียมตัวอย่างเนื้อเยื่อมนุษย์ตัวอย่างเนื้อเยื่อเต้านมมนุษย์ (มะเร็ง: n = 9 และไม่ใช่มะเร็ง:n = 1) ได้รับจากคลังข้อมูลของโรงพยาบาลรัฐบาลที่Tiruchirappalli และธานจาวูร์ รัฐทมิฬนาดูล อินเดีย Tissuewas หั่นประณีตโดยใช้ใบมีดที่ผ่านการฆ่าเชื้อและดินดี Gramof หนึ่งมีเนื้อเยื่อhomogenized เป็นกลุ่ม และบำบัดเป็นกล่าวในก่อนหน้าส่วนสำหรับสกัด สะอาดขึ้นและ derivatization ในการเพิ่มประสิทธิภาพของ20 μL MSTFA เวลาปฏิกิริยา 30 นาทีที่ 70 องศาเซลเซียส3. ผล และการสนทนาสกัด ด้วยเอ็น-เฮกเซน: อะซิโตน (1:1 v/v) เป็นตัวทำละลายผสมล้างโดยใช้ซิลิก้าเจล (60 – 120 ตาข่าย) ดี (ข้อมูลไม่แสดง) ใช้เอทิล acetate สำหรับปรับทั้งคอลัมน์ และelution3.1. ผลของ MSTFA ปริมาตร derivatizationเพื่อทราบอิทธิพลของพารามิเตอร์บน derivatizationกระบวนการ ผลของการเปลี่ยนแปลงในปริมาตรของ MSTFA และมีศึกษาเวลาปฏิกิริยา derivatization Fig. 1 แสดงที่derivatization parabens ถูกแทง ด้วย μL 10 – 50 ของ MSTFA ที่20 μL (ที่ 30 นาทีสำหรับ 70 ° C) ให้ derivatization และดีดีกู้คืน (n = 3), แสก ๆ ระหว่าง 92±0.7 และ 101±6.3 mL−1 ng สำหรับสารทั้งหมด ถ.ต่ำ (79±16 – 90±13 ng mL−1)บรรลุ ด้วย 10 μL จำนวน MSTFA สูง (เช่น 30, 40 และ50 μL) พบว่ามากกว่า 100% กู้คืน ด้วยความแตกต่างหลากหลาย (110±3.9 – 148±13.4 ng mL−1) ดังนั้น 20 μL อาจจะพิจารณาเพียงพอสำหรับ derivatization สมบูรณ์ของ parabens (~ 100%) นี้เป็นความคมชัดจะบะชีรร้อยเอ็ด al. [19] ที่รายงานว่า จำนวน MSTFAไม่มีผลกระทบใด ๆ บน derivatization ของ estrogens ในน้ำตัวอย่างการ Canosa et al. [8] ใช้ μL 20 ของ MTBSTFA สำหรับ 15 นาทีห้องอุณหภูมิสำหรับ derivatization บนเส้นใยของ parabens จากพื้นผิว และตัวอย่างน้ำเสียน้ำ3.2. ผลของเวลาปฏิกิริยา derivatizationเวลาปฏิกิริยาก็สำคัญใน derivatization และเราสอบสวน โดย spiking 100 ng mL−1 เข้มข้น parabens และตรวจสอบขอบเขตของ derivatization ที่ 15, 30, 45, 60, 75 และ 90 นาทีมี 20 μL MSTFA ที่ 70 องศาเซลเซียส เปิดเผยผลการศึกษา (Fig. 2) ที่จะต่ำปฏิกิริยาเวลา (15 นาที) ให้กู้น้อยลง (จาก 96±2.6 ไป99.6±3.5 ng mL−1) กว่าเวลาปฏิกิริยาสูง (เช่น 30 เพื่อ90 นาที) อย่างไรก็ตาม เวลา 30 และ 45 นาทีปฏิกิริยา recoveriesมีเหมือนกันเกือบประมาณ 100% (102±8 – 106±6.7 ng mL−1 และ101±9.4 – 106±6 ng mL−1 ตามลำดับ) อย่างไรก็ตาม ปฏิกิริยาสูงขึ้นเวลา (60, 75 และ 90 นาที) ให้ recoveries ยิ่งมีมากขึ้นความเบี่ยงเบน, (อยู่ในช่วงระหว่าง 107±11 และ 136±48 mL−1 ng) ตั้งแต่ยังไม่มีการเปลี่ยนแปลงมากระหว่าง 30 และ 45 นาที ลดลงเลือกเวลาปฏิกิริยา 30 นาทีเป็นเวลาปฏิกิริยาเหมาะสมสำหรับพอกู้คืน มีรักษาอุณหภูมิปฏิกิริยาที่70 ° C, MSTFA ของเดือดจุดเป็น 70 ° C และอุณหภูมินี้มันทำปฏิกิริยากับสารประกอบไฮโดรเจน labile แทน – ศรี (CH3) 3กลุ่ม Bowden et al. [15] derivatization steriod ที่นอกเหนือจากที่ระบุไว้60 นาที และเหนือ 70 ° C ไม่มีสวัสดิการใด ๆ เพิ่มเติมในการRRFs (ปัจจัยตอบสนองญาติ) ได้รับการ นอกจากนี้ พวกเขารายงานอุณหภูมิต่ำกว่า 40 ° C มีไม่เพียงพอสำหรับการมีประสิทธิภาพderivatization เวลาปฏิกิริยาทดสอบในการศึกษา บะชีรal. ร้อยเอ็ด [19] รายงาน derivatization สมบูรณ์ของ estrogens ในน้ำตัวอย่างที่ใช้ derivatization เวลา 30 นาทีที่ 60 ° C กับ μL 50 ของMSTFAFig. 3 แสดงผลของ derivatization (ในแง่ของความเข้มสูงสุดและสูงสุด tailing) paraben มาตรฐาน จากchromatograms พนักงาน paraben มาตรฐานเปรียบเทียบในโหมดการสแกนโดย (Fig. 3a) และ derivatization (Fig. 3b) MSTFAเป็นที่ชัดเจนก่อน derivatization (Fig. 3a) ที่จุดสูงสุดความเข้มไม่ต่ำมาก และนอกจากนี้ tailing แต่คมชัด อย่างไรก็ตามหลังจาก derivatization (Fig. 3b) แห่งที่ดีแก้ไขได้ (เช่นชาร์ปยอดเขาที่ มีความเข้มมากขึ้นพับมาก และไม่ มี tailing)3.3 การควบคุมคุณภาพ (วงเงินกู้คืนและตรวจพบ)Recoveries parabens ถูกสอบสวนใน triplicate โดยใช้ noncancerousตัวอย่างเนื้อเยื่อ spiked รู้จักมาตรฐาน ค่าเฉลี่ยrecoveries MeP, EtP, PrP และ BuP ได้ 99.8±5.1, 96±4.4, 107±17113±13% ตามลำดับ แบบดอกไม้เชิงปริมาณถูกสอบสวนโดย elucidating เทียบเส้นโค้งสำหรับ parabens สี่ผ่านการความเข้มข้นช่วง 50 – 300 ng mL−1 ส่วนบรรทัดเหมาะสมสำหรับการความสัมพันธ์ระหว่างความเข้มสูง (พื้นที่) และความเข้มข้นของanalyte แต่ละในการแก้ปัญหามาตรฐานถูกกำหนด โดยเส้นถดถอย ความสัมพันธ์เป็นเชิง acceptably สำหรับ 4 ทั้งหมดanalytes ที่ช่วงความเข้มข้นเต็ม เทียบเส้นโค้งใน Fig. 4 และจะแสดงค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ตารางที่ 1 กับความแม่นยำวิธี นับ และตรวจสอบขีดจำกัด ขีดจำกัดของการตรวจสอบและข้อจำกัดของการนับFig. 1 ผลของ MSTFA ปริมาตรในประสิทธิภาพ derivatization parabens Fig. 2 ผลของเวลาปฏิกิริยา MSTFA derivatization ประสิทธิภาพของ parabensตารางที่ 1สรุปวิธี GC – MS แสดงสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (R2), ความแม่นยำ LODsLOQs และการฟื้นตัวของเนื้อเยื่อ spiked parabensAnalyte มวลประจุความแม่นยำ R2a(% RSD; n = 3)ลอดng g−1LOQng g−1กู้ (%)(n = 3)MP 209, 224, 135 0.989 5.1 2.02 6.75 99.8±5.1EP 223, 193, 238 0.998 4.6 1.05 3.49 96±4.4PP 193, 210, 195 0.998 15.6 1.71 5.68 107±17BP 210, 195, 193 0.996 13 3.75 12.5 113±13เชิงเส้นเป็นช่วง 50 – 300 ng mL−1Al. และ Shanmugam กรัม / Microchemical สมุด 96 (2010) 391-396 393

