2.6. Identification and qualificati

2.6. Identification and qualification of anthocyanins
2.6.1. Preparation of sample extract
The anthocyanins were extracted according to the method reported
by Sarkis, Jaeschke, Tessaro, and Marczak (2013) with some modification.
A 0.5 g was added with 5.0 ml of acidified methanol (methanol:
HCL, 100:1 (v/v)), and then mixed with a vortex mixer for 1 min and
stored overnight at 4 °C and then the supernatant (subsample) was
filtered through a 0.45 μm nylon syringe filter (Whatman, USA) and
injected into the HPLC system for anthocyanin analysis.
2.6.2. Determination of anthocyanin profiles by RP-HPLC–DAD system
The HPLC system consisted of a Shimadzu (Kyoto, Japan) LC-20AC
series pumping system, an SPD-M20A diode array detector and an
SIL-10AD series auto injector. The column was an Apollo C18 (Alltech
Associates, Deerfield, IL, USA) (ø4.6 × 250 mm, 5 μm) protected by an
Inertsil ODS-3 guard column (ø4.0 × 10 mm, 5 μm; GL Science Inc.,
Tokyo, Japan). A 20 μl of each sample was injected on to column. The
elution conditions were described previously by Durst and Wrolstad
(2001) with modification. The mobile phase was solvent A (acetonitrile,
CH3CN) and solvent B (4% phosphoric acid, H3PO4) with the following
gradient: 94% to 75% B from 0 to 65 min, 75% to 94% B from 65 to
70 min, and isocratic at 94% B from 70 to 75 min to equilibrate the
column for the next injection. Spectral data from 200 to 600 nm were
recorded, and the anthocyanin chromatograms were monitored at
520 nm. Operating conditions were as follows: column temperature
40 °C; injection volume, 20 μl; detection at 520 nm; and flow rate at
1.0 ml/min. Quantification was carried out by comparing the retention
times and the spectra with standards. Chromatograms were recorded
and peak areas were used to calculate the concentration of anthocyanins
against the calibration curve of external standards.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การรหัสและคุณสมบัติของ anthocyanins2.6.1 การเตรียมตัวอย่างแยกAnthocyanins จะถูกแยกตามวิธีการรายงานโดย Sarkis, Jaeschke, Tessaro และ Marczak (2013) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่างเพิ่ม 0.5 g กับ 5.0 มิลลิลิตรของเมทานอล acidified (เมทานอล:HCL, 100:1 (v/v)), และจากนั้น ผสมกับผสม vortex สำหรับ 1 นาที และเก็บค้างคืนที่ 4 ° C แล้ว supernatant (subsample) ได้กรองผ่านตัว 0.45 μm