Procedure The tobacco mesophyll pro

Procedure
The tobacco mesophyll protoplasts used in this study are isolated according to Wu’s method [1]. The plant protoplasts are
prepared as follows:
1. Take fully expanded leaves of tobacco plants grown for 40–60 days (pick thick leaves in a similar growth state) to prepare
the protoplasts.
2. Excise fully expanded leaves and sterilize by rinsing with 75% alcohol for 10 s and 0.1% mercuric chloride for 4 min,
respectively, then wash three to ﬁve times with distilled water. Dry off leaves with sterilized ﬁlter paper.
3. Remove large vein tissues, pile two to four leaves, and cut only the middle part of the leaves into 0.5–1.0 mm strips using a
sharp razor blade without bruising the leaves.
4. Transfer leaf strips quickly and gently into the prepared enzyme (four to six tobacco leaves in 5–10 ml) by dipping both
5.
6.
7.
8.
sides of the strips using a pair of ﬂat-tip forceps, incubate the leaf strips in the dark at 25 Æ 1 C for 3.5 h. The enzyme
solution should turn green after a gentle spiralling motion.
Filter the enzyme solution containing protoplasts after wetting the 100 mesh stainless cell strainer (pore size: 149 mm)
with W5 solution, and centrifuge the ﬁltrate in a 50 ml round-bottomed tube at 79 Â g for 4 min. Remove as much
supernatant as possible without disturbing the protoplasts pellet.
Re-suspend the protoplasts in 5 ml WI by gentle swirling and centrifuge centrifuged at 79 Â g for 4 min. Remove as much
supernatant as possible and re-suspend the protoplasts in 3 ml WI by gentle swirling, and inject 5 ml of 23% (w/v) sucrose
solution into the bottom of centrifuge tube, then centrifuge at 79 Â g for 4 min.
Collect the protoplasts, which is localized in the inter-phase between two solutions into a new 50 ml round-bottomed
tube with addition of WI, and centrifuge at 79 Â g for 4 min. Remove as much supernatant as possible.
Re-suspend the protoplast pellet in WI by gentle swirling. Count the protoplast yield by using a haemocytometer under
10Â objective microscope. Take 15 ml protoplasts suspension to ﬁll the haemocytometer chamber, and view the
protoplasts under a microscope. Focus the microscope on one of the four outer squares in the grid, and count all of the
protoplasts in the four 1 mm corner squares. The density of protoplasts was calculated by using the formula of “the
average protoplast count per square Â104”. The density of protoplasts was adjusted to 2 Â 105 per milliliter of WI.

Procedure
 The tobacco mesophyll protoplasts used in this study are isolated according to Wu’s method [1]. The plant protoplasts are
prepared as follows:
1. Take fully expanded leaves of tobacco plants grown for 40–60 days (pick thick leaves in a similar growth state) to prepare
the protoplasts.
2. Excise fully expanded leaves and sterilize by rinsing with 75% alcohol for 10 s and 0.1% mercuric chloride for 4 min,
respectively, then wash three to ﬁve times with distilled water. Dry off leaves with sterilized ﬁlter paper.
3. Remove large vein tissues, pile two to four leaves, and cut only the middle part of the leaves into 0.5–1.0 mm strips using a
sharp razor blade without bruising the leaves.
4. Transfer leaf strips quickly and gently into the prepared enzyme (four to six tobacco leaves in 5–10 ml) by dipping both
5.
6.
7.
8.
sides of the strips using a pair of ﬂat-tip forceps, incubate the leaf strips in the dark at 25 Æ 1 C for 3.5 h. The enzyme
solution should turn green after a gentle spiralling motion.
Filter the enzyme solution containing protoplasts after wetting the 100 mesh stainless cell strainer (pore size: 149 mm)
with W5 solution, and centrifuge the ﬁltrate in a 50 ml round-bottomed tube at 79 Â g for 4 min. Remove as much
supernatant as possible without disturbing the protoplasts pellet.
Re-suspend the protoplasts in 5 ml WI by gentle swirling and centrifuge centrifuged at 79 Â g for 4 min. Remove as much
supernatant as possible and re-suspend the protoplasts in 3 ml WI by gentle swirling, and inject 5 ml of 23% (w/v) sucrose
solution into the bottom of centrifuge tube, then centrifuge at 79 Â g for 4 min.
Collect the protoplasts, which is localized in the inter-phase between two solutions into a new 50 ml round-bottomed
tube with addition of WI, and centrifuge at 79 Â g for 4 min. Remove as much supernatant as possible.
Re-suspend the protoplast pellet in WI by gentle swirling. Count the protoplast yield by using a haemocytometer under
10Â objective microscope. Take 15 ml protoplasts suspension to ﬁll the haemocytometer chamber, and view the
protoplasts under a microscope. Focus the microscope on one of the four outer squares in the grid, and count all of the
protoplasts in the four 1 mm corner squares. The density of protoplasts was calculated by using the formula of “the
average protoplast count per square Â104”. The density of protoplasts was adjusted to 2 Â 105 per milliliter of WI.