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 การเตรียมเนื้อเยื่อมนุษย์ตัวอย่าง
เต้านมเนื้อเยื่อมนุษย์ตัวอย่าง ( n = 9 และไม่ใช่มะเร็ง : มะเร็ง :
n = 1 ) ที่ได้รับจากคลังของโรงพยาบาลรัฐบาลที่
Tiruchirappalli Thanjavur ทมิฬนาฑูและ , รัฐ , อินเดีย tissuewas หั่นละเอียดโดยใช้ใบมีด
เป็นหมัน และดินดี หนึ่ง gramof เนื้อเยื่อที่เป็นโฮโม และถือว่าเป็นที่กล่าวถึงใน

ก่อนหน้านี้ส่วนแยกทำความสะอาดและปรับสภาพกับใน
20 μผม mstfa 30 นาที , เวลาปฏิกิริยาที่อุณหภูมิ 70 องศา
3 ผลและการอภิปราย
บีบสกัดด้วยอะซีโตน ( 1 : 1 v / v ) และตัวทำละลายผสมที่
ทำความสะอาดโดยใช้ซิลิกาเจล ( 60 - 120 ตาข่าย ) ดี ( ข้อมูลไม่
แสดง ) เอทิลอะซิเตท ใช้คอลัมน์ชนิดปรับอากาศและ
.
1 . ผลของปริมาณ mstfa บนกับ
เพื่อที่จะได้รู้ อิทธิพลของพารามิเตอร์ในกระบวนการกับ
, ผลกระทบของการเปลี่ยนแปลงปริมาณของ mstfa และ
กับปฏิกิริยาที่แตกต่างกัน รูปที่ 1 แสดงให้เห็นว่า
กับของแหลม parabens 10 – 50 μ l mstfa ซึ่งใน
20 μ L ( ที่ 30 นาที 70 ° C ) ให้กับการกู้คืนที่ดีกว่า และดี
( n = 3 ) อยู่ระหว่าง 92 ± 0.7 และ 101 ± 6.3 ของมล − 1 สำหรับ
ทั้งหมดสารประกอบ การกู้คืนต่ำ ( 79 ± 16 – 90 ± 13 ของมล − 1 )
บรรลุ 10 μ L แต่ปริมาณ mstfa ( เช่น 30 , 40 และ 50 μ
L ) มีมากกว่า 100% กู้คืนกับส่วนกว้าง ( 110 ±
3.9 ( 148 ± 13.4 ของมล − 1 ) ดังนั้น , 20 μผมอาจจะถือว่าเพียงพอกับสมบูรณ์ของ parabens
( ~ 100 % ) นี่คือในความคมชัด
basheer et al . [ 19 ] ที่รายงานว่าปริมาณ mstfa
ไม่มีผลกระทบกับของเอสโตรเจนในน้ำ

canosa et al . [ 8 ] μใช้ 20 ลิตร mtbstfa 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง
สำหรับเส้นใยกับของ parabens และตัวอย่างน้ำสิ่งปฏิกูลจากพื้นผิว
.
2 . ผลของเวลาปฏิกิริยากับ
เวลาปฏิกิริยา เป็นสิ่งสำคัญในกับและดังนั้นเรา
ตรวจสอบโดยแอลกอฮอล์ 100 มิลลิลิตร− 1 ของความเข้มข้นของ parabens และ
ตรวจสอบขอบเขตของกับที่เวลา 15 , 30 , 45 , 60 , 75 และ 90 นาที
กับ mstfa L 20 μที่ 70 องศา ผล ( รูปที่ 2 ) พบว่า
เวลาต่ำสุด ( 15 นาที ) ให้น้อยลง ( จากการกู้คืน 96 ± 2.6