ไนล่อนเข็มกรอง (Whatman สหรัฐอเมริกา) และฉีดเข้าไปในระบบ HPLC ในการวิเคราะห์มีโฟเลทสูง2.6.2 การกำหนดโพรไฟล์มีโฟเลทสูงด้วยระบบ RP-HPLC – พ่อระบบ HPLC ประกอบด้วย 20AC-LC ที่ Shimadzu (เกียวโต ญี่ปุ่น)ชุดปั๊มน้ำระบบ ไดโอด SPD-M20A อาร์เรย์จับและหัวฉีด auto ชุด 10AD ภาษาศาสตร์ คอลัมน์ถูก C18 เป็น อพอลโล (Alltechเชื่อมโยง บางนาตราด IL สหรัฐอเมริกา) ได้รับการป้องกัน (ø4.6 × 250 มม. 5 μm) โดยการInertsil ODS 3 รักษาคอลัมน์ (ø4.0 × 10 มม. μm 5 GL วิทยาศาสตร์ Inc.โตเกียว ญี่ปุ่น) Μl 20 ของแต่ละอย่างถูกฉีดเข้าสู่คอลัมน์ ที่elution เงื่อนไขที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ โดยดวร์สทและ Wrolstad(2001) พร้อมปรับเปลี่ยน เฟสเคลื่อนเป็นตัวทำละลายได้ (acetonitrileCH3CN) และตัวทำละลาย B (4% กรดฟอสฟอริก H3PO4) กับต่อไปนี้ไล่ระดับ: 94% ถึง 75% B 0 ไปนาที 65, 75% 94% B จาก 65 ให้นาทีที่ 70 และ isocratic คิด 94% B จาก 70 ถึง 75 นาทีการ equilibrateคอลัมน์สำหรับฉีดหน้า ข้อมูลสเปกตรัมจาก 200 600 nm มีบันทึก และ chromatograms มีโฟเลทสูงถูกตรวจสอบที่520 nm การทำงานมีดังนี้: อุณหภูมิของคอลัมน์40 ° C ฉีดปริมาณ μl 20 ตรวจสอบที่ 520 nm และอัตราการไหลที่1.0 ml/นาที นับถูกดำเนินการ โดยการเปรียบเทียบการเก็บรักษาเวลาและแรมสเป็คตรามาตรฐาน บันทึก chromatogramsและใช้พื้นที่สูงสุดในการคำนวณความเข้มข้นของ anthocyaninsกับเส้นโค้งการปรับเทียบมาตรฐานภายนอก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 การจำแนกชนิดและคุณสมบัติของ anthocyanins
2.6.1 การเตรียมการของกลุ่มตัวอย่างสารสกัด
anthocyanins
สกัดตามวิธีการที่มีการรายงานโดยSarkis, Jaeschke, Tessaro และ Marczak (2013) ที่มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง.
0.5 กรัมที่ถูกเพิ่มเข้ามาด้วย 5.0 มล. ของเมทานอลกรด (เมทานอล:
HCL, 100: 1 (V / v)) และผสมกับเครื่องผสมน้ำวนเป็นเวลา 1
นาทีและเก็บไว้ค้างคืนที่4 องศาเซลเซียสและจากนั้นใส (subsample)
ได้รับการกรองผ่าน0.45 ไมครอนกรองเข็มฉีดยาไนลอน (Whatman สหรัฐอเมริกา)
และฉีดเข้าไปในระบบHPLC สำหรับ การวิเคราะห์ anthocyanin.
2.6.2 การกำหนดรูปแบบ anthocyanin โดย RP-HPLC-DAD ระบบระบบ HPLC ประกอบด้วย Shimadzu (เกียวโตญี่ปุ่น) LC-20AC ชุดระบบสูบน้ำ, ไดโอด SPD-M20A ตรวจจับอาร์เรย์และชุดSIL-10AD หัวฉีดอัตโนมัติ คอลัมน์เป็นอพอลโล C18 (ออลเทคแอสโซซิเดียร์ฟิลด์, อิลลินอยส์, สหรัฐอเมริกา) (ø4.6× 250 มม 5 ไมครอน) ป้องกันโดยคอลัมน์ยามODS-3 Inertsil (ø4.0× 10 มม 5 ไมครอน; GL วิทยาศาสตร์ Inc . กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) 20 ไมโครลิตรของแต่ละตัวอย่างถูกฉีดในคอลัมน์ เงื่อนไขชะถูกอธิบายโดยก่อนหน้านี้และกล้า Wrolstad (2001) มีการดัดแปลง