0/5000

จาก: -

เป็น: -

ผลลัพธ์ (ไทย) 1: [สำเนา]

คัดลอก!

ขั้นตอนการ โป mesophyll ยาสูบที่ใช้ในการศึกษานี้จะแยกตามวิธีการของวู [1] มีโปโรงงานเตรียมเป็นดังนี้:1. นำใบยาสูบพืชโต 40 – 60 วัน (รับใบหนาในสถานะการเจริญเติบโตคล้ายคลึงกัน) เพื่อเตรียมความพร้อมที่ขยายทั้งหมดโป2. ภาษีสรรพสามิตเต็มขยายออก และฆ่าเชื้อ โดยการล้างด้วยแอลกอฮอล์ 75% สำหรับ 10 s และคลอไรด์ mercuric 0.1% สำหรับ 4 นาทีตามลำดับ แล้วล้าง 3 ครั้ง ﬁve กับน้ำกลั่น แห้งปิดใบด้วยกระดาษ sterilized ﬁlter3. เอาเนื้อเยื่อหลอดเลือดดำใหญ่ กองใบไม้ 2-4 และตัดเฉพาะส่วนกลางของใบเป็น 0.5 – 1.0 มม.แถบใช้การคมใบมีดโกนไม่ช้ำใบ4. โอนย้ายแถบใบเบา ๆ และรวดเร็วไปยังเอนไซม์เตรียม (สูบบุหรี่ 4-6 ใบใน 5 – 10 ml) โดยจุ่มทั้ง5678ด้านข้างของแผ่นที่ใช้คู่ของ ﬂat แนะนำคีม ฟักแผ่นใบไม้ในมืดที่ 25 C Æ 1 สำหรับ 3.5 h เอนไซม์นี้โซลูชันควรเปิดสีเขียวหลังจากภาพเคลื่อนไหว spiralling อ่อนโยนโซลูชั่นเอนไซม์ประกอบด้วยโปหลังภาวะการเปียกเครื่องร่อนเซลล์สเตนเลส 100 ตาข่ายกรอง (รูขุมขนขนาด: 149 มิลลิเมตร)โซลูชัน W5 และเครื่องหมุนเหวี่ยง ﬁltrate ในท่อแบบกลมยนที่ 50 ml ที่ 79 Â g สำหรับ 4 นาทีเอาออกมากsupernatant ที่สุดโดยไม่รบกวนเม็ดโปใหม่โปการระงับใน 5 ml WI โดยหมุนรอบอ่อนโยน และเครื่องหมุนเหวี่ยง centrifuged ที่ 79 Â g สำหรับ 4 นาทีเอาออกมากsupernatant as possible and re-suspend the protoplasts in 3 ml WI by gentle swirling, and inject 5 ml of 23% (w/v) sucrosesolution into the bottom of centrifuge tube, then centrifuge at 79 Â g for 4 min.Collect the protoplasts, which is localized in the inter-phase between two solutions into a new 50 ml round-bottomedtube with addition of WI, and centrifuge at 79 Â g for 4 min. Remove as much supernatant as possible.Re-suspend the protoplast pellet in WI by gentle swirling. Count the protoplast yield by using a haemocytometer under10Â objective microscope. Take 15 ml protoplasts suspension to ﬁll the haemocytometer chamber, and view theprotoplasts under a microscope. Focus the microscope on one of the four outer squares in the grid, and count all of theprotoplasts in the four 1 mm corner squares. The density of protoplasts was calculated by using the formula of “theaverage protoplast count per square Â104”. The density of protoplasts was adjusted to 2 Â 105 per milliliter of WI.