ติ± 3.5 ของมล − 1 ) กว่าครั้งปฏิกิริยาที่สูงขึ้น ( เช่น 30
90 นาที ) อย่างไรก็ตาม ที่ 30 และ 45 นาที ปฏิกิริยากลับคืน
ครั้งเป็นเกือบเดียวกันในรอบ 100 % ( 102 ± 8 – 106 ± 6.7 ของมล − 1
101 ± 9.4 – 106 ± 6 ของ− 1 มิลลิลิตร ตามลำดับ ) อย่างไรก็ตาม ที่สูงปฏิกิริยา
ครั้ง ( 60 , 75 และ 90 นาที ) ให้กับตลาดมากขึ้นเบี่ยงเบนมากขึ้น
( อยู่ระหว่าง 107 ± 11 136 ± 48 ของมล − 1 ) มีการเปลี่ยนแปลงมากตั้งแต่
ระหว่าง 30 และ 45 นาที ล่าง
ปฏิกิริยาของ 30 นาที ได้รับเลือกเป็นเวลาที่เหมาะสมสำหรับ
เพียงพอในการกู้คืน อุณหภูมิไว้ที่ 70 องศา C
ตั้งแต่ mstfa เป็น 70 ° C และจุดเดือดที่อุณหภูมินี้มัน
ปฏิกิริยากับสารประกอบไฮโดรเจนแทนที่ด้วย ) ศรี ( CH3 ) 3
) โบว์ et al . [ 15 ] ระบุว่า steriod กับเกิน
60 นาทีขึ้นไป 70 ° C ไม่ได้ให้ประโยชน์ใด ๆ เพิ่มเติมใน
rrfs ( ปัจจัยตอบสนองญาติ ) ได้ นอกจากนี้พวกเขารายงานว่าอุณหภูมิต่ำกว่า 40 องศา C
ไม่เพียงพอสำหรับใช้กับที่มีประสิทธิภาพ
กับปฏิกิริยาเวลาทดสอบในการศึกษาของพวกเขา basheer
et al . [ 19 ] รายงานกับสมบูรณ์ของเอสโตรเจนในน้ำ
ที่กับเวลา 30 นาทีที่ 60 ° C 50 μ l
mstfa .
รูปที่ 3 แสดงให้เห็นถึงผลกระทบของกับในความละเอียด ( ในแง่ของ
ความเข้มสูงสุดตามมาตรฐานสูงสุด ) ของ paraben . จากการเปรียบเทียบมาตรฐานของตัวแทน

กลิ่น Paraben ในโหมดการสแกนโดย ( รูปที่ 3A ) และด้วย ( รูปที่ 3B ) กับ mstfa
, มันชัดเจนว่า ก่อนการใช้กับ ( รูปที่ 3A ) ยอด
ความเข้มต่ำมากนอกจากนี้ยังไม่คม แต่ติดตาม . อย่างไรก็ตาม หลังจากซัล
( รูปที่ 3B ) ยอดได้รับการแก้ไข ( เช่นคม
ยอดกับหลายพับมากกว่าความเข้มและไม่ตาม )
3 . การควบคุมคุณภาพ ( การกู้คืนและจำกัดการค้นหา )
เมื่อ parabens คือทั้งสามใบใช้ noncancerous
ตัวอย่างเนื้อเยื่อจากมาตรฐานที่รู้จักกัน ค่าเฉลี่ย
เมื่อ MEP , ETP , ช่วยให้± 99.8% และมี 5.1 , 96 ± 4.4 , 107 ± 17
และ 113 ± 13 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ ได้ทำการศึกษาถึงปริมาณ
จากการศึกษาเส้นโค้งสอบเทียบสำหรับสี่ parabens กว่า
สมาธิช่วง 50 – 300 ng ml − 1 เส้นพอดีกับที่ดีที่สุดสำหรับ
ความสัมพันธ์ระหว่างความเข้มสูงสุด ( พื้นที่ ) และความเข้มข้นของ
แต่ละครูในการแก้ปัญหามาตรฐานถูกกำหนดโดยวิธีการถดถอยเชิงเส้น

ความสัมพันธ์เชิงเส้นสำหรับรับได้ทั้ง 4
สารผ่านช่วงเต็มของความเข้มข้นเส้นโค้งสอบเทียบ
แสดงในรูปที่ 4 และสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ที่นำเสนอ
ตารางที่ 1 ร่วมกับวิธีแม่นยำ ปริมาณและ
จำกัดการค้นหา . ขอบเขตของการตรวจสอบและจำกัดปริมาณ
รูปที่ 1 ผลของปริมาณ mstfa ในกับประสิทธิภาพของ parabens . รูปที่ 2 ผลของเวลาปฏิกิริยาใน mstfa กับประสิทธิภาพของ parabens .

โต๊ะ 1บทสรุปของ GC ( MS ) แสดงสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ ( R ) , ล็อดส์ความแม่นยำ , ,
loqs และฟื้นฟูเนื้อเยื่อ spiked parabens .
ครูมวลไอออน r2a ความแม่นยำ
( % RSD ; n = 3 )

ng G − 1 โลด

ng G − 1 loq

( การกู้คืน ( % ) = 3 )
MP 209 , 224 , 135 0.989 5.1 2.02 6.75 99.8% ± 5.1
ตอนที่ 223 , 193 , 238 0.998 4.6 1.05 3.49 96 ± 4.4
PP 193 , 210 , 195 0.998 15.6 1.71 5.68 107 ± 17
BP 210 , 195 , 193 โดย 13 3.75 12.5 113 ± 13
เส้นช่วง 50 – 300 ng ml − 1 .
G Shanmugam et al . / microchemical วารสาร 96 ( 2010 ) 391 – 396 393 คน