ขั้นตอนถือเป็นตัวทำละลาย A (acetonitrile, CH3CN) และตัวทำละลาย B (4% กรดฟอสฟอรัส H3PO4) มีดังต่อไปนี้การไล่ระดับสี: 94% ถึง 75% B 0-65 นาที, 75% ถึง 94% B จาก 65 ไป70 นาที และ isocratic ที่ 94% B 70-75 นาทีถึงสมดุลคอลัมน์ฉีดต่อไป ข้อมูลสเปกตรัม 200-600 นาโนเมตรได้รับการบันทึกไว้และchromatograms anthocyanin ที่ถูกตรวจสอบที่520 นาโนเมตร สภาพการใช้งานได้ดังนี้คอลัมน์อุณหภูมิ40 ° C; ปริมาณการฉีด 20 ไมโครลิตร; การตรวจสอบที่ 520 นาโนเมตร; และอัตราการไหลที่1.0 มล. / นาที ปริมาณได้ดำเนินการโดยการเปรียบเทียบการเก็บรักษาครั้งและเปคตรัมที่มีมาตรฐาน chromatograms ถูกบันทึกไว้และพื้นที่ยอดเขาที่ถูกนำมาใช้ในการคำนวณความเข้มข้นของanthocyanins กับเส้นโค้งการสอบเทียบมาตรฐานภายนอก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 การจำแนกชนิดและคุณสมบัติของแอนโทไซยานิน
ดูแล . การเตรียมสารแอนโทไซยานิน เป็นสารสกัดตัวอย่าง

ตามวิธีการรายงานโดย sarkis jaeschke tessaro , , , และ marczak ( 2013 ) ที่มีการปรับเปลี่ยน
0.5 กรัม ได้เพิ่ม 5.0 ml ปรับเมทานอล ( methanol :
HCL สามารถ ( v / v ) และจากนั้นผสมด้วยเครื่องผสม . 1 นาทีและ
เก็บไว้ค้างคืนที่ 4 ° C และจากนั้นนำ ( subsample ) คือ
กรองผ่าน 0.45 μ M ไนล่อนเข็มตัวกรอง ( whatman , USA ) และฉีดเข้าไปในระบบ HPLC

สำหรับการวิเคราะห์แอนโธไซยานิน ดาวน์โหลด . การหาปริมาณแอนโทไซยานินโปรไฟล์โดยระบบพ่อ–ๆ
ระบบ HPLC ประกอบด้วย Shimadzu ( โตเกียว , ญี่ปุ่น ) lc-20ac
ชุดระบบสูบน้ำ , เครื่องตรวจจับและ
spd-m20a ไดโอดอาร์เรย์sil-10ad ชุดอัตโนมัติ หัวฉีด . คอลัมน์เป็นอพอลโล ( เพราะ c18
Associates , เดียร์ฟิลด์ , อิลลินอยส์ , สหรัฐอเมริกา ) ( ขึ้น 4.6 × 250 มม. , 5 μ M ) ป้องกันด้วย
inertsil ยาม ods-3 คอลัมน์ ( ขึ้น 4.0 × 10 มม. , 5 μ M ; GL วิทยาศาสตร์ Inc . ,
โตเกียว , ญี่ปุ่น ) 20 μ L ของแต่ละตัวอย่างถูกฉีดในคอลัมน์
ใช้เป็นเงื่อนไขที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ โดยเดอร์ส wrolstad
( 2001 ) และมีการปรับเปลี่ยนเฟสเคลื่อนที่เป็นตัวทำละลาย ( ไน
ch3cn ) และตัวทำละลาย B ( 4 % กรดฟอสฟอริค H3PO4 ) กับ
สีต่อไปนี้ : 94 ถึง 75 % B จาก 0 ถึง 65 นาที 75 % ถึง 94 % B จาก 65

70 นาที และ Isocratic ที่ 94 % B 70 - 75 มินจะทำให้สมดุล
คอลัมน์สำหรับฉีดหน้า ข้อมูลสเปกตรัมจาก 200 ถึง 600 nm เป็น
บันทึก และแอนโธไซยานินกลิ่นถูกตรวจสอบใน
520 nm .เงื่อนไขมีดังนี้ : คอลัมน์ อุณหภูมิ 40 องศา C
; ปริมาณการฉีด 20 μ l ; การตรวจสอบ 520 nm และอัตราการไหลที่
1.0 มล. / นาที ปริมาณกระทำโดยเปรียบเทียบความคงทน
ครั้งและสเปกตรัมด้วยมาตรฐาน กลิ่นพื้นที่สูงสุด และใช้บันทึก
คำนวณความเข้มข้นของแอนโทไซยานิน
กับเส้นปรับเทียบมาตรฐานภายนอก