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:[สำเนา]

คัดลอก!

ขั้นตอนการ
ยาสูบ protoplasts mesophyll ใช้ในการศึกษาครั้งนี้จะแยกตามวิธีการของ Wu [1] protoplasts พืชที่มีการ
จัดเตรียมไว้ดังต่อไปนี้:
1 ใช้ใบขยายตัวได้เต็มที่ของพืชยาสูบปลูก 40-60 วัน (รับใบหนาในการเจริญเติบโตของรัฐที่คล้ายกัน) เพื่อเตรียมความพร้อม
protoplasts.
2 สรรพสามิตใบขยายตัวได้เต็มที่และฆ่าเชื้อโดยการล้างด้วยแอลกอฮอล์ 75% นาน 10 และ 0.1% คลอไรด์เมอร์คิว 4 นาที
ตามลำดับแล้วล้างสามถึง fi และครั้งด้วยน้ำกลั่น แห้งออกใบผ่านการฆ่าเชื้อด้วยไฟกระดาษกรอง.
3 นำเนื้อเยื่อหลอดเลือดดำขนาดใหญ่กอง 2-4 ใบและตัดเฉพาะส่วนตรงกลางของใบเป็น 0.5-1.0 แถบมิลลิเมตรโดยใช้
ใบมีดโกนคมชัดโดยไม่ต้องช้ำใบ.
4 แผ่นใบโอนได้อย่างรวดเร็วและเบา ๆ ในการทำงานของเอนไซม์ที่เตรียมไว้ (4-6 ใบยาสูบใน 5-10 ml) โดยการจุ่มทั้ง
5.
6.
7.
8.
ด้านข้างของแถบการใช้คู่ของชั้นคีมที่ปลาย, ฟักแถบใบ ในความมืดที่ 25 Æ 1 C เป็นเวลา 3.5 ชั่วโมง เอนไซม์
การแก้ปัญหาควรจะเปลี่ยนเป็นสีเขียวหลังจากเคลื่อนไหววนอ่อนโยน.
กรองการแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์ที่มี protoplasts หลังจากเปียก 100 ตาข่ายกรองเซลล์สแตนเลส (ขนาดรูขุมขน: 149 มม)
ด้วยโซลูชั่น W5 และ centrifuge ltrate Fi ใน 50 มลหลอดรอบจุดต่ำสุดที่ 79 กรัมเป็นเวลา 4 นาที ลบเท่า
สารละลายที่เป็นไปได้โดยไม่ต้องรบกวน protoplasts เม็ด.
Re-ระงับการเพาะเลี้ยงใน 5 ml WI โดยหมุนอ่อนโยนและหมุนเหวี่ยงหมุนเหวี่ยงที่ 79 ก. ย 4 นาที ลบมากที่สุดเท่า
ที่เป็นไปได้ใสและ re-ระงับการเพาะเลี้ยงใน 3 มล WI โดยหมุนอ่อนโยนและฉีด 5 ml 23% (w / v) ซูโครส
แก้ปัญหาลงด้านล่างของหลอด centrifuge แล้วปั่นแยกที่ 79 ก. ย 4 นาที .
เก็บ protoplasts ซึ่งเป็นภาษาท้องถิ่นในช่วงระหว่างระหว่างสองโซลูชั่นเข้าใหม่ 50 มลรอบต่ำสุด
หลอดด้วยนอกเหนือจาก WI และ centrifuge ที่ 79 ก. ย 4 นาที ลบใสมากที่สุดเท่าที่เป็นไปได้.
Re-ระงับเม็ดโปรโตพลาใน WI โดยหมุนอ่อนโยน นับผลผลิตโปรโตพลาโดยใช้สไลด์นับเม็ดเลือดภายใต้
กล้องจุลทรรศน์วัตถุประสงค์ 10A ใช้เวลา 15 มลระงับ protoplasts เพื่อ fi LL ห้องสไลด์นับเม็ดเลือดและดู
protoplasts ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ มุ่งเน้นกล้องจุลทรรศน์ที่หนึ่งในสี่สี่เหลี่ยมด้านนอกในตารางและนับทุก
protoplasts ในสี่ 1 มมสี่เหลี่ยมมุม ความหนาแน่นของการเพาะเลี้ยงที่คำนวณโดยใช้สูตรของ "
โปรโตพลานับเฉลี่ยต่อตาราง A104 " ความหนาแน่นของการเพาะเลี้ยงได้รับการปรับให้ 2 105 ต่อมิลลิลิตรของ WI

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:[สำเนา]

คัดลอก!

ขั้นตอน
ยาสูบมีโซฟีลล์เซลล์ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ จะแยกตามวิธีของ Wu [ 1 ] พืชที่พบมีดังนี้

เตรียม 1 . ใช้เวลาอย่างเต็มที่ขยายใบยาสูบที่ปลูก 40 – 60 วัน ( เลือกใบหนาในสถานะการเจริญเติบโตคล้ายกัน ) เพื่อเตรียมต่อ
.
2 สรรพสามิต พร้อมขยายใบ และฆ่าเชื้อด้วยแอลกอฮอล์ 75 % ด 10 และ 01% เมอร์คิวริกคลอไรด์ 4 นาที
ตามลำดับ แล้วล้างสามครั้งจึงได้ด้วยน้ำกลั่น บริการออกใบกระดาษฆ่าเชื้อ lter จึง .
3 เอาเนื้อเยื่อหลอดเลือดดำใหญ่ กองสองถึงสี่ใบ และตัดเฉพาะตรงกลางของใบเป็น 0.5 และ 1.0 มม. แผ่นโดยใช้ใบมีดโกนคมไม่มีรอยฉีกขาด
ใบ .
4การโอนใบรางได้อย่างรวดเร็วและเบา ๆเข้าเตรียมเอนไซม์ สี่ถึงหกใบยาสูบใน 5 – 10 มิลลิลิตร โดยจุ่มทั้ง
5
6
7
8
ข้างของแถบที่ใช้คู่ﬂที่ปากคีบปลายฟักไข่ใบแถบในที่มืดที่อุณหภูมิ 25 C กู้ 1 3.5 ชั่วโมงเอนไซม์
โซลูชั่นควรเปิดสีเขียวหลังจากที่อ่อนโยน
สร้างการเคลื่อนไหวกรองสารละลายเอนไซม์ที่เหมาะสมหลังจาก wetting 100 ตาข่ายกรองสแตนเลส ( เซลล์ขนาดรูขุมขน 149 มิลลิเมตร ) W5
ด้วยโซลูชั่นและแก่นแก้วจึง ltrate ในรอบ 50 ml bottomed หลอดที่ 79 Â G สำหรับ 4 นาที เอาเท่าที่เป็นไปได้โดยไม่ต้องรบกวนนำ

เซลล์เม็ดจะระงับโปรโตพลาสต์ใน 5 ml วีโดยหมุนเหวี่ยงอ่อนโยนและระดับที่ 79 Â G สำหรับ 4 นาที เอาเป็นสูงมาก
เป็นไปได้และระงับโปรโตพลาสต์ใน 3 มิลลิลิตรโดยอ่อนโยนไร้การหมุน และฉีด 5 ml 23 % ( w / v ) สารละลายซูโครส
ลงด้านล่างของหลอด centrifuge , จากนั้น เครื่องÂ 79 กรัม 4 นาทีต่อ
เก็บ ,ซึ่งเป็นภาษาท้องถิ่นในอินเตอร์เฟสระหว่างสองโซลูชั่นเข้าไปใหม่รอบ 50 ml bottomed
หลอดยังของวี และเครื่องÂ 79 กรัมสำหรับ 4 นาที เอาเป็นสูงมากที่สุด จะระงับโปร
เม็ด วี โดย สุภาพ ตก การนับจำนวนผลผลิตโดยการใช้ haemocytometer ภายใต้กล้องจุลทรรศน์Â
10 มี .ใช้เวลา 15 ต่อมิลลิลิตร จึงจะระงับ haemocytometer ห้องและมุมมอง
เซลล์ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ โฟกัสกล้องจุลทรรศน์หนึ่งในสี่นอกในตารางสี่เหลี่ยม และนับของ
พลาสต์ใน 4 1 มม. มุมสี่เหลี่ยม ความหนาแน่นของโปรโตพลาสต์โดยใช้สูตรของ "
นับจำนวนเฉลี่ยต่อตารางเมตรÂ 104 "ความหนาแน่นของเอนไซม์ปรับ 2 Â 105 ต่อมิลลิลิตรของวี

การแปล กรุณารอสักครู่..

ภาษาอื่น ๆ

การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.